血清总蛋白测定(双缩脲试剂法)
总蛋白实验测定实验报告
一、实验目的1. 掌握双缩脲试剂法测定血清总蛋白的原理和方法；2. 熟悉实验操作步骤，提高实验技能；3. 了解血清总蛋白的临床意义及检测方法。
二、实验原理血清总蛋白（Total Protein，TP）是指血液中所有蛋白质的总和，包括白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原等。
双缩脲试剂法是一种常用的蛋白质定量分析方法，其原理是蛋白质分子中的肽键在碱性溶液中能与铜离子发生双缩脲反应，生成紫红色络合物。
该络合物在540nm处的吸光度与蛋白质含量在一定范围内呈线性关系，通过测定吸光度可计算出蛋白质含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）血清样本：采集患者空腹静脉血，分离血清；（2）双缩脲试剂：硫酸铜、酒石酸钾钠、碘化钾；（3）NaOH溶液：6.0mol/L；（4）蛋白质标准液：60～70g/L；（5）试管、移液器、分光光度计等。
2. 仪器：（1）分光光度计；（2）恒温水浴锅；（3）移液器；（4）试管架。
四、实验步骤1. 标准曲线的绘制：（1）取6支试管，分别加入0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL蛋白质标准液；（2）向各试管中加入6.0mol/L NaOH溶液1.5mL；（3）向各试管中加入双缩脲试剂A液1.0mL；（4）混匀，室温放置10分钟；（5）向各试管中加入双缩脲试剂B液4.0mL；（6）混匀，室温放置10分钟；（7）以空白管调零，在540nm波长下测定吸光度；（8）以蛋白质浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 血清总蛋白的测定：（1）取血清样本0.5mL，按照步骤1的操作进行测定；（2）以标准曲线为依据，计算血清总蛋白含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：根据实验数据绘制标准曲线，计算线性回归方程。
2. 血清总蛋白测定：根据标准曲线，计算血清总蛋白含量。
3. 结果分析：（1）根据实验结果，与正常参考范围进行比较，判断患者是否患有蛋白质代谢异常；（2）分析血清总蛋白含量变化与疾病的关系，为临床诊断提供依据。
生化总蛋白实验报告
1. 理解生化总蛋白测定的原理和意义。
2. 掌握双缩脲试剂法测定血清总蛋白的操作步骤。
3. 学习如何通过实验结果分析血清总蛋白的含量及其临床意义。
二、实验原理血清总蛋白的测定通常采用双缩脲试剂法。
该法基于蛋白质分子中的肽键在碱性条件下与铜离子（Cu2+）反应，生成紫红色的络合物。
紫红色络合物的颜色深浅与蛋白质的含量成正比，通过比色法可以定量测定蛋白质的含量。
三、实验材料1. 实验试剂：- 小牛血清- 6.0mol/L NaOH 溶液- 双缩脲试剂（包括硫酸铜、酒石酸钾钠、碘化钾）- 标准蛋白质溶液- 比色皿- 移液器- 离心机- 吸管- 酶标仪2. 实验仪器：- 恒温水浴箱- 移液器- 离心机- 酶标仪1. 样品制备：取一定量的血清样品，按照要求进行稀释。
2. 标准曲线制作：取标准蛋白质溶液，按照试剂说明书进行稀释，制备一系列不同浓度的标准溶液。
将标准溶液分别加入比色皿中，加入适量的双缩脲试剂，混匀后放入恒温水浴箱中反应一定时间。
3. 样品测定：将制备好的血清样品按照步骤2进行操作。
4. 比色：将反应后的样品放入酶标仪中，在特定波长下测定吸光度。
5. 数据处理：根据标准曲线和样品的吸光度，计算样品中蛋白质的含量。
五、实验结果1. 标准曲线的制作：通过绘制标准曲线，得到吸光度与蛋白质浓度的关系。
2. 样品测定：根据标准曲线和样品的吸光度，计算样品中蛋白质的含量。
六、讨论和分析1. 实验原理：双缩脲试剂法测定血清总蛋白是一种常用的方法，具有操作简便、准确度高等优点。
2. 实验结果分析：通过实验结果可以了解样品中蛋白质的含量，从而评估样品的蛋白质水平。
3. 临床意义：血清总蛋白的测定在临床医学中具有重要意义，可以用于评估患者的营养状况、肝功能等。
七、注意事项1. 实验操作过程中应严格控制试剂的加入量，避免误差。
2. 样品制备过程中应避免污染，保证实验结果的准确性。
3. 实验操作过程中应遵守实验室安全规范，确保人身安全。
临床生化检验：3-血清总蛋白测(双缩脲法)
优点
准确性好、精密度高、 灵敏度高。 特异性高、准确度好、 精密度高、操作简单方 便，显色稳定。
灵敏度高、达双缩脲法 的100倍。
快速简便、无损样品
灵敏、简便、快速，干 扰因素较少
简便、不需特殊仪器
缺点
适用范围
操作复杂，费时
用于标准蛋白质 的定值、对其他 方法校正等
灵敏度低
试剂与器材
双缩脲试剂盒 成分：硫酸酮、酒石酸钾钠、NaOH 、碘化钾
总蛋白质标准液（44.1g/L） 蒸馏水 混合血清 可见分光光度计 水浴锅
操作步骤
取3支试管，做好标记，按下表操作：
加入物（ml） 血清 蛋白标准液 蒸馏水 双缩脲试剂
B
S
U
-
-
0.06
-
0.06 -
0.06
-
-
3.0
血清总蛋白测定 (双缩脲法）
医学检验系临床生化检验教研室
实验目的
掌握双缩脲测定血清总蛋白的基本原理 熟悉血清总蛋白的临床意义；
总蛋白测定经典和常见的方法比较
方法
凯氏定氮法
双缩脲法
Lowry法 （Folin酚法 ）
紫外 分光光度法 考马斯亮蓝法 （Bradford）
化学比浊法
灵敏度
0.2~ 1.0mg氮 1～20mg 20～250ug
干扰物质多、操作 要求严格计时
为临床测定血清 总蛋白首选方法 。
适用于测定单一 蛋白质及测定蛋 白质含量较少的 标本如脑脊液
灵敏度低、干扰物 较多
常用于较纯的酶 和免疫球蛋白测 定
不同蛋白质与染料 常用于需求更高 结合力不一致，对 呈色灵敏度的蛋 比色杯有吸附作用 白电泳
血清总蛋白测定标准操作规程
血清总蛋白测定标准操作规程1.实验原理：（双缩脲法）本试剂采用双缩脲反应，即在碱性溶液中，蛋白质分子中的肽键与两价铜离子反应生成蓝紫色络合物，其中每个铜离子与五至六个肽键络合。
双缩脲反应被广泛应用于临床检验，具有简便、快速可靠的特点。
在试剂中加入碘化物有助于防止碱性铜络合物的自动还原，反应形成的蓝紫色物质与样本中总蛋白浓度成正比，通过测定520-560nm 处吸光度值的变化，即可计算出样本中总蛋白的浓度。
+2u C +蛋白质−−→−-OH Cu 蛋白质复合物 2.试剂主要组成成分3.样本要求：新鲜无溶血血清，勿使用肝素抗凝血浆。
22～25℃保存8小时，2～8℃保48小时，-20℃保存7天，样本不可反复冻融！4.检验方法：仪器法（详见DF-603/DI-600标准操作规程）5.参考范围：6.检验结果的解释6.1线性范围：在给定的样本/试剂比例和条件下测定时，本试剂线性范围可达100g/L 。
样本含量超出线性范围时，建议用0.9%（W/V ）的氯化钠溶液稀释样本。
最大稀释5倍。
6.2单位换算：g/dL=g/L ×0.17检验结果的局限性7.1结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。
7.2若试剂浑浊或以水空白在540nm 处吸光度大于0.200时不能使用。
8.产品性能指标8.1试剂外观：蓝色透明液体，无悬浮物及沉淀物。
8.2装量：不低于标识值8.3空白吸光度：在540nm处，光径1cm时，空白吸光度A≤0.200。
8.4分析灵敏度：在540nm处，光径1cm时，测量70g/L的总蛋白，吸光度差△A≥0.1508.5线性区间：试剂的线性区间为[30.0-100.0]g/L，在此线性区间内：a）线性相关系数r应不小于0.995；b）线性相对偏差不超过±6.0%。
8.6精密度8.6.1重复性：重复测试（70.0±10.0）g/L的样本，所得结果的变异系数（CV）应≤2.0%8.6.2批间差：重复测试（70.0±10.0）g/L的样本，所得结果批间相对极差（R）应≤5.0%8.7准确性：相对偏差应不大于±5.0%。
双缩脲法测定血清总蛋白的方法学评价
双缩脲法测定血清总蛋白的方法学评价吴文钦（广东医学院医学检验学院广东-东莞 523808）摘要：目的对双缩尿法测定血清总蛋白进行方法性能评价，达到提高分析方法质量的目的。
方法配制双缩脲试剂，并用所配制的双缩脲试剂与标准血清总蛋白进行批内重复性试验、回收试验以及线性范围评价试验，从而评价双缩尿法测定血清总蛋白的精密度、准确度和线性范围。
结果用分光光度计测定波540nm 处的吸光度A，进行相关数据分析，双缩脲法测定血清总蛋白的批内重复性试验的变异系数 CV%为2.36%，回收试验平均回收率为105%，线性范围评价试验R2为0.9980。
结论在严格规范操作下，双缩脲法测定血清总蛋白的精密度高，准确度以及线性范围较好，满足临床对血清总蛋白定量测定要求，是临床测定血清总蛋白的常规方法。
关键词：双缩脲法；血清总蛋白；方法学评价Biuret method was developed for the determination of protein evaluation methodologyAbstract Objective The purpose of the double reduction of urine protein determination of serum total performance evaluation methods, to improve the quality of analytical methods.Methods Biuret test preparation, and formulated with the biuret test standard serum total protein in the assay reproducibility test, recovery test and linear range of evaluation test to evaluate the double reduction of urine assay precision of serum total protein, accuracy and linear range.Results A spectrophotometer absorbance at 540nm wave, the associated data analysis, determination of intra-assay coefficient of variation of total serum protein test reproducibility CV% was 2.36%, the average recovery recovery test 105% biuret method, linear evaluation test range R2 is 0.9980.Conclusion In the strictly regulate the operation, biuret serum total protein, high precision, accuracy and linearity better meet the clinical requirements for quantitative determination of total serum protein, serum total protein conventional methods of clinical measurement.Key words Biuret method; Total serum protein; Evaluation Methodology为满足临床医疗对实验室检验的不断要求，实验室需要不断引进新方法或者改进原有的方法。
双缩脲法测定血清总蛋白实验报告
双缩脲法测定血清总蛋白实验报告实验报告：双缩脲法测定血清总蛋白摘要：本实验采用双缩脲法测定血清总蛋白浓度。
通过对比实验组和对照组样本的比色反应，得出了血清总蛋白的浓度。
实验结果表明，该方法简便、可靠、准确，适用于血清总蛋白的浓度测定。
实验目的：1.掌握双缩脲法测定血清总蛋白浓度的基本原理和方法。
2.了解比色法在实验中的应用及操作技巧。
3.验证双缩脲法测定血清总蛋白浓度的可靠性和准确性。
实验方法：1.取不同浓度的血清标准品6个，分别标注不同浓度和编号。
2.取待测样品6个，标注不同编号。
3.将标准品和待测样品加入10ml离心管中，每个管中各加入1ml蒸馏水。
4.在离心管中分别加入1ml蛋白试剂A和B，摇匀，并放置15分钟。
5.加入1ml无水乙醇摇匀。
6.在1ml离心管中加入1ml0.1mol/L NaOH溶液，使溶液转为蓝色。
7.在250nm处比色计测定吸光度（对照组样本的吸光度为0）。
8.计算出样品的血清总蛋白浓度。
实验结果：对照组样本吸光度为0，实验组6个样本的吸光度如下表：编号吸光度S1 0.163S2 0.344S3 0.516S4 0.688S5 0.860S6 1.032标准品的吸光度如下表：编号吸光度浓度G1 0.163 0.7g/LG2 0.344 1.4g/LG3 0.516 2.0g/LG4 0.688 2.8g/LG5 0.860 3.4g/LG6 1.032 4.1g/L通过双缩脲法测定，我们计算出每个实验组样本的血清总蛋白浓度。
编号浓度（g/L）S1 0.7S2 1.4S3 2.0S4 2.8S5 3.4S6 4.1实验结论：1.通过双缩脲法测定血清总蛋白，准确地测定了实验组样本的血清总蛋白浓度。
2.双缩脲法测定血清总蛋白浓度的方法简便、可靠、准确，适用于血清总蛋白浓度测定。
实验六 蛋白质的定量分析-双缩脲法测定血清总蛋白
牛血清白 蛋白(mg) 2mg/mL牛
血清白蛋白 体积(mL)
0 0
0.6 0.3
1.2 0.6
2.4 1.2
3.6 1.8
4.8 2.4
6.0 3.0 －
待测液体 积(mL) 蒸馏水 (mL) OD540
－ 3.0
－ 2.7
－ 2.4
－ 1.8
－ 1.2
－ 0.6
－ 0
3.0* 0
2.各管混匀后，加入双缩脲试剂3.0mL,37oC反应30min。 3.以0号管调零，测定各管540nm光吸收值。
双缩脲法测定蛋白质*
蛋白质含有两个以上的肽键(—CO—NH—)，因此 可以发生双缩脲反应：
H2N-CO-NH2 + NH2-CO-NH2 H2N-CO-NH-CO-NH2 ＋NH3
在碱性溶液中，双缩脲能与Cu2+形成紫红色络合 物，其颜色深浅与蛋白质浓度成正比。双缩脲法测定 蛋白质范围1-10mg。
二、结果处理
1.绘制标准曲线 以牛血清白蛋白含量为横坐标，OD540为纵坐标， 绘制标准曲线。 2.样品的计算 根据样品的OD540从标准曲线上查得样品的蛋白质 含量（mg），再根据样品的体积计算出样品的浓度。
三、注意事项
1.须于显色后30min内测定，且各管由显色到比色时间 应尽可能一致。 2.*样品蛋白质含量应在标准曲线范围内。
Coomassie Dye-Based 蛋白质定量
O CH2CH3
Coomassie G-250
NH
PROTEIN
+
+ CH3CH2 N CH2
CH3
C
CH3
N CH2CH3 CH2
SO 3
血清总蛋白液体双缩脲法测定
血清总蛋白液体(TP)双缩脲法测定1.实验原理双缩脲比色终点法。
在碱性条件下，蛋白与铜离子生成紫蓝色复合物。
显色强度和蛋白浓度成正比。
OH—蛋白质+ Cu2+ -------------﹥紫红色复合物2. 标本采集2.1 病人准备：无特殊要求。
最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。
2.2 类型：血清或血浆。
3. 标本存放20～25℃保存可稳定6天；4～8℃保存可稳定4周；-20℃保存至少可稳定1年。
4. 标本运输室温条件下运输5. 标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。
6. 实验材料:6.1 上海申能总蛋白测定试剂盒货号：14223171701 试剂1＋试剂26.1.1 试剂组成试剂1（R1）：6×64ml氢氧化钠80 mmol/L酒石酸钾钠12.8 mmol/L试剂2（R2）：6×16ml氢氧化钠100 mmol/L酒石酸钾钠16 mmol/L碘化钾15 mmol/L硫酸铜 6 mmol/L6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂有效期为24个月。
试剂不可冰冻。
开盖后应避免污染。
6.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
6.1.5 注意事项：试剂中含有氢氧化钠，不可入口！如与皮肤及粘膜接触，请立即用大量水冲洗。
使用试剂时应采取必要的防护。
6.2 校准品：使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
7. 仪器：贝克曼AU680生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验贝克曼AU680生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2仪器操作步骤：参见生化检验贝克曼AU680生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
血清总蛋白和血清白蛋白的测定1
混合后以空白管校零，立即比色，比色波长为 混合后以空白管校零，立即比色，比色波长为620nm，以光 ， 密度为纵坐标，相应管中的白蛋白浓度为横坐标， 密度为纵坐标，相应管中的白蛋白浓度为横坐标，在坐标 纸上绘制标准曲线。 纸上绘制标准曲线。
2. 血清白蛋白测定
用生理盐水按1： 的比例稀释血清 取稀释后的血清0.2ml加入 的比例稀释血清， 用生理盐水按 ：10的比例稀释血清，取稀释后的血清 加入 BCG应用液 应用液 5.0ml混匀后立即同上比色，读取光密度，并从标注曲线上查出相 混匀后立即同上比色，读取光密度， 混匀后立即同上比色 应的白蛋白 浓度。 浓度。 3.白蛋白 球蛋白比值（A/G比值） 白蛋白/球蛋白比值（ 比值） 白蛋白 球蛋白比值 比值 用双缩脲法测定血清标本中的总蛋白浓度， 用双缩脲法测定血清标本中的总蛋白浓度，用总蛋白浓度减 去白蛋白浓度 即得球蛋白浓度， 比值： 即得球蛋白浓度，并可求的A/G比值：
A/G比值 比值= 比值
白蛋白含量 —————————————
总蛋白含量---白蛋白含量 总蛋白含量 白蛋白含量
参考值： 参考值：35~50g/L
【临床意义】 临床意义】
• 1．血清白蛋白浓度增高，常见于严生脱水所致的 ．血清白蛋白浓度增高， 血浆浓缩 • 2．血清白蛋白浓度降低 在临床上比较重要和常 ． 通常与总蛋白降低的原因大致相同。 见，通常与总蛋白降低的原因大致相同。急性降低 主要见于大出血和严重的烧伤； 主要见于大出血和严重的烧伤；慢性降低见于肾病 蛋白尿，肝功能损伤， 蛋白尿，肝功能损伤，肠道肿瘤及结核病伴慢性出 营养不良和恶性肿瘤等。血清白蛋白低于20g/L。 血，营养不良和恶性肿瘤等。血清白蛋白低于 。 临床上出现水肿。 临床上出现水肿。 • 3．A/G 某些病人可同时出现白蛋白减少和球蛋白 ． 升高的现象，严重者比值可＜ 。这种情况称为A/G 升高的现象，严重者比值可＜1。这种情况称为 比值倒置。 比值倒置。 • 4．文献报道还有极少见的因白蛋白合成障碍，血 ．文献报道还有极少见的因白蛋白合成障碍， 清中几乎没有白蛋白的先天性白蛋白缺乏症。 清中几乎没有白蛋白的先天性白蛋白缺乏症。
血清总蛋白测定(双缩脲试剂法)
生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称血清总蛋白测定（双缩脲试剂法）实验日期2014-11-21实验地点第五实验室合作者指导老师评分教师签名批改日期一、实验目的1、掌握双缩脲测定血清总蛋白的基本原理、操作；2、熟悉血清总蛋白的临床意义；3、了解双缩脲法测定血清总蛋白的特点和注意事项。
二、实验原理（一）：双缩脲反应在碱性溶液中,双缩脲(H2NOC－NH－CONH2)能与Cu2+作用,形成紫色或紫红色的络合物,这个反应叫做双缩脲反应。
两分子尿素加热脱氨缩合成的双缩脲（H2N-OC-NH-CO-NH2），因分子内含有两个邻接的肽键，在碱性溶液中可与Cu2+发生双缩脲反应，生成紫红色络合物；蛋白质分子含有大量彼此相连的肽键（-CO-NH-），同样能在碱性条件下与Cu2+发生双缩脲反应，生成的紫红色络合物，且在540nm处的吸光度与蛋白质的含量在10～120g/L范围内有良好的线性关系。
三、材料与方法：实验材料样品：大牛血清试剂：双缩脲试剂、蛋白质标准液（70g/L）、生理盐水（%）器材：试管、加样枪、刻度吸管、洗耳球设备：1100分光光度计、水浴锅实验步骤取3支试管，做好标记(B空白对照，S标准液，U为待测大牛血清)，按下表操作：加入物（ml） B (空白）S （标准）U（待测）大牛血清（1：10）--蛋白标准液（1：10）--%氯化钠溶液--双缩脲试剂a.各管混匀，观察各试管颜色b.将各试管置于37℃水浴锅中加热20min，观察颜色c.将试管中的液体倒入比色杯中，置于1100分光光度计的样品槽内，在波长540nm，以空白管调零，测S和U管吸的光度。
d.测定结束后，将比色杯中的样品回收进试管依据公式算出结果四、结果与讨论：（一）：实验结果1、实验现象：a、在实验中首先加入双缩脲试剂，再依次加入%氯化钠溶液、蛋白质标准液、相应的大牛血清后溶液没有明显的颜色变化，呈淡蓝色透明状；b、水浴20分钟之后，B试管试管显淡蓝色；S试管和U试管显浅紫色且S试管的颜色比U试管的颜色稍深。
02 血清总蛋白浓度测定
① 血清中水分增多，血清被稀释。如静脉注射过多低渗溶液或因各 种原因引起的水钠潴留。
② 营养不良和消耗增加，长期食物中蛋白质含量不足，或慢性肠道 疾病引起吸收不良，使体内缺乏合成蛋白质的原料；或因长期患 消耗性疾病，如严重结核病、甲状腺机能亢进或恶性肿瘤等，均 可造成血清总蛋白浓度降低。
－
50l蒸馏水－来自－双缩脲试剂3.0
3.0
混匀。37℃水浴10min后，540nm波长比色。
空白管
－ －
50l
3.0
【结果记录】 A测定＝
A标准＝ C标准＝
【计算】
血清总蛋白(g/L)＝A测/A标×标准总蛋白浓度(g/L)
【结果分析讨论】
【临床意义】
实验时间：
带课教师：
批阅时间： 成绩： .
7
3
2. 蛋白质与双缩脲试剂反应
2. 蛋白质与双缩脲试剂反应
4
操作
【操作】
取三支试管，分别标明测定管、标准管和空白管，然后 按下表加样。
试剂(ml) 血清标本 标准血清(70.0g/L) 生理盐水 双缩脲试剂
测定管
50l
－ －
3.0
标准管 －
50l
－
3.0
空白管 － －
50l
3.0
混匀，置25℃水浴箱30分钟(或37℃水浴箱10分钟)，取出 后在波长540nm处，用分光光度计进行比色，以空白管调零， 读取各管吸光度值。
血清总蛋白浓度测定
(双缩脲法)
河南科技大学医学院 生物化学与分子生物学教研室
【目的】
【目的】
1. 掌握双缩脲法测定血清总蛋白的 原理。
2. 熟悉操作过程及其临床意义。
总蛋白实验报告
一、实验目的1. 掌握双缩脲试剂法测定血清总蛋白的原理和操作步骤。
2. 了解血清总蛋白测定的临床意义和注意事项。
3. 培养实验操作技能和数据处理能力。
二、实验原理双缩脲试剂法是一种经典的蛋白质定量方法，其原理基于蛋白质分子中肽键与铜离子在碱性条件下形成紫红色络合物的特性。
在一定浓度范围内，蛋白质含量与紫红色络合物的吸光度成正比。
通过测定吸光度，可以计算出样品中的蛋白质含量。
三、实验材料1. 实验试剂：6.0mol/L NaOH溶液、双缩脲试剂（硫酸铜、酒石酸钾钠、碘化钾）、蛋白质标准液、待测血清样品。
2. 仪器：分光光度计、移液器、试管、烧杯、试管架等。
四、实验步骤1. 准备工作（1）配制双缩脲试剂：称取硫酸铜结晶3g，溶于500ml新鲜制备的蒸馏水中，加入酒石酸钾钠9g和碘化钾5g，待完全溶解后，加入100ml 6.0mol/L NaOH溶液，最后用蒸馏水定容至1L。
（2）配制蛋白质标准液：用定值参考血清或标准白蛋白配制蛋白质标准液，浓度为60～70g/L。
（3）将待测血清样品进行适当稀释。
2. 实验操作（1）取试管若干，编号，分别加入0.5ml蛋白质标准液、0.5ml待测血清样品（或稀释后的血清样品）和0.5ml蒸馏水作为空白对照。
（2）向每个试管中加入1.0ml双缩脲试剂，混匀。
（3）将试管置于水浴中加热5分钟，取出冷却至室温。
（4）用分光光度计在540nm波长处测定各管吸光度。
3. 数据处理（1）绘制标准曲线：以蛋白质标准液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
（2）根据待测血清样品的吸光度，从标准曲线上查得对应的蛋白质浓度。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：以蛋白质标准液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 待测血清样品蛋白质含量计算：根据待测血清样品的吸光度，从标准曲线上查得对应的蛋白质浓度，即为待测血清样品的蛋白质含量。
六、讨论、心得1. 双缩脲试剂法测定血清总蛋白是一种快速、简便、准确的方法，广泛应用于临床检验和生物化学研究。
血清总蛋白液体(TP)双缩脲法测定
血清总蛋白液体(TP)双缩脲法测定1.实验原理双缩脲比色终点法。
在碱性条件下，蛋白与铜离子生成紫蓝色复合物。
显色强度和蛋白浓度成正比。
OH—蛋白质+ Cu2+ -------------﹥紫红色复合物2. 标本采集2.1 病人准备：无特殊要求。
最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。
2.2 类型：血清或血浆。
3. 标本存放20～25℃保存可稳定6天；4～8℃保存可稳定4周；-20℃保存至少可稳定1年。
4. 标本运输室温条件下运输5. 标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。
6. 实验材料:6.1 奥林巴斯总蛋白测定试剂盒试剂1＋试剂26.1.1试剂准备：试剂为即用式。
6.1.2 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂有效期为24个月。
试剂不可冰冻。
开盖后应避免污染。
6.1.3 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
6.1.4 注意事项：试剂中含有氢氧化钠，不可入口！如与皮肤及粘膜接触，请立即用大量水冲洗。
使用试剂时应采取必要的防护。
6.2 校准品：使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。
6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I 与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。
11. 计算方法：以TruCal U复合校准品总蛋白校准值或标准品标准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以g/L报告。
血清总蛋白测定(双缩脲
血清总蛋白测定（双缩脲）1. 简介血清总蛋白是指血液中所有蛋白质的总和，包括白蛋白和球蛋白等。
血清总蛋白测定是一项常见的检验方法，用于评估患者的蛋白质代谢情况，以及某些疾病的诊断和监测。
双缩脲法是一种常用的血清总蛋白测定方法，本文将介绍该方法的原理、操作流程和结果解读。
2. 原理双缩脲法利用缩脲与蛋白质中的酚类物质反应生成有颜色的复合物，通过测量复合物的吸光度来定量测定血清中的总蛋白含量。
该方法具有简单、灵敏、快速等特点，被广泛应用于临床实验室及科研领域。
3. 操作流程3.1 样本处理从被检测者的静脉血中采集适量的血清样本，并放置在离心管中，离心10分钟将血清分离出来。
将分离得到的血清样本转移到干净的试管中。
3.2 加入试剂取适量的双缩脲试剂，按照其说明书的要求加入到试管中，与血清样本进行充分混合。
注意避免空气泡的形成。
3.3 酶解反应将试管放置于恒温水浴中，根据试剂的要求进行酶解反应。
一般情况下，反应时间为30分钟。
3.4 测定吸光度将反应体放入分光光度计中，设置波长为试剂说明书要求的波长，记录吸光度值。
3.5 统计结果根据标准曲线，计算出血清样本中总蛋白的含量。
4. 结果解读根据血清总蛋白测定的结果，可以得出以下结论： - 如果测定的结果高于正常范围，可能说明患者在蛋白质代谢方面存在异常，如蛋白质合成过多或凋亡减少。
- 如果测定的结果低于正常范围，可能说明患者在蛋白质合成方面存在问题，如肝功能受损或营养不足等。
需要注意的是，血清总蛋白测定的结果受到多种因素影响，如年龄、性别、饮食习惯等，因此在结果解读时需要综合考虑患者的临床情况。
5. 总结血清总蛋白测定是一种常用的检验方法，通过双缩脲法可以快速、准确地测定血清中的总蛋白含量。
该方法操作简单，结果解读可为临床医生提供重要的参考依据。
但需要注意的是，结果的解读需要综合考虑患者的临床情况，以及其他相关检验指标的结果，才能做出正确的诊断。
双缩脲法测定血清总蛋白实验报告
双缩脲法测定血清总蛋白实验报告一、实验目的掌握双缩脲法测定血清总蛋白的原理和操作方法，熟悉分光光度计的使用，了解血清总蛋白测定的临床意义。
二、实验原理双缩脲试剂是由硫酸铜的碱性溶液与酒石酸钾钠的碱性溶液混合而成。
当含有两个或两个以上肽键的化合物（如蛋白质）与双缩脲试剂反应时，形成紫红色的络合物。
其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，在 540nm 波长处有最大吸收峰。
通过比色法，可以测定样品中蛋白质的含量。
三、实验材料与设备1、试剂双缩脲试剂：称取硫酸铜（CuSO₄·5H₂O）15g 和酒石酸钾钠60g，用 500ml 蒸馏水溶解，在搅拌下加入 300ml 10%氢氧化钠溶液，用水稀释至 1000ml，贮存于塑料瓶中，可长期保存。
标准蛋白溶液（10g/L）：称取干燥的牛血清白蛋白 10g，用少量生理盐水溶解后，转移至 100ml 容量瓶中，用生理盐水定容至刻度，摇匀。
生理盐水。
2、器材分光光度计离心机移液器试管刻度吸管四、实验步骤1、标准曲线的绘制取 6 支干燥洁净的试管，按下表进行操作：｜试管编号｜ 1 ｜ 2 ｜ 3 ｜ 4 ｜ 5 ｜ 6 ｜｜｜｜｜｜｜｜｜｜标准蛋白溶液（ml）｜ 0 ｜ 02 ｜ 04 ｜ 06 ｜ 08 ｜ 10 ｜｜生理盐水（ml）｜ 10 ｜ 08 ｜ 06 ｜ 04 ｜ 02 ｜ 0 ｜｜蛋白质含量（g/L）｜ 0 ｜ 2 ｜ 4 ｜ 6 ｜ 8 ｜ 10 ｜向各管中加入 4ml 双缩脲试剂，充分混匀，室温放置 30 分钟后，以空白管调零，在 540nm 波长处测定各管的吸光度值（A）。
以蛋白质含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
2、血清样品的测定取 3 支试管，分别标记为测定管、空白管和对照管。
测定管：准确吸取血清样品01ml，加入生理盐水09ml，充分混匀。
再加入 4ml 双缩脲试剂，室温放置 30 分钟后，在 540nm 波长处测定吸光度值（A₁）。
实验1 双缩脲法测定血清总蛋白
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临床生物化学检验实验指导 （第二版）
实验1 双缩脲法测定血清总蛋白
临床意义
1．血清总蛋白浓度增高 （1）血浆浓缩
凡体内水分的排出大于摄入时，均可引起血浆 浓缩。如急性脱水（如呕吐、腹泻、高烧等），外 伤性休克（毛细血管通透性增大），慢性肾上腺皮 质功能减退（尿排钠增多引起继发性失水）。
－
－
蛋白标准液
－
－
－
0.10 0.10
蒸馏水
0.10 －
－
双缩脲空白试剂 －
5.0
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－
－
5.0
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双缩脲试剂
5.0
－
5.0
－
5.0
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临床生物化学检验实验指导 （第二版）
实验1 双缩脲法测定血清总蛋白
计算
血清总蛋白(g/L) AU ARB AB 蛋白标准液浓度 As ARB ASB
当肝功能严重受损时，蛋白质合成减少，以清蛋白降 低最为显著。
（4）蛋白质丢失
严重烧伤，大量血浆渗出；大出血；肾病综合征尿中 长期丢失蛋白质；溃疡性结肠炎可从粪便中长期丢失一定 量的蛋白质。
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临床生物化学检验实验指导 （第二版）
实验1 双缩脲法测定血清总蛋白
注意事项
这种紫红色络合物在540nm处有明显吸收峰，其 吸光度与血清蛋白含量在一定范围内呈正比关系，经
与同样处理的蛋医药院校医学检验专业规划教材
3
临床生物化学检验实验指导 （第二版）
实验1 双缩脲法测定血清总蛋白
试剂与器材
双缩脲法测定血清总蛋白实验报告
一、实验目的1. 掌握双缩脲法测定血清总蛋白的基本原理和操作步骤；2. 了解双缩脲试剂的配制方法和使用注意事项；3. 熟悉血清总蛋白的临床意义；4. 通过实验，提高实验操作技能和数据分析能力。
二、实验原理双缩脲法是一种测定蛋白质含量的方法，其原理是：在碱性溶液中，蛋白质分子中的肽键与铜离子（Cu2+）发生反应，形成紫红色络合物。
该络合物在特定波长（如540nm）下的吸光度与蛋白质含量呈线性关系。
通过测定吸光度，可以计算出样品中蛋白质的含量。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：牛血清、生理盐水、双缩脲试剂、蛋白质标准液、试管、加样枪、刻度吸管、洗耳球、水浴锅、分光光度计。
2. 实验试剂：（1）双缩脲试剂：硫酸铜、酒石酸钾钠、碘化钾；（2）蛋白质标准液：70g/L；（3）生理盐水：0.9%。
四、实验步骤1. 准备工作：将牛血清、生理盐水、双缩脲试剂、蛋白质标准液等实验材料准备好，并检查仪器设备是否正常。
2. 标准曲线的制作：（1）取6支试管，分别编号为1-6号；（2）向1-5号试管中加入不同浓度的蛋白质标准液，6号试管为空白对照；（3）向每支试管中加入适量的双缩脲试剂；（4）将试管放入水浴锅中，室温放置30分钟；（5）用分光光度计测定540nm处的吸光度，记录数据；（6）以蛋白质浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 样品测定：（1）取3支试管，分别编号为A、B、C；（2）向A、B、C号试管中加入适量的牛血清；（3）向A、B号试管中加入适量的双缩脲试剂，C号试管为空白对照；（4）将试管放入水浴锅中，室温放置30分钟；（5）用分光光度计测定540nm处的吸光度，记录数据；（6）根据标准曲线，计算A、B号试管中蛋白质的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的制作：根据实验数据，绘制标准曲线，横坐标为蛋白质浓度（g/L），纵坐标为吸光度。
曲线线性良好，相关系数R2=0.99。
2. 样品测定：根据标准曲线，计算A、B号试管中蛋白质的含量，结果如下：A号试管：蛋白质含量为70g/L；B号试管：蛋白质含量为68g/L。
双缩脲法测定血清总蛋白实验报告
双缩脲法测定血清总蛋白实验报告双缩脲法测定血清总蛋白实验报告引言：血清总蛋白是血液中的一种重要指标，它反映了人体内蛋白质的总量和分布情况。
测定血清总蛋白可以帮助医生判断患者的营养状况、肝功能以及某些疾病的发展情况。
本实验采用了双缩脲法，通过与标准物质的比色反应，定量测定了血清总蛋白的含量。
实验方法：1. 实验仪器与试剂准备本实验所需仪器有分光光度计、移液器、比色皿等。
所需试剂有双缩脲试剂、标准物质（如牛血清白蛋白）以及待测血清样品。
2. 样品预处理将待测血清样品离心，取上清液，并用移液器将上清液吸取到比色皿中。
3. 加入双缩脲试剂用移液器向比色皿中加入适量的双缩脲试剂，并轻轻搅拌均匀，使样品与试剂充分反应。
4. 与标准物质比色将标准物质分别加入不同的比色皿中，每个比色皿中加入相同体积的双缩脲试剂，与待测血清样品同时进行比色。
5. 分光光度计测定将比色皿放入分光光度计中，设定波长为标准波长，记录吸光度值。
6. 绘制标准曲线将吸光度值与标准物质的浓度进行对照，绘制标准曲线。
7. 计算待测血清样品的总蛋白含量根据待测血清样品的吸光度值，在标准曲线上找到对应的浓度，即可计算出待测血清样品的总蛋白含量。
结果与讨论：在本次实验中，我们测得待测血清样品的吸光度值为0.6。
根据标准曲线，我们可以得知该吸光度值对应的总蛋白浓度为30 g/L。
通过与标准物质的比色反应，我们成功地测定了待测血清样品的总蛋白含量。
总蛋白是人体内重要的营养物质，对于维持正常的生理功能至关重要。
通过测定血清总蛋白的含量，我们可以了解患者的营养状况。
如果总蛋白含量过低，可能意味着患者存在蛋白质摄入不足或吸收不良的问题。
而过高的总蛋白含量可能与肝功能异常、肾脏疾病等有关。
然而，需要注意的是，双缩脲法只能测定血清总蛋白的含量，并不能提供蛋白质的具体组成信息。
在实际应用中，还需要结合其他指标和临床病史来综合判断患者的健康状况。
结论：通过双缩脲法测定血清总蛋白的含量，我们可以快速、准确地了解患者的营养状况和某些疾病的发展情况。
血清总蛋白液体(TP)双缩脲法测定
血清总蛋白液体(TP)双缩脲法测定1.实验原理双缩脲比色终点法。
在碱性条件下，蛋白与铜离子生成紫蓝色复合物。
显色强度和蛋白浓度成正比。
OH—蛋白质+ Cu2+ -------------﹥紫红色复合物2. 标本采集2.1 病人准备：无特殊要求。
最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。
2.2 类型：血清或血浆。
3. 标本存放20～25℃保存可稳定6天；4～8℃保存可稳定4周；-20℃保存至少可稳定1年。
4. 标本运输室温条件下运输5. 标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。
6. 实验材料:6.1 奥林巴斯总蛋白测定试剂盒试剂1＋试剂26.1.1试剂准备：试剂为即用式。
6.1.2 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂有效期为24个月。
试剂不可冰冻。
开盖后应避免污染。
6.1.3 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
6.1.4 注意事项：试剂中含有氢氧化钠，不可入口！如与皮肤及粘膜接触，请立即用大量水冲洗。
使用试剂时应采取必要的防护。
6.2 校准品：使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。
6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪8. 操作步骤8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件8.2仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件9. 检验结果的判断与分析10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I 与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。
11. 计算方法：以TruCal U复合校准品总蛋白校准值或标准品标准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以g/L报告。
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血清总蛋白测定（双缩脲试
剂
南方區科女修生物化学实验报告
姓名：_______________
学号：—
专业年级：_________
组另I」：____
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验日期2014-11-21 实验地点第五实验室
合作者指导老师
评分教师签名批改日期
一、实验目的
1、掌握双缩脲测定血清总蛋白的基本原理、操作；
2、熟悉血清总蛋白的临床意义；
3、了解双缩脲法测定血清总蛋白的特点和注意事项。
二、实验原理
(一)：双缩脲反应
在碱性溶液中,双缩脲(H2N0C — NH — C0NH2)能与Cu2+作用，形成紫色或紫红色的络合物, 这个反应叫做双缩脲反应。
两分子尿素加热脱氨缩合成的双缩脲
(H2N-OC-NH-CO-NH2因分子内含有两个邻接的肽键，在碱性溶液中可与 Cu2+发生双缩脲反应，生成紫红色络合物；蛋白质分子含有大量彼此相连的肽键(-CO-NH-)，同样能在碱性条件下与Cu2+发生双缩脲反应，生成的紫红色络合物，且在540nm处的吸光度与蛋白质的含量在10〜120g/L范围内有良好的线性关系。
三、材料与方法：
实验材料
样品：大牛血清
试剂：双缩脲试剂、蛋白质标准液( 70g/L )、生理盐水( 0.9%)
器材：试管、加样枪、刻度吸管、洗耳球
设备：1100分光光度计、水浴锅
实验步骤取
加入物（ml） B （空白）S （标准）U （待测）大牛血清（1: 10）- - 0.5 蛋白标准液（1: 10）- 0.5 -
0.9%氯化钠溶液0.5 - -
双缩脲试剂 4.0 4.0 4.0
t '丿
厂a.各管混匀，观察各试管颜色
b.将各试管置于37C水浴锅中加热20min，观察颜色
c.将试管中的液体倒入比色杯中，置于1100分光光度计的样品槽内，在波长540nm
以空白管调零，测S和U管吸的光度。
✓
------------------
血淸总蛋门（= 蛋门质标褓液浓度（g/IJ
X __ 1
四、结果与讨论:
（一）：实验结果
1、实验现象:
d.测定结束后，将比色杯中的样品回收进试管
a、在实验中首先加入双缩脲试剂，再依次加入0.9%氯化钠溶液、蛋白质标准液、相应
的大牛血清后溶液没有明显的颜色变化，呈淡蓝色透明状;
b、水浴20分钟之后，B试管试管显淡蓝色；S试管和U试管显浅紫色且S试管的颜色
比U试管的颜色稍深。
2、实验数据：
3、结果计算：
将大牛血清和蛋白标准液的平均吸光度带入公式：血清总蛋白（ g/L）=（Au/As）X蛋白质标准液浓度（g/L），得出结果：血清总蛋白=44.586g/L
（二）：结果讨论
查阅资料得知，大牛血清总蛋白含量一般为60-80g/L,可是，实验结果却是
44.586g/L,即使按照实验要求及步骤操作,结果还是出现了比较大的误差，实验结果经过讨论，分析如下：
1、成功的方面：
a.在本次试验出现了预期的结果：S和U试管溶液显淡紫色，B试管显淡蓝色。
S和U 试管显淡紫色是因为蛋白质发生了双缩脲反应，但是由于蛋白质的含量偏少显色较浅，
B试管显浅蓝色的原因是B试管中没有发生任何反应，显双缩脲试剂的淡蓝色。
b.水浴，吸光度测试等环节都能够按照预定的步骤进行，操作比较严谨。
2、误差分析：
a.所测得的蛋白质含量偏低，可能是由于样品存储不当，造成待测的大牛蛋白水解，待测样品中
的蛋白质总量本身就很低
b.待测的大牛蛋白溶液正常，但是，标准蛋白溶液的浓度比标示的高，造成测量结果偏
c.操作过程有偏差，由于量取蛋白质溶液的量比较少，在每个加样步骤的少量偏差，都会造成结果误差较大
五：结论
样品的蛋白质含量偏低
复习思考题
1. 什么叫双缩脲试剂？为什么要在双缩脲试剂中加入酒石酸钾钠和碘化钾？
双缩脲试剂
2.试剂配制过程中，为何NaOH要单独配制，最后加入？
3.简述血清总蛋白测定的临床意义。