耐万古霉素肠球菌的耐药与毒力基因检测
耐药机制及特殊耐药性检测知识点整理
耐药机制及特殊耐药性检测知识整理1.耐药类型1)靶位改变●MRSA：抗药性金黄色葡萄球菌●VRE：抗万古霉素肠球菌2)产酶●ESBL：超广谱β-内酰胺酶●AmpC： AmpCβ内酰胺酶●CRE：耐碳青霉烯类肠杆菌3)多重耐药●MDR-PA：多重耐药铜绿假单胞菌●MDR-AB：多重耐药鲍曼不动杆菌2.M RSA抗药性金黄色葡萄球菌1)耐药机制：MRSA携带mecA基因，可编码产生低亲和力的青霉素结合蛋白（PBP2a），阻止药物与靶位的结合而造成耐药。
2)流行现状3)检测方法●1、苯唑西林的筛选平板。
不是甲氧西林！●2、常规药敏试验(苯唑西林MIC，头孢西丁MIC或纸片法)检测。
●3、mecA基因(PCR法)及其产物PBP2a(乳胶凝集试验)阳性均提示MRSA●抑菌圈内任何生长视为耐药。
4)检测●mecA和PBP2a：确定葡萄球菌属对甲氧西林(苯唑西林)耐药性最可靠的方法，阳性应报告为该菌株对甲氧西林(苯唑西林)耐药●苯唑西林筛选平板（显色平板）●常规药敏（苯唑西林MIC、头孢西丁MIC、纸片法）●PCR●金葡或所有凝固酶阴性葡萄球菌，如对苯唑西林(或甲氧西林)耐药，则对青霉素类、头孢菌素类(头孢罗膦除外)、碳青霉烯类和含酶抑制剂的复方制剂均应报告耐药，而不考虑其体外药敏结果。
3.V RSA-vanA耐万古霉素金葡1)定义：金黄色葡萄球菌对万古霉素●MIC＞16μg/ml——耐药●MIC=4-8μug/ml——中介●MIC＜2μg/ml——敏感。
2)耐药机制：葡萄球菌细胞壁有一段由4个氨基酸组成的短肽， 4肽的末端有2个重复氨基酸是万古霉素结合的靶位，由vanA基因介导的4肽末端改变为万古霉素低亲和力靶位，与万古霉素结合的亲和力下降1000倍。
3)检测方法：不推荐纸片法做万古霉素的敏感性检测4.V RE-vanA耐万古霉素肠球菌1)流行现状：几乎无药可治2)检测方法●肉汤或平板筛查法，万古霉素琼脂平板●纸片法、E-test●琼脂稀释法VRE筛选试验※3)耐药机制：vanA基因介导的4肽末端（D-丙氨酸- D-丙氨酸）改变为D-丙氨酸-D-乳酸4)结果解释：MIC高水平耐药，根据对万古霉素和替考拉宁耐药的程度可进⼀步区分为vanA、vanB、vanC、vanD等。
耐万古霉素肠球菌患者的临床分布特点及耐药性分析
耐万古霉素肠球菌患者的临床分布特点及耐药性分析作者：袁妍朱卫民来源：《中国药房》2022年第10期中圖分类号 R446.5 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2022）10-1253-05DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2022.10.16摘要目的研究耐万古霉素肠球菌（VRE）患者的临床分布特点及耐药情况，为临床预防及感染控制提供参考。
方法纳入2017年5月1日-2020年5月1日我院住院部各科室送检标本培养出肠球菌的患者，共290例，根据其药敏结果分为VRE组（24例）和万古霉素敏感肠球菌（VSE）组（266例）。
收集患者的基本信息（性别、年龄、送检科室等）、基础疾病（高血压、糖尿病、慢性阻塞性肺疾病等）、临床事件（导尿、气管插管、深静脉置管等）、抗菌药物使用情况（检出前后抗菌药物使用情况及使用时间）、临床表现（炎症指标异常、临床症状等）、临床结局（住院时间、好转等）、药敏谱等，比较分析两组的临床分布特点及耐药情况。
结果两组患者检出肠球菌的菌种种类、混合感染菌株类型、临床表现均有明显差异（P关键词肠球菌;万古霉素;临床分布;耐药情况Analysis of clinical distribution and drug resistance of vancomycin-resistant EnterococciYUAN Yan，ZHU Weimin（Dept. of Infectious Diseases， the First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University， Chongqing 400016， China）ABSTRACT OBJECTIVE To study the characteristics of clinical distribution and drug resistance in patients with vancomycin-resistant Enterococci （VRE）， and to provide reference for clinical prevention and control of infection. METHODS From May 1， 2017 to May 1， 2020， a total of 290 patients with Enterococci cultured from the samples submitted by inpatient department of our hospital were included. They were divided into VRE group （24 cases） and vancomycin-sensitive Enterococci （VSE） group （266 cases） according to the results of sensitivity tests. The basic information of patients （gender， age， submitting department， etc.）， basic diseases （hypertension， diabetes， chronic obstructive pulmonary disease， etc.）， clinical events （catheterization， endotracheal intubation， deep venous catheterization， etc.）， use of antibiotics （utilization and utilization time of antibiotics before and after detection）， clinical manifestations （abnormal inflammatory indicators， clinical symptoms， etc.）， clinical outcomes （length of stay， improvement， etc.）， drug sensitivity spectrum were all collected. Clinical distribution and drug resistance were compared and analyzed between 2 groups. RESULTS There were significant differences in the type of Enterococci， mixed infection strains and clinical manifestations between 2 groups （PKEYWORDS Enterococci; vancomycin; clinical distribution; drug resistance肠球菌（Enterococcus）广泛存在于土壤、水源等自然界中，是肠道正常菌群的组成部分之一，是除葡萄球菌（Staphylococcus）外最常见的导致院内感染的革兰氏阳性球菌[1]。
细菌耐药性检测方法
细菌耐药性检测方法 Prepared on 22 November 2020细菌耐药性检测方法1、细菌耐药表型检测：判断细菌对抗菌药物的耐药性可根据NCCLS标准，通过测量纸片扩散法、肉汤稀释法和E试验的抑菌圈直径、MIC值和IC值获得。
也可通过以下方法进行检测：（1）耐药筛选试验：以单一药物的单一浓度检测细菌的耐药性被称为耐药筛选试验，临床上常用于筛选耐甲氧西林葡萄球菌、万古霉素中介的葡萄球菌、耐万古霉素肠球菌及氨基糖苷类高水平耐药的肠球菌等。
（2）折点敏感试验：仅用特定的抗菌药物浓度（敏感、中介或耐药折点MIC），而不使用测定MIC时所用的系列对倍稀释抗生素浓度测试细菌对抗菌药物的敏感性，称为折点敏感试验。
（3）双纸片协同试验：双纸片协同试验是主要用于筛选产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）革兰阴性杆菌的纸片琼脂扩散试验。
若指示药敏纸片在朝向阿莫西林/克拉维酸方向有抑菌圈扩大现象（协同），说明测试菌产生超广谱β-内酰胺酶（4）药敏试验的仪器化和自动化：全自动细菌鉴定及药敏分析仪如：Vitek-2、BD-Pheonix、Microscan等运用折点敏感试验的原理可半定量测定抗菌药物的MIC值。
2．β-内酰胺酶检测：主要有碘淀粉测定法（iodometric test）和头孢硝噻吩纸片法（nitrocefin test）。
临床常用头孢硝噻吩纸片法，β-内酰胺酶试验可快速检测流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌、卡他莫拉菌和肠球菌对青霉素的耐药性。
如β-内酰胺酶阳性，表示上述细菌对青霉素、氨苄西林、阿莫西林耐药；表示葡萄球菌和肠球菌对青霉素（包括氨基、羧基和脲基青霉素）耐药。
3．耐药基因检测：临床可检测的耐药基因主要有：葡萄球菌与甲氧西林耐药有关的MecA基因,大肠埃希菌与β-内酰胺类耐药有关的blaTEM、blaSHV、blaOXA基因，肠球菌与万古霉素耐药有关的vanA、vanB、vanC、vanD基因。
检测抗菌药物耐药基因的方法主要有：PCR扩增、PCR-RFLP分析、PCR-SSCP 分析、PCR-线性探针分析、生物芯片技术、自动DNA 测序4．特殊耐药菌检测（1）耐甲氧西林葡萄球菌检测：对 1цg苯唑西林纸片的抑菌圈直径≤10㎜，或其MIC≥4цg/ml 的金黄色葡萄球菌和对1цg苯唑西林纸片的抑菌圈直径≤17㎜，或MIC≥цg/ml的凝固酶阴性葡萄球菌被称为耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）。
肠球菌esp基因与万古霉素耐药的相关性研究
５６ ・
２ ０ １ ３年 ２月第 ７卷第 ４期
Ｃ ｈ ｉ ｎ Ｊ Ｍｏ ｄ Ｄ ｒ ｕ ｇ Ａ ｐ ｐ ｌ ， Ｆ ｅ ｂ ２ ０ １ ３， Ｖ ｏ １ ． ７， Ｎ ｏ ． ４
１ ． ５ 统计学方法
２ 结果
对数据 处理时采用 Ｓ Ｐ Ｓ Ｓ １ ０ ． ０系统软件 ，
心功能 ， 只要掌握好 用药剂 量 以及临 床适应 证 ， 即可 达到 良 好 的治疗效果 ， 值得在临床上大力 推广使用 。
参考文献
［ １ ］ 陈 锐祥 ． 倍 他乐 克 治疗 慢 性心 衰疗 效 观察 ． 亚 太 传 统 医药 ，
２ ０ １ ０， １ ３ （ ０ １ ） ： ６ １ － ６ ３ ．
注： 表示与治疗前相 比， 差异有统计学意义 （ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ）
３ 讨 论
的心脏毒性作用 。倍他乐 克还 可 以有效 的预 防室上 性心 律失常和室性心律 失常 ， 降低 心脏 发生 恶性 事件 的几率 ， 有 效 的延长 患者 的寿命 Ｊ 。本文 的研究 表明 ， 慢性 心衰患者 运 用倍他乐克治疗 的临床 效果较为显著 ， 能有效 的改善患者 的
些 认 证 Ｊ 。
倍 他乐克 能够选 择性 的阻断 Ｂ 受体， 对慢性 心衰 治疗
的关键是 降低周围循环阻力 以此来减轻 心脏后 负荷 ， 同时降 低心率和心肌耗氧量 ， 提高 Ｂ受 体 的敏 感性 ， 对抗 儿茶 酚胺
肠球 菌 ｅ ｓ ｐ基 因 与万 古 霉 素 耐 药 的相 关 性 研 究
采用 ￡ 检验 ， 差异有统计学 意义 （ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ） 。
所选 的 １ ３ ６ 例患者 中 ， 慢性心衰经过治疗后 ， １ １ ４ 例 为显
万古霉素耐药肠球菌基因检测及同源性分析
ｍｅ ｈｏ ｔ ｄ ｓ ｔ ｏ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｚ ｅ ｈｅ ｔ ｈ ｏ ｍｏ ｇ ｅ ｎ ｅ ｉ ｙ ｔ ｏ ｆ ｖ ａ ｎ ｃ ｏ ｍｙ ｃ ｉ ｎ ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ｎｔ ａ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｏ ｃ ｏ ｃ ｃ ｕ ｓ ．
【 Ｋ Ｅ Ｙ ＷＯ Ｒ Ｄ Ｓ 】 ｖ ａ ｎ ｃ ｏ ｍ ｙ ｃ ｉ ｎ ； ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｏ ｃ ｏ ｃ ｃ ｕ ｓ ； ｄ ｍ ｇ ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ａ ｎ ｃ ｅ ； ｍ ｉ ｃ ｒ ｏ ｂ ｅ ； ｇ ｅ ｎ ｅ
Hale Waihona Puke Ｖ０ １ ． ２ ８ Ｎ ｏ ． ２
・
专 题 报 道
・
万 古霉 素 耐 药 肠 球 菌 基 因检 测 及 同 源 性 分 析
刘志远 许淑珍 于艳 华
（ 首都医科大学附属北京友谊 医院检验科 ）
【 摘要 】 目的 检测肠球 菌万古霉 素耐药基 因， 分 析万古霉 素耐药 肠球 菌耐 药表 型及 基因同源性 。方法
维普资讯
２ ０ ０ ７年 ４月
首 都 医 科 大 学 学 报
Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ｌ ａ ｏ ｆ Ｃ ａ ｌ ￣ ｉ ｔ ｌ ａ Ｍ ｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ
Ａｐ ｒ ．２ ０ ０７
第２ ８卷 第 ２期
Ｖａ ｎ ｃ ｏ ｍｙ ｃ ｉ ｎ Ｒｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ａｎ ｔ Ｅｎ ｔ ｅ ｒ ｏ ｃ ｏ ｃ ｃ ｕ ｓ
Ｌｉ ｕ Ｚｈ ｉ ｙ ｕ ａ ｎ，Ｘｕ Ｓ ｈ ｕ ｚ ｈ ｅ ｎ，Ｙｕ Ｙａ ｎ ｈ ｕ ａ
（ Ｃ ｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｒ ｙ Ｃ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ， Ｂ ｅ ｉ ｊ ｉ ｎ ｇ Ｆ ｒ ｉ ｅ ｎ ｄ ｓ ｈ ｉ ｐ Ｈ ｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ， Ｃ ａ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ Ｍ ｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ） 【 Ａ Ｂ Ｓ Ｔ Ｒ Ａ Ｃ Ｔ 】 Ｏ ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔ ｏ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｖ ａ ｎ ｃ ｏ ｍ ｙ ｃ ｉ ｎ — ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ａ ｎ ｔ ｇ ｅ ｎ ｅ ｓ ｏ ｆ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｏ ｃ ｏ ｃ ｃ ｕ ｓ ， ａ ｎ ｄ ｔ ｏ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｅ ｓ ｎｔ ａ ｉ ｂ ｉ ｏ ｔ ｉ ｃ ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ａ ｎ ｔ ｐ ｈ ｅ ｎ ｏ ｔ ｙ ｐ ｅ ａ ｎ ｄ
细菌耐药性检测方法
细菌耐药性检测方法1、细菌耐药表型检测：判断细菌对抗菌药物的耐药性可根据NCCLS标准，通过测量纸片扩散法、肉汤稀释法和E试验的抑菌圈直径、MIC值和IC值获得。
也可通过以下方法进行检测：（1）耐药筛选试验：以单一药物的单一浓度检测细菌的耐药性被称为耐药筛选试验，临床上常用于筛选耐甲氧西林葡萄球菌、万古霉素中介的葡萄球菌、耐万古霉素肠球菌及氨基糖苷类高水平耐药的肠球菌等。
（2）折点敏感试验：仅用特定的抗菌药物浓度（敏感、中介或耐药折点MIC），而不使用测定MIC时所用的系列对倍稀释抗生素浓度测试细菌对抗菌药物的敏感性，称为折点敏感试验。
（3）双纸片协同试验：双纸片协同试验是主要用于筛选产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）革兰阴性杆菌的纸片琼脂扩散试验。
若指示药敏纸片在朝向阿莫西林/克拉维酸方向有抑菌圈扩大现象（协同），说明测试菌产生超广谱β-内酰胺酶（4）药敏试验的仪器化和自动化：全自动细菌鉴定及药敏分析仪如：Vitek-2、BD-Pheonix、Microscan等运用折点敏感试验的原理可半定量测定抗菌药物的MIC值。
2．β-内酰胺酶检测：主要有碘淀粉测定法（iodometric test）和头孢硝噻吩纸片法（nitrocefin test）。
临床常用头孢硝噻吩纸片法，β-内酰胺酶试验可快速检测流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌、卡他莫拉菌和肠球菌对青霉素的耐药性。
如β-内酰胺酶阳性，表示上述细菌对青霉素、氨苄西林、阿莫西林耐药；表示葡萄球菌和肠球菌对青霉素（包括氨基、羧基和脲基青霉素）耐药。
3．耐药基因检测：临床可检测的耐药基因主要有：葡萄球菌与甲氧西林耐药有关的MecA 基因,大肠埃希菌与β-内酰胺类耐药有关的blaTEM、blaSHV、blaOXA基因，肠球菌与万古霉素耐药有关的vanA、vanB、vanC、vanD基因。
检测抗菌药物耐药基因的方法主要有：PCR扩增、PCR-RFLP分析、PCR-SSCP 分析、PCR-线性探针分析、生物芯片技术、自动DNA 测序4．特殊耐药菌检测（1）耐甲氧西林葡萄球菌检测：对 1цg苯唑西林纸片的抑菌圈直径≤10㎜，或其MIC≥4цg/ml的金黄色葡萄球菌和对1цg苯唑西林纸片的抑菌圈直径≤17㎜，或MIC≥0.5цg/ml 的凝固酶阴性葡萄球菌被称为耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）。
肠球菌耐药性与耐万古霉素基因初步检测
肠球菌耐药性与耐万古霉素基因初步检测钱纯;宁兴旺【期刊名称】《中南医学科学杂志》【年(卷),期】2011(039)004【摘要】目的了解肠球菌对六种常用抗生素的耐药情况,同时检测耐万古霉素肠球菌(VRE)的耐万古霉素基因型.方法用K-B纸片琼脂扩散法检测肠球菌对万古霉素、替考拉宁、氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、环丙沙星以及庆大霉素等六种常用抗生素的敏感性.采用合6μg/mL万古霉素的琼脂稀释筛选平板法(ADSP)筛选VRE菌株,并用多重聚合酶链反应(multiplex-PCR)检测VRE的耐万古霉素基因型.结果100株临床分离肠球菌中以粪肠球菌(86％)和屎肠球菌(11％)为主.除万古霉素和替考拉宁外,屎肠球菌对其它几种抗生素的耐药率明显高于粪肠球菌(P＜0.05)；庆大霉素高耐株检出率为54％,其对常用抗生素的耐药率明显高于低耐株(P＜0.05).用ADSP法筛选出3株(3％)耐万古霉素肠球菌,其中只有一株铅黄肠球菌为耐万古霉素基因型阳性(VanC2),其余两株均为Van基因阴性.结论 ADSP法用于筛选VRE较K-B法检出率高；本次研究只分离出一株VanC2型VRE,没有发现具有重要临床意义的VanA和VanB型VRE；肠球菌对庆大霉素(120μg/片)的耐药率为54％,建议临床慎用；万古霉素、替考拉宁、氨苄西林及氨苄西林/舒巴坦均可作为治疗粪肠球菌感染的药物,但需密切注意肠球菌耐药情况.【总页数】4页(P422-425)【作者】钱纯;宁兴旺【作者单位】湖南中医药大学第一附属医院检验科，湖南长沙410007;湖南中医药大学第一附属医院检验科，湖南长沙410007【正文语种】中文【中图分类】R446.2【相关文献】1.258株肠球菌耐药性分析及耐万古霉素基因检测 [J], 马均;张彭;褚美玲;刘海洋;任微;王璐;薛文成2.肠球菌耐万古霉素基因及耐消毒剂基因检测的研究 [J], 王宏;黄健;谢忆虹;赵俊;罗秋平;郭露娟3.儿童肠球菌耐万古霉素表型和耐药基因检测分型的研究 [J], 张彩虹;张学忠4.肠球菌耐药性与耐万古霉素基因初步检测 [J], 钱纯;宁兴旺5.肠球菌耐药性分析及耐万古霉素基因检测 [J], 任微;王璐;马均;褚美玲;赵汐婷;刘海洋;孟冬娅;薛文成因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
耐万古霉素肠球菌耐药表型检测和基因型分析
耐万古霉素肠球菌耐药表型检测和基因型分析张侠家;沈继录;贾伟华【摘要】Objective To research the resistant characteristics, genotype and prevalence of vancomycin-resistant Enterococci( VRE) . Methods K-B disc diffusion method was used to determine the susceptibility, minimum inhibi-tory concentration ( MIC) for vancomycin of VRE was detected by E-test method;VRE was then subjected to PCR for resistance related genes;6 strains sequencing results of PCR product were contrastively analyzed the amino acid sequence by BLAST. Results 6 VREFm strains were found from 193 strains enterococci;6 VREFm strains were completely resistant to high unit gentamicin, ampicillin, ciprofloxacin, teicoplanin,but were sensitive to linezolid and macrodantin,MIC for vancomycin was more than 256mg/L;Genotypes were vanA;Amino acids in vanA gene have changed with Asn83→Asp( AAC→GAC) . Conclusion VRE in our hospital is mostly multi-drug resistant , which bringS difficulty in clinical treatment for its infection. So the hospital should strengthen the prevention and monitoring, to prevent the spread of VRE strains in the hospital and popular.%目的研究某院耐万古霉素肠球菌( VRE)的耐药特性、基因型及流行情况。
检验科细菌耐药性监测标准操作程序SOP文件
检验科细菌耐药性监测SOP文件一、耐甲氧西林葡萄球菌（Methicillin-Resistant Staphylococci,MRS）MRS是引起临床感染的常见病原菌，同时也是引起医院感染的重要病原菌之一，其耐药特点是耐受甲氧西林的同时，还对临床广泛应用的多种抗生素呈现多重耐药，因而该菌所致感染已成为临床治疗的一大难题。
（一）MRS测定方法1、纸片扩散法接种物：直接悬液法从非选择琼脂平皿上挑取少许单个菌落至无菌生理盐水调至浓度0.5 McFarland,具体操作同常规纸片法药敏试验。
苯唑西林纸片，1R g/片，检测MRS平板应置于35℃ （而不是37℃）孵育24h （而不是16〜18h）。
结果判断：金黄色葡萄球菌：S：三13mm；I：11〜12mm；R:W10mm。
凝固酶阴性葡萄球菌：S：三18mm；R W17mm。
对于苯唑西林纸片周围的抑菌圈内有任何小菌落或稀薄“菌膜”生长都应列为MRS。
2、琼脂筛选法：如果纸片试验结果中介时，可做琼脂筛选法，培养基为MH琼脂+6R g/ml苯唑西林+4%NaCl,调整菌液浓度0.5McFarland,于35℃孵育24h,凡有任何生长即使一个菌落均报MRS。
（二）MRS监测意义对于MRS,应报告对所有头抱菌素类和其他B -内酰胺酶类耐药，喹喏酮类药物，除氟哌酸外，环丙氟哌酸，氟嗪酸有较好抗菌活性（耐药率10〜23%之间），利福平敏感率在90%以上，未见耐万古霉素菌株，但已有万古霉素中介金黄色葡萄球菌。
二、高水平耐药的肠球菌（HLAR）及耐万古霉素的肠球菌（VRE）（一）药敏测定方法1、常规测定方法：采用K-B纸片扩散法，头抱菌素不用做（均为耐药），氨苄，庆大霉素，替考拉宁，万古霉素一定要做。
2、高水平氨基糖甙类耐药性测定：⑴高含量纸片扩散法：通常测定庆大霉素和链霉素的高度耐药性，具体操作如常规纸片法药敏试验。
药敏纸片：庆大霉素：120R g/片；链霉素300p g/片结果判断：R：W6mm；I：7~9mm；S：三10mm⑵含单一高浓度抗生素琼脂平皿法：稀释法：庆大霉素：R：三500R g/ml；链霉素：R：2000p g/ml3、万古霉素耐药性测定：纸片扩散法，具体操作如常规纸片法药敏试验，万古霉素纸片为：30p g/片，检测平皿置35℃24h （而不是16〜18h）,并注意抑菌圈内有无小菌落或薄膜生长。
鹑鸡肠球菌对万古霉素耐药性监测及耐药基因研究
Ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ ｏｆ ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｎｄ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅｓ ｏｆ Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｇａｌｌｉｎａｒｕｍ
ＸＩＥ Ｈｕｉ， ＺＨＯＵ Ｗａｎ⁃ｑｉｎｇ， ＳＨＥＮ Ｈａｎ
μｍｏｌ ／ Ｌ） 各 １ μＬ， ｄｄＨ ２ Ｏ ６ μＬ。 ＰＣＲ 反 应 条 件：
９４ ℃ ５ ｍｉｎ；９４ ℃ ３０ ｓ，５４ ℃ ３０ ｓ，７２ ℃ ３０ ｓ，共 ３０
个循环；７２ ℃ ７ ｍｉｎ。 ＰＣＲ 产物经 １５ ｇ ／ Ｌ 琼脂糖凝
依据。
胶电泳，阳性扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后切胶回
２０１９ 年 １－１２ 月南京大学医学院附属鼓楼医院临床分离 １５ 株鹑鸡肠球菌进行药敏试验，采用 Ｅ⁃ｔｅｓｔ 法复核菌株对万古霉素最
低抑菌浓度（ ＭＩＣ） ；采用 ＰＣＲ 及测序技术分析万古霉素耐药决定基因 ｖａｎＡ、ｖａｎＢ、ｖａｎＣ１ 及 ｖａｎＣ２ ／ ３；采用 Ｉｌｌｕｍｉｎａ ＨｉＳｅｑ ２０００
测序技术对菌株基因组 ＤＮＡ 进行双端测序（ ＰＥ） ，利用生物信息学对菌株全基因组序列分析及耐药基因、毒力基因分析。
结果 １５ 株鹑鸡肠球菌对万古霉素的 ＭＩＣ 值集中在 ４ ｍｇ ／ Ｌ 和 ８ ｍｇ ／ Ｌ，所占比例分别为 ４０％和 ３３ ３％，检出 １ 株（ ６％） 万古
霉素高水平耐药株 ＥＧ１７９０６（ ＭＩＣ 为 ２５６ ｍｇ ／ Ｌ） ，该菌株除对万古霉素和替考拉宁耐药外，对其余常用抗生素均敏感；１５ 株菌
外药敏试验可呈现低水平耐药或敏感结果，但不建
议临床使用。 目前，已有对万古霉素高水平耐药鹑
万古霉素耐药肠球菌分子特征及遗传背景研究的开题报告
万古霉素耐药肠球菌分子特征及遗传背景研究的开
题报告
开题报告：
题目：万古霉素耐药肠球菌分子特征及遗传背景研究
研究背景：
万古霉素是一种广谱抗生素，被广泛应用于临床治疗中。
然而，近年来在肠球菌中出现了对万古霉素的耐药现象，这对临床治疗带来了诸多困难。
目前，已经有一些文献报道了肠球菌耐药机制的研究，但是对万古霉素耐药肠球菌的分子特征及遗传背景的探究仍然不充分。
研究目的：
本研究旨在探究万古霉素耐药肠球菌的分子特征及遗传背景，为临床治疗提供理论依据和数据支持。
研究方法：
本研究将从以下两个方面进行研究：
1.分子特征方面：对万古霉素耐药肠球菌的基因组进行测序，并使用比对软件进行序列比对，分析其与敏感肠球菌的差异，探究耐药基因和耐药机制。
2.遗传背景方面：对多个耐药菌株及其敏感对照菌株进行基因组比对及物种分类，通过建立进化树、分析群体结构等方法，探究其遗传背景的异同与演化。
研究意义：
本研究将为深入探究万古霉素耐药肠球菌的分子特征及遗传背景提供新的数据和思路，为临床治疗提供科学依据，对防控细菌耐药性具有积极意义。
万古霉素耐药肠球菌的表型及基因型检测
万古霉素耐药肠球菌的表型及基因型检测胡素侠【摘要】目的了解我院耐万古霉素肠球菌(VRE)的耐药表型、基因型及流行情况.方法用K-B纸片扩散法检测临床分离肠球菌的药物敏感性,E-test法检测VRE对万古霉素的最低抑菌浓度(MIC);PCR检测vanA、vanB、vanC1和vanC2-3基因型;脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析VRE同源性.结果73株肠球菌中检出3株万古霉素耐药屎肠球菌,检出率为4.1％;3株屎肠球菌对万古霉素和替考拉宁均耐药,但对利奈唑胺敏感;基因型检测显示3株屎肠球菌均为vanA型,PFGE结果显示该3株VRE不属于同一型别.结论我院住院患者中已出现VRE,应加强医院感染控制,以阻止VRE菌株在院内的传播和流行.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2014(032)008【总页数】3页(P624-625,631)【关键词】万古霉素;耐药;肠球菌;表型;基因型【作者】胡素侠【作者单位】淮南市第一人民医院检验科,安徽淮南232007【正文语种】中文【中图分类】R446.5肠球菌常引起泌尿系感染、菌血症、感染性心内膜炎、腹腔感染、胆道感染以及伤口感染。
随着抗菌药物的广泛应用，肠球菌对常用抗菌药物的耐药性不断上升[1]。
自1988年欧洲报道了耐万古霉素肠球菌(vancomycin-resistant enterococci, VRE)后，各地不断有VRE感染的报道，给临床抗感染治疗带来了极大挑战[2]。
为了解我院VRE的发生率和流行情况，本研究对我院2012年1月至2014年3月间分离的肠球菌进行了耐药表型和基因型检测以及同源性分析，结果报道如下。
1.1 材料万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺、氨苄西林、庆大霉素(每片120 μg)、利福平、环丙沙星、磷霉素、红霉素、呋喃妥因药物纸片及M-H琼脂培养基均购自英国Oxoid公司；E-test试条购自瑞典AB Biodisk公司。
DNA琼脂糖胶回收试剂盒购自广州捷倍斯公司；PCR检测试剂Taq酶、缓冲液及dNTP均购自TaKaRa公司；SmaⅠ限制性内切酶、蛋白酶K、溶菌酶及DNA标准DL 2000、CHEF-MAPP. ER型PFGE仪由美国Bio-Rad公司提供。
万古霉素耐药肠球菌
中国感染控制杂志，2004，3（4）：345～347转334
1996-2004年四川大学华西第二医院 新生儿败血症病原菌种类的变迁
2020/1/14
11
四川医学2005年9月第26卷(第9期)
2002 年～2006 年江苏省扬州市第一人民医 院3455例儿童血培养结果分析
2020/1/14
12
2020/1/14
34
2008年中国CHINET细菌耐药性监测
2020/1/14
35
2008年上海地区细菌耐药性监测
2020/1/14
36
2002年～2005年第三军医大学附属 新桥医院338株粪肠球菌的临床分析
338株粪肠球菌对常用抗生素的耐药率:
红霉素91.1%,
青霉素90.2%,
环丙沙星78.4%, 四环素66.3%,
2020/1/14
33
⑶万古霉素耐药肠球菌（VRE）
近年来VRE的感染急剧增加，美国的 流行情况较为严重，据美国CDC的院内感 染监测报告分析表明，VRE的医院感染从 1989年的0.3％增加至1993年的7.9％,从 1996年的17.9％增加至2004年的31.3％。 我国VRE的分离率低于5％。
庆大霉素和氟喹诺酮类的耐药率高达60-80%
以上。
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22
MRSA对28种抗菌药物耐药率分析（％）
2020/1/14
23
李家泰 李耘 王进 代表中国细菌耐药监测研究组中华医学杂志2003年3月10日第83卷第5期
MRSA特点3：MRSA临床分离率在经济发达 地区的综合性大型医院最为严重
R%
1995 ～1999 （1450株）
R%
耐万古霉素肠球菌的耐药机制及耐药基因调控的研究进展
耐万古霉素肠球菌的耐药机制及耐药基因调控的研究进展姚杰;徐元宏【摘要】耐万古霉素肠球菌现已成为重要的医院感染病原菌,其对万古霉素耐药方式分为获得性耐药和先天性耐药,其中获得性耐药的类型包括VanA、VanB、VanD、VanG和VanE,先天性耐药的类型有VanC1/C2/C3.本文针对耐万古霉素肠球菌的耐药机制及其耐药基因的调控进行综述,以供参考.【期刊名称】《国外医药（抗生素分册）》【年(卷),期】2010(031)001【总页数】5页(P24-28)【关键词】肠球菌属;万古霉素;耐药机制【作者】姚杰;徐元宏【作者单位】安徽医科大学第一附属医院检验科,合肥230032;安徽医科大学第二附属医院检验科,合肥,230601;安徽医科大学第一附属医院检验科,合肥230032【正文语种】中文【中图分类】R978.1+9肠球菌属广泛分布在自然界，常栖居在人、动物的肠道和女性生殖道，是人类的正常菌群之一。
自从用抗菌药物治疗人类感染性疾病以来，肠球菌在抗菌药物的影响下，也逐渐形成了多重高水平耐药菌。
近年来，由于免疫抑制剂的广泛应用，侵入性治疗的增加，以及氟喹诺酮类和头孢菌素类药物的过度使用等因素使肠球菌感染不断增加，已成为医院感染的主要病原菌[1]。
可导致人体多脏器的感染，不仅可引起尿路感染、皮肤软组织感染，还可引起危及生命的腹腔感染、败血症、心内膜炎和脑膜炎等疾病，病死率达到21.0%～27.5%[2]。
自20世纪50年代晚期万古霉素用于临床以后，糖肽类抗生素即用于治疗和预防由革兰阳性细菌引起的严重疾病，并获得了一定的疗效。
1986年首次报道质粒介导的对万古霉素耐药肠球菌，以后耐药菌株迅速波及世界各地，且耐药菌株的产生逐渐增加，个别医院中甚至高达20%。
对万古霉素耐药的菌株多见于屎肠球菌，而在粪肠球菌中较少见。
由于该菌对糖肽类抗生素的固有耐药，可发展成为多重耐药，给临床治疗带来很大的困难，因此糖肽类抗生素耐药菌株对临床微生物学和流行病学提出了新的挑战。
耐万古霉素肠球菌感染防治专家共识
耐万古霉素肠球菌感染防治专家共识一、本文概述随着医学的快速发展，全球面临的感染性疾病挑战日益严重，其中耐万古霉素肠球菌（VRE）感染已成为临床治疗的难题之一。
耐万古霉素肠球菌感染不仅在治疗上具有较高的挑战性，而且在防控上也存在诸多困难。
鉴于此，本文旨在汇总国内外关于耐万古霉素肠球菌感染防治的最新研究成果和临床实践经验，形成专家共识，以期为我国耐万古霉素肠球菌感染的防治工作提供科学的指导和参考。
通过本文的阐述，我们期望能够提高广大医务工作者对耐万古霉素肠球菌感染的认识，加强防控意识，促进临床合理用药，提高治愈率，减少耐药菌株的产生和传播，最终保障患者的生命安全和健康。
二、耐万古霉素肠球菌感染概述耐万古霉素肠球菌（VRE）感染已成为全球面临的严重公共卫生挑战之一。
肠球菌是医院内感染的主要病原菌之一，其耐药性的出现使得临床治疗变得更为困难。
耐万古霉素肠球菌的出现，特别是耐万古霉素屎肠球菌（VREfm）和耐万古霉素粪肠球菌（VREfa）的增多，严重威胁了患者的生命安全和医疗质量。
耐万古霉素肠球菌感染常见于免疫力低下的患者，如老年人、慢性病患者、接受长期抗生素治疗或免疫抑制治疗的患者等。
感染部位多样，包括泌尿道、呼吸道、伤口、血液等。
VRE感染的临床表现与其他肠球菌感染相似，但治疗更为棘手。
VRE感染的治疗选择有限，一旦确诊，应根据患者的具体情况制定个体化治疗方案。
治疗策略包括使用替代抗生素、联合用药、调整治疗方案等。
由于耐药性的存在，治疗效果往往不佳，且容易引发二重感染。
为了有效防治耐万古霉素肠球菌感染，需要加强临床微生物实验室的监测，及时发现耐药菌株，为临床治疗提供有力支持。
加强抗菌药物的管理，合理使用抗生素，减少耐药菌株的产生和传播。
加强医院感染控制，提高医护人员对耐药菌感染的认识和防控能力，也是防治耐万古霉素肠球菌感染的重要措施。
耐万古霉素肠球菌感染是一种严重的临床问题，需要引起广大临床医生和微生物学家的关注和重视。
耐药细菌及检测(2)
耐药细菌及检测（2）写在课前的话随着多重耐药或经耐药细菌在教学医院以及综合性医院的流行，院内感染的机会也在不断的增多。
一些对青霉素和大环内酯类耐药的肺炎链球菌，对三代头孢菌素耐药的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌，以及对碳青霉烯类耐药的铜绿假单胞菌和鲍氏不动杆菌等耐药菌株的流行，加之一些新的病原微生物的不断出现，给临床对感染性疾病的诊断和治疗增加了难度。
一、耐药细菌的检测细菌的耐药机制各异，针对具有特定耐药机制的细菌的检测方法也是不同的。
耐药细菌的检测，主要是采用抗菌药物的敏感试验。
具体方法主要有扩散法、稀释法、E-test 法、自动微生物分析仪检测以及分子生物学方法。
（一）方法1、扩散法这种方法是将抗菌药物纸片贴到已经涂布有待检细菌的MH碟子上，通过孵育以后，观察抑菌圈直径，以mm表示，这是一种定性的方法。
2、稀释法稀释法主要是将抗菌药物的浓度做不同稀释，然后来测定这些不同浓度的抗菌药物对细菌的抑菌作用。
通过孵育培养以后，观察最低抑菌浓度，即MIC值，以μg/ml 表示，这是定量的方法。
3 、E-test法E-test法主要是综合了扩散法和稀释法的优点，它是把抗菌药物以不同的浓度放在了一个E-test条上，把E-test条直接放在涂有细菌的碟子上，那么可以观察E-test条上抗菌药物与细菌之间相互作用以后，所获得的椭圆形的抑菌圈，来测定一个MIC值，因此这也是一种定量的方法。
4 、自动微生物分析仪自动微生物分析仪，例如现在很多实验室使用的ViteK, Microscan等，这些微生物分析仪可以给出抗菌药物对于某种细菌的特定的抑菌值，也是MIC值的一种检测方法。
5 、分子生物学方法分子生物学方法主要是测定耐药细菌的一些耐药基因，比如说mecA基因，当然对于某些耐药基因的检测，应该注意这些耐药基因是否有表达，它们是否是“沉默”的基因。
（二）解释性分类通过药敏试验我们可以获得定性的结果即抑菌圈的直径，或者是定量的结果，即最低抑菌浓度MIC值。
肠球菌耐万古霉素的机理及其检出方法
肠球菌耐万古霉素的机理及其检出方法国外医学临床生物化学与检验学分册1999年第20卷第6期天津市公安医院（300050）蒋云华王金良关键词：肠球菌万古霉素自1988年英国首次发现耐万古霉素的肠球菌（VER）后，在全球迅速传播，且发展为多重耐药，使临床治疗极为困难。
文献报告VRE所致的亚急性细菌性心内膜炎、败血症、盆腔内感染、尿路及伤口感染等日益增多。
VRE也是重要的医院内感染菌，已占医院内感染菌的第4位。
对人类更具威胁性的是万古霉素依赖性肠球菌（VDE）出现，文献中至少已报告6例感染。
因此，及时检出VRE、VDE，对抢救感染患者，合理使用抗生素以及流行病学调查均具重要意义。
1 肠球菌耐万古霉素的分子生物学机制万古霉素属糖肽类抗生素（包括替考拉宁、多糖菌素、杆菌肽等）系高分子量疏水化合物，它可与肠球菌细胞壁上的五肽糖前体的羧基末端D-丙氨酸-D-丙氨酸结合形成复合体，从而阻抑了肽糖聚合所需的糖肽基和转肽反应，使肠球菌不再能合成细胞壁而死亡。
VRE由于基因改变，使细胞壁的肽糖前体末端改变为D-丙氨酸-D-乳酸盐，万古霉素即失去与之结合能力，肠球菌可照常合成细胞壁而存活。
导致VRE形成的基因为分VAN A、VAN B、VAN C和VAN D基因型。
VAN A、VAN B基因为获得性，VAN C基因为固有，VAN D基因与前两者的结构与作用相似，但临床意义尚不明确（表1）。
Sahm DF用BEAA（胆汁七叶苷叠氮钠琼脂）筛查2777份标本（2264份尿、513份粪便），2394份（86％）无肠球菌生长，共筛查出206株肠球菌，来自121名患者。
经基因分析，其中61株（50％）含Van A基因，9株含Van B（7％），6株含Van A和Van B（50％），38株Van C（31％），其中33株含Van C1，5株含Van C2，含Van A、B者均为粪肠球菌。
表1 肠球菌耐糖肽药物的基因型Toye等用PCR法自601份粪便检出了34株（5.7％）Van C的VRE，自非粪便标本538份中检出了9株（1.7％），且证明Van C不在病人间转移，不必筛查。
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ｈｙｌ．Ｔｈｅ
ｐｒｅｓｅｎｃｅ
ｏｆ ｅｓｐ ｉｎ ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ・ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｅｎｔｅｒｃｏｃｃｕｓ Ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｏｆ Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｅｕｓ ｗａｓ
ａ
ｆａｅｃｉｕｍ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｔｈｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｏｎｅｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ
１３２
塞旦匡堂苤查垫！垒生箜！Ｑ鲞箜！塑
・检验与临床・
耐万古霉素肠球菌的耐药与毒力基因检测
杨靖娴
摘要
刘静邵冬华
王树琴孙娜
吴富炜
梁国威
目的：调查万古霉素耐药基因和５种毒力基因在临床分离肠球茵中的分布特点，探讨万古霉素
耐药与毒力因子之间的相关性。方法：Ｅ—ｔｅｓｔ法检测１２２株肠球茵对万古霉素和替考拉宁的最低抑菌浓度 （ＭＩＣ）。多重ＰＣＲ法检测ｖａｎＡ、ｖａｎＢ及粪、屎肠球菌的菌种特异基因，同样采用多重ＰＣＲ法检测常见毒力基 因ｅｓｐ，ｈｙｌ、ｇｅｌＥ、ａｓａｌ以及ｃｙｌＡ在上述肠球菌中的分布。结果：共检出７６株万古霉素耐药肠球菌（ＶＲＥ）（屎 肠球菌６９株，粪肠球菌７株）和４６株万古霉素敏感肠球菌（ＶＳＥ）（屎肠球茵２８株，粪肠球菌１８株）；所有 ＶＲＥ耐药表型与基因型一致，属ｖａｎＡ型：粪肠球菌毒力基因检出率明显高于屎肠球菌，并表现为多基因携 带；屎肠球菌仅ｅｓｐ和ｈｖｌ阳性。屎肠球菌ＶＲＥ的ｅｓｐ携带率显著高于其ＶＳＥ。结论：我院肠球菌耐药问题严 重，ｅｓｐ基因分布最广泛，且与万古霉素耐药显著相关。加强肠球菌耐药与毒力基因的监测有利于为预防和 控制耐药茵的流行与传播提供重要的基础信息。 关键词肠球菌属： 万古霉素；毒力
均≥２５６ Ｉ．Ｌｇ／ｍＬ；对替考拉宁呈现不同水平耐药。
见毒力基因ｅｓｐ、ｈｙｌ、ｇｅｌＥ、ａｓａｌ以及ｃｙｌＡ，了解并
万方数据
实崩医学杂志２０１４年第３０卷第１期
ＭＩＣ介于１２—２５６
Ｉ－Ｌｇ／ｍＬ。
经多重ＰＣＲ检测．７６株ＶＲＥ均为ｖａｎＡ基因
Ｇｕｏ—ｗｅｉ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ
ｏｆ
Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，
Ｈａｎｇｔｉａｕ
Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ
１０００４９，Ｃｈｉｎａ
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：ＬＩＡ ＮＧ Ｇｕｏ—ｗｅｉ Ｅ—ｍａｉｌ：ｌｇｗ７２１＠１６３．ｃｏｎ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】
ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ
ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ
Ｔｏ
ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ ｏｆ ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅ ａｎｄ
ｔｏ
ｆｉｖｅ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ
ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ・
ｔｏ
Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｏｆ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｉｓｏｌａｔｅｓ，ａｎｄ
菌株确认和ＶＲＥ筛选全部菌株复苏后经 ｃｏｍｐａｃｔ全自动微生物分析仪重新鉴定，质
Ｉｘｇ／ｍＬ
．６８８ ｂｐ ｃｙｌＡ ｔ５１０ ｂｐ ｅｓｐ ・３７５
控菌株为粪肠球菌ＡＴＣＣ２９２１２。采用含６
万古霉素的脑心浸液筛选平皿筛选ＶＲＥ，点种５ 汕ｌ浓度为０．５麦氏浊度的菌液，３５。Ｃ孵育２４ ｈ，有 菌落生长者为ＶＲＥ。万古霉素敏感菌株对照为粪 肠球菌ＡＴＣＣ２９２１２，万古霉素耐药菌株对照为粪
对万古霉素和替考拉宁的最低抑菌浓度（ｍｉｎｉｍｕｍ
ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ＭＩＣ），药敏判断标准参照
ｅｓｐ、ｈｙｌ、ｇｅｌＥ、ａｓａｌ以及ｃｙｌＡ基因的多重ＰＣＲ产物电 泳检测结果
２０１２ＣＬＳＩ—Ｍ１００一￥２２文件［６｜。
１．３－３细菌ＤＮＡ提取挑取血平板上经纯培养后 的菌落适量，置人装有２００斗Ｌ去离子水的１．５
ｍｉｎ；３０
个循环（变性：９４℃１ ｍｉｎ；退火：５４℃１ ｍｉｎ；延
ｍｉｎ。
采用多重ＰＣＲ法［ｓ］检测常
肠球菌２８株，粪肠球菌１８株）。全部菌株分布于不 同科室，包括老年病科、神经内科、呼吸科、心内科、 肾内科、血液科和普外科。 ２．２药物敏感表型和耐药基因检测分析Ｅ—ｔｅｓｔ 结果显示，７６株ＶＲＥ对万古霉素高度耐药，ＭＩＣ
ｓｅｒｉｏｕｓ
ｐｒｏｂｌｅｍ ｉｎ
ｏｕｒ
ｈｏｓｐｉｔａｌ．Ｅｓｐ ｗａｓ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｗｉｄｅｌｙ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ ｇｅｎｅ ａｍｏｎｇ ｆｉｖｅ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｒｅｌａｔｅｄ ｇｅｎｅｓ，ｉｔ ｈａｄ
ａ
ｗｉｔｈ ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ＶＲＥ ａｌｏｎｇ ｗｉｔｈ ｔｈｅｉｒ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｔｒａｉｔｓ ｗｉｌｌ ｐｒｏｖｉｄｅ ｖａｌｕａｂｌｅ ｓｔｒｏｎｇ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ
（Ｂｉｏ．ｒａｄ公司）。 １．３方法
１．３．１ Ｖｉｔ的分布频率及特征。各基因引物及反应 体系同原文献［５］，ＰＣＲ反应条件同上述耐药基因检 测条件。根据各基因片段大小不同进行结果判断 （图１），５种ＰＣＲ产物均经双向测序证实为目的条
带。
ＹＡＮＧ Ｊｉｎｇ－ｘｉａｎ，ＬＩＵ Ｊｉｎｇ，
Ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｎｄ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ ｉｎ ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ ＳＨＡＯ Ｄｏｎｇ－ｈｕａ，ＷＡＮＧ Ｓｈｕ—ｑｉｎ，ＳＵＮ Ｎａ，ＷＵ Ｆｕ—ｗｅｉ，ＬＩＡＮＧ Ｃｅｎｔｅｒ
ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ
ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｓ ｂｅｔｗｅｅｎ
ａｎｄ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ
ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ
Ｏｎｅ ｈｕｎｄｒｅｄ ａｎｄ ｔｗｅｎｔｙ—ｔｗｏ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ
ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ
ｏｆ ｔｈｅ
ｔｈｅｉｒ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ ａｎｄ ｔｅｉｃｏｐｌａｎｉｎ ｂｙ Ｅ－ｔｅｓｔ．Ｔｈｅ ｖａｎＡ，ｖａｎＢ ａｎｄ ｓｐｅｃｉｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｇｅｎｅｓ ｆｏｒ Ｅｎｔｅｒｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ ａｎｄ Ｅｎｔｅｒｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｕｓｉｎｇ ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ ＰＣＲ ｅｓｐ，ｈｙｌ，ｇｅｌＥ，ａｓａｌ ａｎｄ ｃｙｌＡ ｗｅｒｅ ａｌｓｏ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｍｕｈｉｐｌｅｘ ＰＣＲ．Ｒｅｓｕｌｔｓ
（屎肠球菌６９株，粪肠球菌７株）和４６株ＶＳＥ（屎
菌株情况经Ｖｉｔｅｋ
２
以及在基因水平上进行菌种鉴定，引物见表１，扩 增反应总体积为２５ ｔｘＬ．ｖａｎＡ、ｖａｎＢ基因引物各０．２
ｉｘＭ，ｄｄｌ．ｅｆａ、ｄｄｌ．ｅｆｍ基因引物各０．４“Ｍ，ＤＮＡ模板 １．５¨Ｌ。扩增反应条件为：预变性，９４℃３ 伸：７２℃１ ｍｉｎ）；延伸，７２℃５ １．３．５毒力基因检测
统计学意义。
２结果
２．１
２０℃保存备用。
１．３．４耐药基因检测
ｖａｎＡ、ｖａｎＢ及粪肠球菌和屎肠球菌特异的ｄｄｌ基因
片段（ｄｄｌ—ｅｆａ、ｄｄｌ—ｅｆｍ），能同时检测菌株耐药基因
ｃｏｍｐａｃｔ微生物分析仪 和菌种特异性基因双重鉴定后．共收集到１２２株肠 球菌，其中粪肠球菌２５（２０．５％）株，屎肠球菌９７ （７９．５％）株。经ＶＲＥ筛选确认后．获得７６株ＶＲＥ
万方数据
塞旦医堂苤查垫！垒堡箜！Ｑ鲞箜！塑
１３３
１材料与方法
１．１
表１粪、屎肠球菌耐药基因及菌种特异性基因引物
基因名称引物名称 序列 片段长度（ｂｐ）
菌株来源７６株ＶＲＥ和４６株ＶＳＥ均来自
２０１１年７月至２０１３年７月期间航天中心医院检 验科微生物室鉴定冷冻保存菌株．标本来源为尿 液、血液、胸水和腹水。全部菌株均为患者首次入院
肠球菌ＡＴＣＣ５１２９９。 １．３．２药物敏感性检测 采用Ｅ—ｔｅｓｔ法检测ＶＲＥ
ｈ㈣ａ１
－２Ｉ ３ ｂｐ ｇｅｌＥ
注：Ｍ，１００ ｂｐ ＤＮＡ ｌａｄｄｅｒ；１，ｅｓｐ；２，ｈｙｌ；３，ｇｅｌＥ；４，ａｓａｌ；５，ｃｙｌＡ、
ｅｓｐ和ａｓａＩ共同阳性；６，ｅｓｐ、ｇｅｌＥ、ａｓａｌ和ｅｙｌＡ共同阳性；０，阴性 对照 图１
近年来．肠球菌已逐渐成为院内感染的重要病 原菌．临床感染以粪肠球菌和屎肠球菌多见。万古
霉素耐药肠球菌（ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ．ｒｅｓｉｓｔａｎｔ
Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ，
菌表面蛋白（ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃａｌ
ｐｒｏｔｅｉｎ，ｅｓｐ）、透 明质酸酶（ｈｙａｌｕｒｏｎｉｄａｓｅ，ｈｙｌ）、明胶酶（ｇｅｌａｔｉｎａｓｅ， ｇｅｌＥ）、聚集物质（ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ，ａｓａｌ）和溶 细胞素（ｃｙｔｏｌｙｓｉｎ，ｃｙｌＡ）［５２。 本研究收集了２０１１年７月至２０１３年７月期 间航天中心医院检出的１２２株肠球菌，包括７６例 ＶＲＥ和４６例万古霉素敏感肠球菌（ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ— ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ．ＶＳＥ），采用多重ＰＣＲ法分别 进行耐药基因和毒力基因的检测，旨在了解我院 ＶＲＥ的耐药基因型，以及上述５种毒力基因在我 院的分布情况，并对ＶＲＥ与ＶＳＥ的致病性进行比 较．探索耐药与毒力因子之间的相关性，为临床预 防和控制肠球菌的流行与传播提供重要依据。
２０ ｍｉｎ，１２ ０００ ｍＬ
１．４统计学处理采用统计软件ＳＰＳＳ １１．０进行 分析。两组间率的比较采用卡方检验，多组间率的
比较采用ＲｘＣ列联表卡方检验．Ｐ＜０．０５为差异有
离心管中，混匀。１００℃水浴１０ ｍｉｎ，迅速４℃冷却 ｒｐｍ离心５ ｍｉｎ，取上清液作模板，一 采用多重ＰＣＲ法［７一ｓ］检测
ｓｕｒｆａｃｅ
ＶＲＥ）的出现和迅速增多更是成为全球公共卫生
的重要威胁［・剖。又有报道［４ｌ指出，ＶＲＥ在欧洲正常
人肠道的定植率高于美国，但其感染率却远低于美 国．提示肠球菌感染率的上升不仅是因为耐药性的 增多，可能还与其致病性增强有关。目前，研究较多 并认为与肠球菌致病性相关的因子主要包括肠球