李斯特菌的快速检测方法

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李斯特菌检验及快检技术

李斯特菌检验及快检技术一、引言1.对李斯特菌的介绍2.李斯特菌的危害性3.检测技术的重要性二、李斯特菌检验技术的基本原理1.传统的检测方法2.分子生物学的检测方法三、李斯特菌快检技术的基本原理1.免疫学快检技术2.核酸检测快检技术四、李斯特菌检验技术的应用1.食品中李斯特菌的检测2.体外环境中李斯特菌的检测五、结论1.总结李斯特菌检测技术的优缺点2.展望李斯特菌检测技术未来的发展方向附注：写论文除了需要提纲，还需要深入调研、资料整理、论文撰写等工作。

如需帮助，欢迎发起新的任务。

第一章：引言李斯特菌（Listeria monocytogenes）是一种革兰氏阳性的革兰氏杆菌，是一种人畜共患病菌，能够引起严重的人类食源性感染（Listeriosis）。

该菌可以从土壤、水、粪便中分离出来，同时也可以从生食或未经充分加热的食物中分离出来，因此是食品安全领域中的一个相关热点。

根据世界卫生组织的数据，每年全球有超过2000万人感染李斯特菌，其中约70%的患者死亡，还有很多人因为骨髓炎、中枢神经系统炎症等病症而面临长期的治疗和严重的健康风险。

因此，对李斯特菌的检测技术具有极大的现实意义。

第二章：李斯特菌检验技术的基本原理李斯特菌的检测技术可分为传统的检测方法和现代的分子生物学检测方法两种。

1.传统的检测方法传统的李斯特菌检测方法包括了传统的培养法、浸泡法、热激法、膜过滤法、小样品快速检测等。

其中，传统培养法是最常用的方法之一，通过在特定富营养液中定期供气供养菌株，使其持续繁殖，从而可以在培养皿上观察到典型的李斯特菌菌落。

但是，传统的培养法需要数日至数周才能获得结果，无法满足急速检测的要求，此外，还有可能会因为培养条件不当而遗漏不易培养的物种，或者因污染而致假阳性结果。

2.分子生物学的检测方法分子生物学检测法包括了PCR技术、荧光原位杂交技术（Fluorescence In Situ Hybridization, FISH）、核酸芯片技术、蓝色荧光蛋白标记技术（Green Fluorescent Protein, GFP）和基于质谱技术的全扫描方法等。

单增李斯特氏菌快速检测方法的建立

Ｌｉｔｒａｍｏｏｙｏｅｅ．ｓｅｉｎｃｔｇｎｓ
Ｋｅｒｓ：ｓｅｉｎｃｔｇｎｓｒｐｄｄｔｃｉｎｉｏｈｒｌａｌｃｔｎｙｗｏｄＬｉｔｒａｍｏｏｙｏｅｅ；ａｉｅｅｔｏ；ｓｔｅｍａｍｐｉａｉｉｆｏ
敏度高，适合于单增李斯特氏菌快速筛选检测。关键词：单增李斯特氏菌；快速检测；等温扩增
ＲａｉｔｃｉｎｏｓｅｉｏｃＷｇｅｓｐｄＤｅｅｔｏｆＬｉｔｒａＭｎｏｙｎｅ
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单核细胞增生李斯特氏菌（ｉｅｉｍｎｃｔｅｅ）Ｌｓｒｏｏｙｏｎｓｔａｇ（．ｏ）Ｌｔ．简称单增李斯特氏菌，ｏ是一种重要的人兽共患
及畜牧业的生产带来严重的威胁，以建立快速准确所的检测方法是保证食品卫生安全和有效防治本病的
摘要：建立单增李斯特氏菌的快速检测方法。针对单增李斯特氏菌ｖｒｉＲ基因序列设计特异性引物及探针，建立等

温扩增法，并利用免疫金标试纸条对结果进行检测。１单增李斯特氏茵、用０株６株李斯特菌属菌株及其他食源性致

单核细胞增生性李斯特菌快速检测技术研究

单核细胞增生性李斯特菌快速检测技术研究单核细胞增生性李斯特菌快速检测技术研究引言：单核细胞增生性李斯特菌（Listeria monocytogenes）是一种潜伏在食品中常见的致病菌，能引起严重的食物中毒，威胁着人类的健康与生命安全。

因此，研究和发展一种快速、高效的检测技术对于食品安全至关重要。

本文旨在探讨目前关于单核细胞增生性李斯特菌快速检测技术的研究进展，并为进一步的研究和应用提供参考。

一、单核细胞增生性李斯特菌简介单核细胞增生性李斯特菌是一种革兰氏阳性菌，能在广泛的温度（0-45℃）和pH（4.4-9.6）范围内生长，且具有金属抗药性。

在食品中，该菌可以通过肉类、蔬菜和奶制品等途径传播，使其成为食品安全的重要隐患之一。

由于该菌对常规的煮沸和加热处理具有一定的抵抗能力，因此需借助有效的检测技术对其进行快速、准确的检测。

二、传统检测方法的局限性目前常用的单核细胞增生性李斯特菌检测方法主要包括传统培养方法、蛋白酶结合效应（ELISA）和分子生物学方法等。

然而，这些方法存在着以下局限性：1. 传统培养方法耗时长，需要较长的培养时间才能获得结果，无法快速检测；2. ELISA方法虽然具有较高的灵敏度和特异性，但其需要复杂的样品处理和实验步骤，使得检测过程繁琐；3. 分子生物学方法虽然能够提供较快的检测结果，但其仪器成本高，技术要求较高，限制了其在实际应用中的推广。

三、快速检测技术的研究进展随着科学技术的发展，研究人员不断探索和开发更为快速、准确的单核细胞增生性李斯特菌检测技术。

以下是几种常见的快速检测技术：1. 荧光定量聚合酶链反应（qPCR）技术：该技术以其高效、精确和快速的特点，被广泛应用于单核细胞增生性李斯特菌的检测。

qPCR技术可以快速扩增和定量样品中的特定基因片段，结合荧光定量技术实现李斯特菌的快速检测和定量。

2. 微生物芯片技术：微生物芯片是基于生物芯片技术的一种新型检测平台，可实现对多种菌种的快速识别和检测。

listeria李斯特菌的检验

5
4 12 3
4
5 13 3
6
4 12 2
11(91.67)
4(80) 10(71.4) 3(75)
3(25)
3(60) 11(78.5) 2(50)
各类熟食
总计
50
478
18
57
16(88.9)
47(82.5)
13
12
14
14(77.78)
46(80.7)
11(61.1)
30(52.6)
LM的实验室检测方法
单核细胞增生性李斯特菌分离鉴定
上海市疾病预防控制中心微生物室许学斌
分类学
单核细胞增生性李斯特菌（人兽共患病原菌）
无害李斯特菌
绵羊李斯特菌伊氏亚种（偶致动物发病）
绵羊李斯特菌伦敦亚种威氏李斯特菌斯氏李斯特菌格氏李斯特菌默氏李斯特菌
流行病学
• 单核细胞增生性李斯特菌（简称LM）广泛存在于自然界中，不易被冻融，在土壤、地表水、污水、废水、植物、青储饲料、烂菜中均有存在，易被禽畜类动物食入或在宰杀过程中污染胴体而形成人的食源性疾病污染源；乳及含乳类制品是另一大类较易被污染的食品，近年来，国外加强了对即食类食品（read-toeat）的LM检测。严防“病从口入”。
李斯特菌属生物学特征
• 李斯特菌属为兼性厌氧菌，不产生芽孢，无分支，革兰阳性短杆菌，细胞单生或短链状。 • 最适生长温度为30~37℃，但能在 4℃缓慢生长。
一般培养和生化特征
• 李斯特菌属在较老的或粗糙型培养物上可能呈6~20μm的丝状菌体，在 28℃培养的菌体有1~5根周鞭毛，可运动，在营养琼脂上37℃培养1~2d 为1~2mm菌落，在45℃角透射光斜射下呈蓝灰色。

单核细胞增生李斯特菌污染调查及快速检验方法的比较(精)

单核细胞增生李斯特菌污染调查及快速检验方法的比较余淑冰1 梁景涛1 周强忠1 孔繁钧1 陈庆韶1 李婉霞2单核细胞增生李斯特菌(LM)能引起人畜共患病，致病性强，临床病死率高达30%～70%。

目前，国际上对其研究非常重视，已将其列为90年代食品四大致病菌(致病性大肠菌、肉毒梭菌、亲水气单胞菌和LM)之一。

我国在LM研究及检验起步较晚，经验较少，1994年才颁布该菌的标准检验方法。

为了解食品中LM的污染状况，开展应用快速检验方法，作者于1996年5月至1997年4月对佛山地区的市场销售点，抽取6类不同的食品共309份，作为LM污染调查对象，同时根据现有的检验方法，探索出一种快速可行的检验方法，现报告如下：一、材料与方法1.样本来源：选取佛山市区5个肉菜市场的各个肉档、鱼档、烧腊档、菜农等6类食品，每类食品50份以上。

其中乳和水产品分别由水牛奶厂和水产加工场提供。

6类食品具体包括有：①生肉类：猪肉、猪肉馅、鸡肉、牛肉、羊肉。

②熟肉制品：猪肉、猪肉肠、鸡肉、牛肉。

③乳类：生牛奶、消毒牛奶。

④乳制品：冰淇淋、奶酪、酸奶、果奶。

⑤蔬菜：黄瓜、香菜(去根)、菠菜(去根)、菜花(指花菜)、莲藕。

⑥水产品：鱼、虾。

2.标准菌株：LM(54004和54007)、金黄色葡萄球菌、马红球菌(R.equi)由卫生部食品卫生监督检验所提供。

3.培养基和试剂：本实验室配制，并以有关阳性菌株进行质量控制。

4.试验动物：采用广东省卫生厅医用实验动物所饲养的瑞士小白鼠，选取体重在16～18 g之间作试验用。

5.试剂盒：由生物-梅里埃公司提供，使用时按说明书进行。

6.方法：按国标食品卫生检验方法GB4789.30-94进行。

二、结果1.6类食品检测情况：在受检的6类食品共309份中，检出阳性菌株16份(已由卫生部食品卫生监督检验所鉴定)，总污染率为5.18%(16/309)，其中在生肉、熟肉制品、生牛奶和水产品中均检出LM。

采用LB法检出率为62.5%(10/16)，EB法检出率为37.5%(6/16)，LB法明显高于EB法，见表1。

李斯特氏菌检测方法介绍—科标检测

李斯特氏菌检测李斯特菌（也称李氏杆菌）引起的急性传染病，以败血病为主要症状，伴有内脏器官和中枢神经系统病变。

李斯特菌是1926年英国南非裔科学家穆里在病死的兔子体内首次发现的，为纪念近代消毒手术之父、英国生理学家约瑟夫·李斯特（1827～1912），1940年被第三届国际微生物学大会命名为李斯特菌。

单核细胞增生李斯特氏菌是一种人畜共患病的病原菌。

它能引起人畜的李氏菌的病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和单核细胞增多。

它广泛存在于自然界中，食品中存在的单增李氏菌对人类的安全具有危险，该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一，因此，在食品卫生微生物检验中，必须加以重视。

李斯特菌在环境中无处不在，在绝大多数食品中都能找到李斯特菌。

肉类、蛋类、禽类、海产品、乳制品、蔬菜等都已被证实是李斯特菌的感染源。

李斯特菌中毒严重的可引起血液和脑组织感染，很多国家都已经采取措施来控制食品中的李斯特菌，并制定了相应的标准。

科标检测在微生物检测领域拥有丰富的经验，可以针对食品、医药、化妆品、农产品、一次性产品以及工业产品等进行微生物检测以及产品微生物污染分析，为客户提供快速、高效、权威的第三方微生物检测服务，保证产品质量安全，专业得到了国内、国际知名企业的广泛认可。

实验步骤1. 增菌培养将未开封的测试片贮藏在≤8℃的环境下，并在包装上标示的有效期内使用。

在高湿度的地方，最好在使用前将测试片回复到室温。

取回的样品应在4℃下处理、存放和运送，如果是冷冻样品，则在检验前要保持冷冻状态。

取25mL液体或25g半固体或固体样品放入含有225mL无选择性试剂增菌肉汤（EB）的均质杯中进行均质，然后转入三角瓶中，30℃培养4h，加入选择性试剂吖啶黄素、萘啶酮酸和放线菌酮，继续培养20h和44h.。

2. 分离共培养24h和48h后，取EB培养物分别在OXA和LPM或加七叶苷/Fe3 LPM琼脂平板上划线。

金标试纸法快速检验李斯特氏菌探讨

［摘
要】章选用金标试纸法作为李斯特菌的快速筛选方法，加快检验速度，方便商品流通，用此方法对４文Ｏ份进
Ｖ的鸡肉、猪肉、牛肉及鱼类进行了单增李斯特氏菌检测，并与国标方法、ＳＩ ” Ｎ方法进行比较，并参考了食品微生１
物实验室工作指南，得出的结果是采用金标试纸法检验李斯特菌快速、准确、方便。
3讨论一表6本试剂盒对不同浓度的增菌液的检验情况tab6examinmionbythiskitondifferentenrichmentfluidswithdifferentlevelsofconcentration接种量cfu?ml结果550500未接种李斯特氏菌1从表l3可以看出gb方法和sn方法检验操作复杂耗时长工作量大效率低且自炽光容易对眼造成疲劳增加人为误差易造成漏检而试剂盒可操作性强操作方便检验结果较直观且准确取6滴约l35此灭活后的二次增茵液加入李斯特检测条中1520min即可观察结果无需平板分离比传统方法缩短一半的时间筛选出李斯特茵阴性样品减轻工作量提高工作效率加快商品的流通
修订食品安全法规时把单核细胞增生李斯特氏菌纳入法规强
１实验部分
１１材料．
１１１培养基．．
Ｒｖａｅｅｌ李斯特菌快速检测试剂盒购自广州市诺森生物技术有限公司（ＡＣ认可）ＡＯ，由美国ＮＥＯＧＥ公司生产；牛津Ｎ
［关键词】李斯特氏菌；测试纸片；快速；准确；方便
［分类号１６２７中图０５．［标识码】文献Ａ［编号］ｏ７１６（０８０．１２０文章１ｏ．８５２０）９０．３３

李斯特菌及其快速检测

ｌｔｓｏｅｏｏｂｍｉａｅｂｔａｂａｉｔｎＤｐｒｎｆｒｈｇｅｅｃｏｓＴｉａｉｅｓｍｍａｚｓｔｅｐｙｉｏｉａａｄｂｏｉｄａｎｆｏｄｏｄｓｓａｅｙＳｎｔｉｅａｍｅｔｙｍｃｄｔｔｎ．ｈｒｃｕｓｅｆｅｃｒｉａｏｔｏｉｅｉｓｔｌｉｒｅｈｓｌｇｃｌｉ— ｈｏｎ
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维普资讯
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Ｖ１１ｏ３总７）ｏ．８Ｎ．（２
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（南农业大学食品科学学院西
摘要
李斯特菌是一种能引起人兽共患性食源性致病菌之一。近年来，许多国家，被列为卫生部门重点检测的几种食在它

单核增生李斯特氏菌检测概述

单核增生李斯特氏菌检测概述单核增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）是一种革兰氏阳性的致病菌，能够在低温下生存繁殖，并在恶劣环境中形成生物被膜，使其对抗不良条件。

该菌可引起人类的李斯特菌病（Listeriosis），也是一种可以通过食品传播的重要病原体。

李斯特菌病在免疫功能低下的人群中很容易引起严重感染，包括孕妇、老年人、免疫抑制患者和新生儿。

检测单核增生李斯特氏菌的方法主要包括传统的培养方法和现代的分子生物学方法。

1.传统培养方法传统的培养方法是检测单核增生李斯特氏菌的主要方法之一、常用的培养基包括PALCAM（Polymyxin, Acriflavine, Lithium chloride and Cycloheximide）和OXOID Listeria Selective Agar等。

培养温度通常在30-37℃之间，因为单核增生李斯特氏菌可以在低温下生长。

在培养过程中，从食品样品或其他可能受污染的样品中提取菌落，并在培养基上进行培养。

培养时间通常为1-2天，培养过程中需要注意去除其他菌落的干扰。

2.分子生物学方法分子生物学方法是现代检测单核增生李斯特氏菌的常用方法，主要包括聚合酶链反应（PCR）和实时荧光定量PCR等。

这些方法的优势在于其高度敏感性和特异性。

通过检测单核增生李斯特氏菌特有的基因或序列，可以快速准确地鉴定与检测其存在。

3.培养与分子生物学相结合的方法为了更好地检测单核增生李斯特氏菌，有些方法将传统培养与分子生物学相结合。

这种方法通常先进行培养，然后使用PCR或实时荧光定量PCR等技术进行进一步检测和鉴定。

这种方法较为耗时，但能够进一步提高检测的准确性。

需要注意的是，由于单核增生李斯特氏菌能够在低温下生存，因此在食品或样品中的检测非常重要。

常见的食品样品包括生肉、海鲜、冷冻食品、奶制品等。

对于食品企业来说，建立完善的食品安全管理体系和进行规范的监测是防止单核增生李斯特氏菌传播的重要措施。

李斯特菌检验及快检技术

（ＭＦＬＰ）的方法、欧盟食品安率。快速检测方法主要包括以下三联荧光分析法（ＥＬＦＡ）、金标免等检测体系大类检测技术。
析技术和流式细胞技术等。
ｎ＝５，ｃ＝０，０
６６ｌ《质量与认证》２０１５·６
（ＧＢ４７８９）和检验检疫行业标研究和产品认证体系相对成熟，已与传统方法的检测结果无显著性差
准（ＳＮ）、国际化标准化组织开发出各种快检系统和自动化仪别。
动力试验；染色镜检（革兰氏染色、典型运动）；生化特性（ＭＲ＿ＶＰ、糖发酵）；溶血试无验；协同溶血；或生化鉴定试剂盒或全自动微生
物生化鉴定系统
李斯特菌极新西兰货架期长的冷藏食品
其他即食食品
易污染食品，其中国香港冷藏食品（冷凝食品除外）或婴儿食品
０／２５ｇ０／２５１￣
０／２５ｇ＜１ＯＯＣＦＵ／ｇ０／２５ｇ
不适用不适用
中对冷藏食品和中国大陆即食肉制品
■■＿
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检测
Ｔｅｓｔ
『＿］
李斯特茵检验及快检技术
文／陶文靖
一一一一
一一一一
。
菌髓生一
李斯特茵广泛存在于环境中，即食食品的危害最为严重，各国在很多食品中均有检出，该菌在低均制定了食品中李斯特菌的限量

李斯特菌菌落特征

李斯特菌菌落特征李斯特菌是一种革兰氏阳性菌，可以引起人类和动物的严重疾病，如李斯特菌感染症。

为了更好地了解李斯特菌，我们需要了解它的菌落特征。

一、李斯特菌的生长环境1.温度：李斯特菌可以在4℃至45℃之间生长，但最适宜生长温度为30℃至37℃。

2.酸碱度：李斯特菌可以在pH值为5.5至9.6之间生长，但最适宜生长pH值为6.0至8.0。

3.水分：李斯特菌需要适量的水分才能生长。

二、李斯特菌的形态1.形态：革兰氏阳性球形细菌。

2.大小：直径约0.5至2微米。

3.排列方式：单个或成对出现。

三、李斯特菌的营养需求1.碳源：葡萄糖、果糖、甘露糖等。

2.氮源：酵母提取物、肉汤等。

3.无机盐：钠盐、钾盐等。

四、李斯特菌的菌落特征1.形态：李斯特菌的菌落呈灰白色，边缘整齐，中央微凹陷。

2.大小：直径约1至3毫米。

3.质地：菌落质地柔软，表面光滑。

4.透明度：菌落透明度较高。

5.臭味：无明显臭味。

五、李斯特菌的检测方法1.培养基：常用的培养基有LPM（Lithium Phenylacetate Mannitol）和Oxford Agar等。

2.检测方法：（1）直接涂片法：将样品涂在培养基上，观察是否有李斯特菌生长。

（2）富集法：将样品加入富集液中，在一定温度下进行预培养，然后将预培养液接种在培养基上，观察是否有李斯特菌生长。

综上所述，了解李斯特菌的生长环境、形态、营养需求和菌落特征对于预防和控制李斯特菌感染症具有重要意义。

同时，在实验室中采用合适的检测方法可以快速准确地检测出李斯特菌。

李斯特菌检验及快检技术的研究报告

李斯特菌检验及快检技术的研究报告李斯特菌是一种被广泛认为对人体有害的食品中毒病原菌，其分布广泛且传染性较强。

因此，在食品安全控制中尤为重要。

本文主要介绍李斯特菌的检验方法和快检技术的最新进展。

一、李斯特菌的检验方法（一）传统培养法传统的李斯特菌检测方法是通过样品的预处理、富集和分离步骤来完成的。

李斯特菌需要在富集培养基中生长，通常选择一种或多种具有选择性和增菌性的富集培养基，如LPM（리스테리아\r모노사이토제식\r보피드학）和HWA（하모니방법）等。

在此基础上，使用不同的培养基和方法，如PALCAM（Polymyxin A、Acriflavine、Lithium Chloride、Ceftazidime、Aesculin、Mannitol）或Oxford等培养基，可以有效地筛选和鉴定李斯特菌。

（二）分子生物学检测法分子生物学技术对于敏感性和特异性都要求更高，因此被广泛应用于李斯特菌检测。

PCR（聚合酶链式反应）是其中的一个典型应用，它可以在分子水平上鉴定李斯特菌，并且具有快速、灵敏、特异的优势。

与传统的培养方法相比，PCR可以在几个小时内从食品病原菌中检测出李斯特菌，同时避免了富集培养的步骤，具有高度的可重复性和快速性。

二、快速检测技术的研究进展由于李斯特菌的高度危害性和迅速传播性，快速检测技术在食品安全保障方面变得至关重要。

目前，研究者正在寻找各种快速检测方法，以检测李斯特菌的存在和数量。

（一）基于拉曼光谱的检测技术近年来，拉曼光谱技术已经成为基于光谱学的分析方法的重要应用。

对于肉类、水果、蔬菜等样品等食品，无需处理即可直接检测李斯特菌。

使用Raman光谱技术可以获得高质量的特征光谱，并且具有快速、无损伤、可重复性高的优点，因此被视为一种有前途的李斯特菌检测方法。

（二）基于表面增强拉曼光谱的检测技术通过在样品表面添加纳米颗粒，可以增强红外或拉曼光谱的信号，从而提高检测灵敏度。

基于表面增强拉曼光谱技术的引入，为李斯特菌检测技术的集成光谱学提供了新的方法。

李斯特菌检测方法

李斯特菌检测方法
李斯特菌检测方法包括传统的培养方法和分子生物学方法。

传统的培养方法包括：
1. 食物中毒患者粪便、脑脊液、血液等标本的培养：将标本接种于含有富营养的培养基中，如PALCAM、Fraser等培养基，经过24-48小时的培养，观察是否出现李斯特菌的生长。

2. 食品和环境样品的培养：将样品接种于含有富营养的培养基中，如OXOID Brilliance Listeria Agar、PALCAM等培养基，经过24-48小时的培养，观察是否出现李斯特菌的生长。

分子生物学方法包括：
1. PCR检测：通过PCR扩增李斯特菌的DNA序列，检测样品中是否存在李斯特菌。

2. 实时荧光PCR检测：利用实时荧光PCR技术，通过检测PCR反应体系中荧光信号的变化，快速、准确地检测样品中的李斯特菌。

3. 基因芯片检测：利用基因芯片技术，检测样品中李斯特菌的DNA序列，快速、高通量地检测李斯特菌。

4. 免疫学检测：利用抗体对李斯特菌进行检测，包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、荧光免疫分析（FIA）等方法。

李斯特菌国标检测方法

李斯特菌（Listeria monocytogenes）是一种常见的食品中毒致病菌，因此针对食品中的李斯特菌进行检测具有重要意义。

以下是常见的李斯特菌国际标准检测方法：
1.ISO 11290-1和ISO 11290-2标准：这是国际上普遍采用的李斯特菌检测方法标准。

ISO
11290-1标准适用于从食品中检测李斯特菌，而ISO 11290-2标准适用于从环境样品中检测李斯特菌。

这两个标准包括了样品的处理、富集培养、筛选培养和鉴定等多个步骤，具有较高的检测灵敏度和准确性。

2.FDA-BAM方法：美国食品药品监督管理局（FDA）发布了一系列的BAM（Bacteriological
Analytical Manual）方法，其中包括了用于李斯特菌检测的方法。

这些方法通常与ISO 标准方法类似，但在一些具体操作步骤上可能会略有不同。

3.PCR法：聚合酶链式反应（PCR）是一种快速、灵敏的李斯特菌检测方法，可以在较短
的时间内得出检测结果。

PCR方法已被广泛用于食品和环境样品中的李斯特菌检测。

4.基于质谱技术的检测方法：质谱技术如MALDI-TOF质谱法也被用于李斯特菌的快速鉴
定和检测。

需要注意的是，针对不同的样品类型和具体要求，可能会选择不同的检测方法和标准。

在进行李斯特菌的检测时，建议按照相关的国际标准或当地法规要求进行操作，并严格遵循相应的实验室操作规程。

单核细胞增生李斯特菌三种检测方法的比较

ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆＴｈｒｅｅＭｅｔｈｏｄｓｏｆＬｉｓｔｅｒｉａｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓＤｅｔｅｃｉｔｏｎ
ＺＨＡＮＧＸｕａｎｒｏｎｇ，ＹＡＮＪｕｎ，ＬＩＷｅｎｌｏｎｇ，ＨＯＵＭｉｎ，ＪＩＡＮＧＶｕｊｉａ，ＢＵＳｈｕ，ＬＩＧｕｉｍａｎ
高、特异性强、快速高效和低成本，适合基层实验室应急检测和现场监测使用。
［关键词］国标法；ＬＡＭＰ；ＰＣＲ；单核细胞增生李斯特．５［文献标志码］Ａ［文章编号］１６７２ — ２３４５（２０１３）０６ — ００３８ — ０５
单核细胞增生李斯特菌三种检测方法的比较
张垣榕，颜军，李文龙，侯敏，蒋玉佳，卜舒，李桂满
（昆明市疾病预防控制中心，昆明６５０２２８）
［摘要］目的：通过比较国标法、ｒｅａｌ — ｔｉｍｅＰＣＲ法￣ＺＬＡＭＰ方法，得到适合基层实验室快速检测单核细胞增生李斯特菌的方法。方法：分别用国标法、ｒｅａｌ — ｔｉｍｅＰＣＲ法和环介导的等温扩增（１ｏｏｐ — ｍｅｄｉａｔｅｄｉｓｏｔｈｅｒｍａｌａｍｐｌｉｉｆｃａｔｉｏｎ，ＬＡＭＰ）法检测李斯特菌，并进
ＧＢｌａｗ，ｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲａｎｄＬＡＭＰｗｅｒｅａｄｏｐｔｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔＬＭ，ｔｈｅｎ，ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｗｅｒｅｅｖａｌｕａｔｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｔｈｅｔｈｒｅｅｍｏｔｈｏｄｓｗｅｒｅｑｕｉｔｅｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ．ＴｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓｏｆＧＢｌａｗｔｏｏｋ５ｔｏ７ｄａｙｓ．Ｗｈｉｌｅｔｈｅｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲｒｅｑｕｉｒｉｎｇｈｉｇｈｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓａｎｄｃｏｓｔｔｏｏｋ２．５ｄａｙｓ．ＬＡＭＰｍｅｔｈｏｄ，ｒｅｑｕｉｉｒｎｇｌｏｗｅｘｐｅｉｒｍｅｎｔａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓａｎｄｃｏｓｔ，ｔｏｏｋｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅａｓｔｈｅｒｅａｌ－ｔｉｍｅＰＣＲ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅＬＡＭＰａｓｓａｙｗａｓａｓｅｎｓｉｔｉｖｅ，ｓｐｅｃｉｉｆｃ，ｒａｐｉｄａｎｄｅｃｏｎｏｍｉｃａｌｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＬＭ，

一种快速检测单增李斯特菌的双重PCR方法

一种快速检测单增李斯特菌的双重PCR方法探讨检测新鲜海螺样品中单增李斯特菌的双重PCR快速检测方法。

基于单增李斯特菌hlyA基因和李斯特菌属的16sRNA基因分别合成两对引物，对影响PCR的主要因素进行优化，最终确定同时检测单增李斯特菌两个特异性基因的双重PCR最佳反应体系及条件，该方法对于纯培养物的最低检出限为102CFU/mL，模拟污染海螺样品的检测限为8CFU/g。

标签：单增李斯特菌；双重PCR；海螺样品本工作将单增李斯特菌最重要的毒力因子-编码溶血素的hlyA基因，与李斯特菌属16sRNA基因同时作为单增李斯特菌的检测指标，将双重PCR方法与选择性增菌法相结合，旨在建立一种快速灵敏检测单增李斯特菌的双重PCR方法。

1 材料与方法1.1 材料1.1.1 菌种单增李斯特菌标准株由省疾病预防控制中心提供；大肠杆菌（Escherichia coil）、沙门氏菌（Salmonella）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、产气杆菌（Aerobacter aerogenes）和伤寒杆菌（Salmonella typhi）为本实验室保存菌株。

1.1.2 试剂李斯特氏菌显色培养基、单增李斯特菌成套生化鉴定管、胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂（TSA-YE）、李氏增菌肉汤LB1、萘啶酮酸、吖啶黄素青岛高科园海博生物有限公司；细菌基因组DNA提取试剂盒、DNA Marker、溶菌酶、蛋白酶K、RNaseA以及PCR相关试剂北京天根生化有限公司。

1.1.3 引物序列根据文献[1]以单增李斯特菌hlyA基因和李斯特菌属的16sRNA基因作为靶基因分别合成两对特异性引物，所用引物序列见表一，引物由北京六合华大基因科技股份有限公司合成。

1.1.4 仪器VersaDoc凝胶成像仪美国伯乐；PCR扩增仪美国伯乐；JM-250电泳仪大连捷迈科贸有限公司；D-37520高速冷冻离心机德国Thermo公司。

基于CRISPR-Cas13的单增李斯特菌RNA快速检测方法的建立

基于CRISPR-Cas13的单增李斯特菌RNA快速检测方法的建立曾红棱，张婷，邓锐杰，任尧，贾利蓉（四川大学轻工科学与工程学院，四川成都 610065）摘要：为实现食品中单增李斯特菌污染的快速检测，本研究构建了一种基于CRISPR-Cas系统和Broccoli适配体的RNA均相检测技术。

利用Cas 13与crRNA锚定序列结合形成识别元件crRNA-Cas13复合物，靶标RNA存在时可激活Cas 13的非特异性RNase 活性，并利用点亮型RNA适配体Broccoli作为信号探针，监测crRNA此-Cas13的活化状态。

荧光值的变化与单增李斯特菌浓度存在线性关系,利用来检测单增李斯特菌。

本研究所构建的检测可在30 min内完成对于单增李斯特菌的的识别与检测，检出限为148 CFU/mL，对细菌具有良好的检测特异性，可区分大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌和蜡样芽孢杆菌。

在牛奶模型中单增李斯特菌的加标回收率为95.15%~97.99%。

该方法具有较好的灵敏度、特异性，可直接靶向检测致病菌RNA，无需逆转录、PCR扩增和核酸标记，简化了实验流程，对于实现食品中单增李斯特菌的现场检测及生物安全控制具有重要意义。

关键词：单增李斯特菌；CRISPR- Cas13；快速检测；食品安全文章篇号：1673-9078(2021)05-256-261 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2021.5.0113 Establishment of A Rapid RNA Detection Method for Listeriamonocytogenes Based on CRISPR-Cas13ZENG Hong-ling, ZHANG Ting, DENG Rui-jie, REN Y ao, JIA Li-rong(College of Biomass Science and Engineering Sichuan University, Chengdu 610065, China) Abstract: In order to realize the rapid detection of Listeria monocytogenes contaminated in food, a homogeneous RNA detection technology based on the CRISPR-Cas system and Broccoli aptamer was constructed in this study. Cas 13 was combined with the crRNA anchor sequence to form crRNA-Cas13 complex as a recognition element. The presence of target RNA activated the non-specific RNase activity of Cas13, and the light-up RNA aptamer Broccoli was used as the signal probe to monitor the activation state of crRNA-Cas13. There is a linear relationship between the change of fluorescence value and the concentration of Listeria monocytogenes, which is used to detect Listeria monocytogenes. The process for identification and detection of Listeria monocytogenes can be completed within 30 minutes with a detection limit of 148 CFU/mL. This method has good detection specificity for bacteria and can distinguish E. coli, S.enterica, Salmonella typhimurium and B. cereus. The recovery rate was 95.15%~97.99% in the milk model samples spiked with Listeria monocytogenes. Therefore, this method has good sensitivity and specificity, and can directly target the pathogen RNAs without reverse transcription, PCR amplification and nucleic acid labeling, which simplifies the experimental process and is of great of significance for realizing on-site detection and biosafety control of Listeria monocytogenes in food.Key words:Listeria monocytogenes; CRISPR- Cas13; rapid detection; food safety引文格式：曾红棱,张婷,邓锐杰,等.基于CRISPR-Cas13的单增李斯特菌RNA快速检测方法的建立[J].现代食品科技,2021,37(5):256-261, +309 ZENG Hong-ling, ZHANG Ting, DENG Rui-jie, et al. Establishment of a rapid RNA detection method for Listeria monocytogenes based on CRISPR-Cas13 [J]. Modern Food Science and Technology, 2021, 37(5): 256-261, +309收稿日期：2021-02-01基金项目：国家自然科学基金项目（22074100；31701565）；成都市科技项目（2019-YF05-01380-SN）作者简介：曾红棱（1997-），女，硕士，研究方向：食品科学通讯作者：贾利蓉（1972-），女，博士，教授，研究方向：食品科学、果蔬加工及贮藏、功能性食品领域基础研究、应用技术及产业化研究单增李斯特菌（L. monocytogenes ）是一种重要的食源性致病菌，其广泛存在于土壤、植物、水，人及动物粪便中，主要污染食品基质为肉类、熟食、乳制品及海鲜类食品[1]，感染可导致败血症，脑膜炎，肠胃炎和流产[2]，其在冷藏温度和高盐浓度（10% NaCl ）下仍能保持生存和增长[3]，因此，单增李斯特菌污染对于食品安全及人类健康皆构成了巨大威胁。

肉中单核细胞增生李斯特菌PCR快速检测方法建立

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李斯特菌血常规的化验指标

李斯特菌血常规的化验指标李斯特菌是一种常见的细菌，也是一种可以引起严重疾病的病原菌。

李斯特菌感染可以导致李斯特菌病，这种疾病可能会影响人体的多个器官系统，尤其是对于免疫系统较弱的人群来说，李斯特菌病可能是致命的。

因此，对于疑似感染李斯特菌的患者进行快速的检测和诊断非常重要。

血常规是一种常见的检测方法，可以通过检测血液中的各种指标来判断人体的健康状况。

对于疑似感染李斯特菌的患者，血常规也可以提供一些有用的信息。

下面就来介绍一下李斯特菌血常规的化验指标。

1. 白细胞计数白细胞计数是血常规中最基础的一个指标，可以反映人体免疫系统的活跃程度。

对于疑似感染李斯特菌的患者，白细胞计数可能会升高，因为免疫系统正在积极地对抗病菌。

但是，白细胞计数升高并不一定意味着感染了李斯特菌，也可能是其他原因导致的。

2. 中性粒细胞计数中性粒细胞是一种重要的免疫细胞，可以吞噬和消灭病菌。

中性粒细胞计数也可以反映免疫系统的活跃程度。

对于疑似感染李斯特菌的患者，中性粒细胞计数可能会升高，因为中性粒细胞正在积极地对抗病菌。

但是，中性粒细胞计数升高并不一定意味着感染了李斯特菌，也可能是其他原因导致的。

3. C-反应蛋白C-反应蛋白是一种炎症指标，可以反映人体炎症反应的程度。

对于疑似感染李斯特菌的患者，C-反应蛋白可能会升高，因为病菌感染会引起炎症反应。

但是，C-反应蛋白升高并不一定意味着感染了李斯特菌，也可能是其他原因导致的。

4. 血小板计数血小板是一种重要的血液成分，可以促进血液凝固和止血。

对于疑似感染李斯特菌的患者，血小板计数可能会降低，因为病菌感染会导致血小板减少。

但是，血小板计数降低并不一定意味着感染了李斯特菌，也可能是其他原因导致的。

5. 肝功能指标肝功能指标可以反映肝脏健康状况，包括肝酶、总胆红素、直接胆红素等指标。

对于疑似感染李斯特菌的患者，肝功能指标可能会异常，因为李斯特菌感染可能会影响肝脏功能。

但是，肝功能指标异常并不一定意味着感染了李斯特菌，也可能是其他原因导致的。