李斯特菌的快速检测方法
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2020/3/12
酶联免疫荧光检测法
采用酶联荧光检测法制成的VIDAS检测伐，可实现全自动 检测，自动培养、选择菌，并分析，全部结果都由机器自动 输出，快速、简便、省时。翁文川等人在VIDAS自动检测仪 器上API Listeria鉴定卡，不仅可以快速检测出李斯特菌而且 还可以李斯特菌属。准确、快速、方便且具有广谱性。
2020/3/12
单克隆抗体酶联免疫法
以后陆续的有利用单克隆抗体ELISA检测的报道，有李 斯特菌属特异表位单克隆抗体，它们所针对的是表位为菌 体表面蛋白质分子量为3000~3800KD，用此表位单克隆 抗体构成的夹心ELISA检测技术能在预增菌后24h报告结 果，且最低检测浓度为5×105个/mL。
2.2 浸P泡C时R间的技选术择检测法
Fluit等建立的一种新型系统磁免疫PCR(MI-PA)检测法,此 法以单核细胞增生性李斯特菌和无害李斯特菌的单抗Mab55包 埋磁珠,直接从样品中分离以上两种细菌,经裂解,李斯特菌释放 DNA,以溶血素O基因和迟发变态反应DTH基因来设计引物,经 30次循环,可得单核细胞增生李斯特菌的PCR产物,然后检测。 此法十分敏感,缩短了时间。
2020/3/12
酶联免疫荧光检测法
1985年，Mclaulin等人采用酶联荧光检测法，将异硫酸荧光素 结合到李斯特菌的两株单克隆抗体上，对李斯特菌进行了直接的荧 光检测，证实了香软干酪等动物性食品中李斯特菌的检测只需2h可 完成。焦新安在1994年研制了3株具有特异表位的单克隆抗体C11、 B18、B5，建立了快速检测李斯特菌的间接免疫荧光和ELISA，节 省了检测的时间。
寡聚核苷酸DNA探针杂交检测法
在1990年时从单核细胞增生性李斯特菌ScoTTA的DNA文库中克 隆出3.Ikb的编码单核细胞增生性李斯特菌溶血素O基因。用Hindn III 对此基因进行酶切,克隆出位于溶血清650bP的片段,以溶血素。基因和 它的650bP的Hnid III消化片段作探针,对单核细胞增生性李斯特菌进 行检测,此基因对该菌表现出高度的特异性和敏感性。
李斯特菌的快速检测方法
专 业：食品科学
目录
快速检测方法
以免疫学为基础的检测法
以分子生物学为基础的检测法
展
望
2
快速检测法
以免疫学为基础的检测法
单克隆抗体酶联免疫法
酶联免疫荧光检测法
免 疫 学
5
单克隆抗体酶联免疫法
在1992年，Besson等人首次发现一株能稳定分泌抗单核 细胞增生性李斯特菌的特异单克隆抗体的细胞株EM-TGI，以 此特异性单克隆建立的夹心ELISA方法能20~24h内检出含 8~10个/g的样品。这是病原性李斯特菌检测中重大突破，第 一次利用酶联免疫方法把单核细胞增生性李斯特菌和非致病性 李斯特菌分开。
果,且时间不超
过10min
11
谢谢老师和同学们批评指正！
Thanks for listening！
2020/3/12
Βιβλιοθήκη Baidu
快速检测法
以分子生物学为基础的检测法
寡聚核苷酸DNA探针杂交 检测法
分子 生物
学
PCR技术检测法 5
寡聚核苷酸DNA探针杂交检测法
对于血清型的李斯特菌在已知某一序列的保守性，可设计出人 工合成的短聚核苷酸。如Datta等人在1988年克隆出单核细胞增生 性李斯特菌β溶血素基因，一个50bp大小的基因片段，把此片克隆 进M13噬菌体载体并测定它的核苷酸序列，依其序列合成它们的4种 寡聚核昔酸探针,以32P标记该探针,经斑点杂交实验证实该探针只与 单核细胞增生性李斯特菌反应,而与其他种的李斯特菌反应呈阴性,表 现出良好的特异性。
PCR技术检测法
自1980年PCR技术发明以来,已得了广泛运用,其主要的原理是用一对寡聚 DNA作为引物。其步骤使要扩增的DNA在较高的温度下变性解链,在较低温度 下退火,然后升高温度复制延伸。如此重复20~30次,就可以扩增DNA,然后检测 。
采用同步PCR技术对单核细胞增生性李斯特菌检测和分类也可解决代PCR 受干扰的问题,同步PCR技术是在RAPD分析技术和COGEDET分析技术上发展 而来的。它是采用任意带有特异基因引物位点RAPD,利用李斯特菌的4条已知 引物HLYA、PRFA、ISP和FLIA气和6个RAPD引物组合来检测单核细胞增生 性李斯特菌。此法可直接从受污染的食品、强化肉汤中检测李斯特菌,快速,灵 敏
展望
1
2
3
目前对李斯 特菌的所有检 测方法,花费的 时间都较多,大 都在20~48h.
因此,有必要 改进或建立一些 新的检测法,如建 立在分子水平上 的无须增菌而直 接检测—流动细 胞计的特异快速 分析
如在免疫学
上利用特异抗
体敏化的免疫
色谱,几滴样品
加到卡片上,肉
眼或普通放大
镜就可看出反
应特征,得出结
酶联免疫荧光检测法
采用酶联荧光检测法制成的VIDAS检测伐，可实现全自动 检测，自动培养、选择菌，并分析，全部结果都由机器自动 输出，快速、简便、省时。翁文川等人在VIDAS自动检测仪 器上API Listeria鉴定卡，不仅可以快速检测出李斯特菌而且 还可以李斯特菌属。准确、快速、方便且具有广谱性。
2020/3/12
单克隆抗体酶联免疫法
以后陆续的有利用单克隆抗体ELISA检测的报道，有李 斯特菌属特异表位单克隆抗体，它们所针对的是表位为菌 体表面蛋白质分子量为3000~3800KD，用此表位单克隆 抗体构成的夹心ELISA检测技术能在预增菌后24h报告结 果，且最低检测浓度为5×105个/mL。
2.2 浸P泡C时R间的技选术择检测法
Fluit等建立的一种新型系统磁免疫PCR(MI-PA)检测法,此 法以单核细胞增生性李斯特菌和无害李斯特菌的单抗Mab55包 埋磁珠,直接从样品中分离以上两种细菌,经裂解,李斯特菌释放 DNA,以溶血素O基因和迟发变态反应DTH基因来设计引物,经 30次循环,可得单核细胞增生李斯特菌的PCR产物,然后检测。 此法十分敏感,缩短了时间。
2020/3/12
酶联免疫荧光检测法
1985年，Mclaulin等人采用酶联荧光检测法，将异硫酸荧光素 结合到李斯特菌的两株单克隆抗体上，对李斯特菌进行了直接的荧 光检测，证实了香软干酪等动物性食品中李斯特菌的检测只需2h可 完成。焦新安在1994年研制了3株具有特异表位的单克隆抗体C11、 B18、B5，建立了快速检测李斯特菌的间接免疫荧光和ELISA，节 省了检测的时间。
寡聚核苷酸DNA探针杂交检测法
在1990年时从单核细胞增生性李斯特菌ScoTTA的DNA文库中克 隆出3.Ikb的编码单核细胞增生性李斯特菌溶血素O基因。用Hindn III 对此基因进行酶切,克隆出位于溶血清650bP的片段,以溶血素。基因和 它的650bP的Hnid III消化片段作探针,对单核细胞增生性李斯特菌进 行检测,此基因对该菌表现出高度的特异性和敏感性。
李斯特菌的快速检测方法
专 业：食品科学
目录
快速检测方法
以免疫学为基础的检测法
以分子生物学为基础的检测法
展
望
2
快速检测法
以免疫学为基础的检测法
单克隆抗体酶联免疫法
酶联免疫荧光检测法
免 疫 学
5
单克隆抗体酶联免疫法
在1992年，Besson等人首次发现一株能稳定分泌抗单核 细胞增生性李斯特菌的特异单克隆抗体的细胞株EM-TGI，以 此特异性单克隆建立的夹心ELISA方法能20~24h内检出含 8~10个/g的样品。这是病原性李斯特菌检测中重大突破，第 一次利用酶联免疫方法把单核细胞增生性李斯特菌和非致病性 李斯特菌分开。
果,且时间不超
过10min
11
谢谢老师和同学们批评指正！
Thanks for listening！
2020/3/12
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快速检测法
以分子生物学为基础的检测法
寡聚核苷酸DNA探针杂交 检测法
分子 生物
学
PCR技术检测法 5
寡聚核苷酸DNA探针杂交检测法
对于血清型的李斯特菌在已知某一序列的保守性，可设计出人 工合成的短聚核苷酸。如Datta等人在1988年克隆出单核细胞增生 性李斯特菌β溶血素基因，一个50bp大小的基因片段，把此片克隆 进M13噬菌体载体并测定它的核苷酸序列，依其序列合成它们的4种 寡聚核昔酸探针,以32P标记该探针,经斑点杂交实验证实该探针只与 单核细胞增生性李斯特菌反应,而与其他种的李斯特菌反应呈阴性,表 现出良好的特异性。
PCR技术检测法
自1980年PCR技术发明以来,已得了广泛运用,其主要的原理是用一对寡聚 DNA作为引物。其步骤使要扩增的DNA在较高的温度下变性解链,在较低温度 下退火,然后升高温度复制延伸。如此重复20~30次,就可以扩增DNA,然后检测 。
采用同步PCR技术对单核细胞增生性李斯特菌检测和分类也可解决代PCR 受干扰的问题,同步PCR技术是在RAPD分析技术和COGEDET分析技术上发展 而来的。它是采用任意带有特异基因引物位点RAPD,利用李斯特菌的4条已知 引物HLYA、PRFA、ISP和FLIA气和6个RAPD引物组合来检测单核细胞增生 性李斯特菌。此法可直接从受污染的食品、强化肉汤中检测李斯特菌,快速,灵 敏
展望
1
2
3
目前对李斯 特菌的所有检 测方法,花费的 时间都较多,大 都在20~48h.
因此,有必要 改进或建立一些 新的检测法,如建 立在分子水平上 的无须增菌而直 接检测—流动细 胞计的特异快速 分析
如在免疫学
上利用特异抗
体敏化的免疫
色谱,几滴样品
加到卡片上,肉
眼或普通放大
镜就可看出反
应特征,得出结