糖类消化酶活性的测定方法及原理

NaOH，终止酶活性。
③向各管中各加入柠檬酸缓冲液1mL。 ④将测定管与对照管于40℃中加热15min——各加入2mL40℃
预热的淀粉溶液——将2管混合均匀后立即用40℃水浴5min—
—取出后迅速向测定管加入4mLo0.4mol的NaOH ⑤取对照管和测定管中的溶液各2ml，分别加入刻度试管中—— 分别向两只试管加入2ml3,5-二硝基水杨酸——沸水浴5min— —冷却——稀释至20mL——混匀——以制作麦芽糖标准曲线 （2）实验材料 的1号试管为参比溶液，调零，测定540nm处吸光度——记录 淀粉酶液50ML 、恒温水浴锅、刻度试管、0.4mol的NaOH、1%淀粉、3,5-二 结果 硝基水杨酸、麦芽糖标准溶液（ 1mg/ml）、0.1molpH=5.6的柠檬酸缓冲液
于禾谷类的种子中。β-淀粉酶存在于休
眠的种子中，而α -淀粉酶是在种子萌发 过程中形成的。
课本提要
实验原理：
1、在最适温度之前，淀粉酶的活性随着温度的升高而升高，达到 最适温度之后，淀粉酶的活性随着温度的升高而降低至失活。 2、淀粉水解反应：淀粉 蓝糊精－>紫糊精－>红糊精－>无色糊精 －>麦芽糖 遇碘呈现颜色：蓝色－> 蓝色－>紫色－>红色 －> 无色－>无色
3 ,5-二硝基水杨酸比色法
①以1号管为空白调零点，在540nm波长下比色测定光密度，以 麦芽糖浓度（mg/ml）为横坐标，A540nm为纵坐标，用 Excel绘制标准曲线 ②取两只试管一只对照，一只测定——各加淀粉酶原液1ml— —70℃加热15min——冷却——向对照管加4ml0.4mol的
（3）实验操作
B1为对照管中麦芽糖的浓度（mg/ml）
V为酶促反应体积 D为酶液总体积
β 酶活性=(α ＋β )酶活性-α 酶活性
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（1）实验原理
α-淀粉酶：耐热不耐酸，70℃加热15min 仍保持活性，pH<3.6时钝化； β-淀粉酶：耐酸不耐热，70℃加热15min 即钝化 本实验采用加热法钝化β-淀粉酶，测定α淀粉酶的活性。具体方法：利用3,5-二硝 基水杨酸比色法来测定淀粉酶水解生成麦 芽糖的含量，以单位时间内淀粉酶分解生 成麦芽糖的量来表示淀粉酶活性大小，再 与非钝化条件下的（α＋β）总活性进行加 减运算得到另一个淀粉酶的活性
通过标准曲线获得相应的麦芽糖含量（mg/ml）
按下列公式计算淀粉酶活性
α -淀粉酶活性=(A2-A1)*V*D/W 其中：A1为对照管中麦芽糖的浓度（mg/ml）
4 实验结果计算
A2为测定管中α -淀粉酶水解淀粉生成麦芽糖的浓度（mg/ml）
V为酶促反应体积 D为酶液总体积
W为样品鲜重
（α ＋β ）淀粉酶总活力=（B2-B1）*V*D/样品鲜重 其中：B2为(α ＋β )淀粉酶水解淀粉生成麦芽糖的浓度（mg/ml）
糖类消化酶活性的测定方法 及Hale Waihona Puke Baidu理（以淀粉酶为例）
资料查找：林俊凤、罗雨涵、刘恺妍 ppt制作：何叶 演讲者：杨麒麟
淀粉酶的定义及 分类：
淀粉酶是水解淀粉的糖苷键的一类酶的 总称，按照其水解淀粉的作用方式，可 分为α -淀粉酶和β-淀粉酶等。α -淀粉酶 和β-淀粉酶是其中最主要的两种，存在
酶活性的定义： 指酶催化特定化学反应的能 力，其大小可用一定条件下 酶促反应速度来表示，酶促 反应速度可用单位时间内底 物的减少量或产物的增加量 来表示。