骨碎补检验方法验证方案汇总

骨碎补检验方法验证方案

TS-56-001

安徽谓博中药股份有限公司

验证立项申请表

验证方案审批表

参加验证人员

安徽谓博中药股份有限公司

验证文件

一、简介

取净骨碎补或片，照烫法（通则0213）用砂烫至鼓起，撞去毛。

本品形如骨碎补或片，体膨大鼓起，质轻、酥松。

二、验证目的：

骨碎补检验质量标准收载在《中国药典》2015版一部, 为保证生产出的成品符合检验标准的要求,确认该检测方法是否适用于本公司生产的成品检验。现对质量标准分析方法进行验证，确保检验结果的准确可靠。

三、验证范围

①、鉴别

②、含量测定

四、验证小组成员及职责

4.1验证小组成员

4.2人员职责

表1：

五、验证实施步骤

1、为了确保验证数据的准确可靠，采取以下几个先行保障措施

1.1仪器：己经过校正并在有效期内

1.2人员：均经过培训，熟悉方法及使用的仪器

1.3对照品：

1.4材料：均符合检验要求

1.5参考资料：

《中国药典》2015年版一部及四部

2、鉴别

2.1试验A：取本品粉末0.5g，加甲醇30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（1:12:2.5：3）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

2.2试验B：取甲醇30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml 使溶解，作为供试品溶液。另取试验A项下对照品溶液，照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（1:12:2.5：3）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯（365nm）下检视。

2.3检测结果:表2

2.4 验证标准:试验A供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。试验B供试品溶液在与对照品溶液相同的位置未显荧光斑点。

2.5检验结果评价

3、含量测定

照高效液相色谱法测定。

仪器：高效液相色谱仪，编号：

3.1专属性

3.1.1色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-醋酸-水（35:4:65）为流动相；检测波长为283nm。理论板数按柚皮苷峰计算应不低于3000。流速：1.0ml/min；进样量：10μl。

3.1.2对照品溶液的制备：取柚皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含柚皮苷60μg的溶液，即得。

3.1.3供试品溶液的制备：取本品粗粉约0.25g，精密称定，置锥形瓶中，加甲醇30ml，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，用少量甲醇分数次洗涤容器，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

3.1.4空白溶液的制备：

直接取甲醇作为空白溶液。

3.1.5将结果填入下表。

表3 含量测定专属性试验表

3.1.6验证标准：供试品溶液中应呈现与柚皮苷对照品保留时间相同的色谱峰；空白溶液中在这点应无色谱峰。

3.1.7结果评价

3.2准确度

3.2.1色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-醋酸-水（35:4:65）为流动相；检测波长为283nm。理论板数按柚皮苷峰计算应不低于3000。流速：1.0ml/min；进样量：10μl。

3.2.2对照品溶液的制备：取3.1.2项下对照品溶液作为对照品溶液。

3.2.3供试品溶液的制备：取3.1.3项下的供试品溶液，作含量测定用。

3.2.4取本品粉末(过三号筛)约0.25g，置50ml量瓶中，共称九份。

3.2.

4.1三份中分别加3.1.2项下的对照品溶液10ml，置50ml量瓶中，加甲醇30ml，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，用少量甲醇分数次洗涤容器，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

3.2.

4.2三份中分别加3.1.2项下的对照品溶液20ml，置50ml量瓶中，加甲醇30ml，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，用少量甲醇分数次洗涤容器，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

3.2.

4.3三份中分别加3.1.2项下的对照品溶液30ml，置50ml量瓶中，加甲醇20ml，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液置50ml量瓶中，用少量甲醇分数次洗涤容器，洗液滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

3.2.5计算

回收率%=（C－A）/B×100%

式中A为供试品所含被测成分量；

B为加入对照品量；

C为实测值。

回收率限度要求：90~108

RSD限度要求3

3.2.6计算结果填入下表：

表5 含量测定柚皮苷加样回收率试验表

3.2.7结果评价

3.3精密度

3.3.1重复性（设操作人员A）

3.3.1.1色谱条件与系统适用性试验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-醋酸-水（35:4:65）为流动相；检测波长为283nm。理论板数按柚皮苷峰计算应不低于3000。流速：1.0ml/min；进样量：10μl。

3.3.1.2对照品溶液的制备：取3.1.2项下对照品溶液作为对照品溶液。

3.3.1.3供试品溶液的制备：取取本品中粉约0.25g，精密称定，共称6份。置锥形瓶中，