氨基甲酸酯分析方法现场培训-waters

氨基甲酸酯分析方法

2004年3月

氨基甲酸酯分析方法

原理：

图1 氨基甲酸酯分析方法中测定的化合物

上图中显示了11个EPA方法531.1分析物的结构。它们依次从反相色谱C18上洗脱。

图2 氨基甲酸酯分析柱后反应的次序

每一个氨基甲酸酯从反相色谱中洗脱后，在较高温度被强碱性溶液（NaOH）水解，释放出醇，CO2(以碳酸盐的方式)以及甲胺。在第二步，甲胺与OPA反应并和巯基乙醇形成一个具有荧光的异氮(杂)茚基衍生物。

注意：请使用最高质量的试剂和溶剂，完全洗净的用于溶液、样品以及溶剂的玻璃器皿。残

留的清洁剂、指纹、香烟雾、呼吸，或者其它任何含有胺或者氨的物质，都可能导致分析中的干扰。

使用氨基甲酸酯分析方法

标样，试剂和溶剂：

氨基甲酸酯标样：

氨基甲酸酯依次洗脱如下：

1．Aldicarb sulfoxide 涕灭威亚砜

2．Aldicarb sulfone 涕灭威砜

3．Oxamyl 杀线威

4．Methomyl 灭多威

5．3-Hydroxycarbofuran 3－羟基克百威

6. Aldicard 涕灭威

7. Propoxur残杀威

8. Carbofuran克百威

9. Carbary 西维因

10. 1-Naphthol 抗蚜威

11. Methiocarb灭虫威

12. BDMC（内标）

化合物2－4以及6－11可得到干燥的结晶性粉末。而所有的化合物都可购得独立的或者已混合的乙腈溶液。

柱后衍生试剂成分

z OPA，邻苯二甲醛，97％，尽量使用级别高的试剂，重结晶级更佳。

z2－巯基乙醇，98％，尽量使用级别高的试剂。

z十水硼酸钠，ACS级。

z片状NaOH，ACS级（低CO2浓度）。

注：氢氧化钠必须处于低CO2浓度下保存。

溶剂和试剂

z乙腈（ACN），HPLC级

z甲醇（MeOH），HPLC级

注：乙腈和甲醇，即使是HPLC级，也可能含有在柱后衍生系统内会与OPA/ME反应的胺或者氨水，形成高荧光吸收杂质。这些衍生物可能造成基线漂移，相应随着溶剂组成而变化，并且/或者可能加大基线噪音。一般说来，如果基线漂移或者噪音随着时间变化而令人不快的话，清洗储液瓶并使用新鲜的溶剂。如果一开始就存在这个问题，那么使用另一批不同批号的溶剂或者尝试另一家供应商的产品。

z水，Milli-Q系统或者HPLC级

z浓HCl

注：仅使用1L装的甲醇和乙腈。直接使用瓶中的溶剂，不要将其转移到其它的储液瓶中。不要用光或者重新装满瓶子。当溶剂瓶几乎用光时，弃去剩余的溶剂（或另作他用）并启用一瓶新的溶剂。在一瓶新的溶剂开封后，乙腈的质量可能会发生变化，所以尽快使用而不要

在开封后长期储存。

标样，试剂和流动相的制备

储备液的制备

将每一个待测物制备成10至100ml的浓度为0.1mg/ml的乙腈溶液，例如，称量10mg待测物溶解于100ml的乙腈中。将其储存于棕色瓶中或者小瓶子，充氮气，避免空气和湿气密闭冰箱保存。除了1-Naphthol 抗蚜威，这些溶液在上述储存条件下至少稳定三个月。1-Naphthol 抗蚜威储备液应该在每次是临用前新制的。

制备标准混合液（25ng/ml或者25ug/l）

1.用HCl将500ml净水酸化到pH3，并用已校正的pH计进行测定。

2.分别吸取25ul的11种标样储备液以及BDMC储备液于同一100ml量瓶中

3.用酸化的水稀释到刻度。完全混合。储存于棕色玻璃瓶中，充氮气，除湿隔绝空气于冷

冻装置中密闭保存。除1-Naphthol 抗蚜威外，其它的溶液至少稳定3个月。

4.每次使用标准混合液中新鲜的部分。每8小时至少运行一次标准溶液来确认样品和试剂

的稳定性。

注意：切勿在室温下储存储备液或者标准液。否则将发生水解且响应会随着时间而降低。

制备柱后反应试剂

对于定量工作，每次新鲜配制500ml的溶液。对于仅定性的工作（例如系统诊断等），如果实验室的要求不是很严格的话，可以延长这些溶液的使用到第2天。

水解用0.05N NaOH

取片状NaOH 1g置于盛有250ml水的500ml量瓶中。旋转使其溶解，用水稀释到刻度，混合均匀。用0.45um的滤膜过滤脱气。滤液转移到一个1L的棕色玻璃储液瓶中。

衍生用OPA/ME

注意：不要使用氨基酸分析所用的OPA/ME溶液。这些溶液的浓度较高并且表面活性剂、抗氧剂，或者其它成分将会影响氨基甲酸酯的分析。

制备OPA/ME试剂

1．储备液（0.05M硼酸钠）：19.1g十水硼酸钠搅拌溶于1L水中；完全溶解可能会花费1小时。储备液可以储存于一个密闭的写好标签的瓶子中以供将来之需。

2．OPA试剂：溶解50mg OPA于5ml甲醇中，缓慢旋转使其溶解后，转移至一个500ml 的量瓶中。用步骤1中的硼酸钠缓冲液稀释到刻度并混合均匀。用0.45um的滤膜过滤并脱气。然后，加入25ul 2－巯基乙醇并缓慢旋转以混合均匀。一旦ME加入后，切勿再将溶液脱气。将溶液置于一个密闭的棕色玻璃储液瓶中，用铝箔包裹避光保存。

准备流动相

将甲醇和乙腈脱气。

系统设置

2690分离单元的设定

建立一个新的方法。

其中关于流动相的设置按照下面的梯度表设定：

时间（min）流速（ml/min）％A（水）％B（甲醇）％C（乙腈）曲线初始 1.500 88.0 12.0 0 -

1

5.3 1.500 88.0 12.0 0

5

5.4 1.500 68.0 1

6.0 16.0

3

14.00 1.500 68.0 16.0 16.0

7

16.10 1.500 50.0 25.0 25.0

6

20.00 1.500 50.0 25.0 25.0

22.00 1.500 88.0 12.0 0.0 5

30.00 1.500 88.0 12.0 0.0 1

脱气方式: 选择 Continuous

柱温：30℃

I/O端口设置：

z Switch 1 ：选择ON。

z Switch 2－4：选择 No Change

z Chart Output（图形输出）：选择 System Pressure（系统压力）

完成上述设定后，保存方法。

氨基甲酸酯分析色谱柱

一根新的氨基甲酸酯分析柱可用甲醇－乙腈（50：50）预先平衡。

柱后反应单元的设定

柱后反应单元的温度：80℃

474检测器的设定

z Atten衰减：16x

z增益：100

z激发波长：339nm

z发射波长：445nm

z响应：Standard

z谱带展宽：18nm

样品的要求

z样品浓度：11个待测物以及BDMC均为25ppb（25ug/L）

z样品进样体积：400ul

试剂管理器单元（柱后衍生泵）的设定

z流速：0.5ml/min

z低压限：0psi