试验一植物染色体压片法
植物染色体压片法
第一部分植物染色体压片法一实验目的1. 学习并掌握根尖处理、染色、压片及制片观察的方法。
2. 观察有丝分裂各时期染色体的形态变化，了解有丝分裂全过程。
二实验原理高等植物有丝分裂主要发生在根尖、茎尖生长点及幼叶等器官的分生组织(分生区)，其中根尖是最常用的材料：①根尖取材容易，操作和鉴定也比其它器官与组织方便；②实验室内采用种子萌发后所长出的新鲜幼嫩根尖，不受植物生长季节的影响和限制，并且可以大量获得；③对于某些珍贵而又稀少的试验材料，取用自然条件下生长植株的根尖，比取用茎尖、花器等对材料的伤害要小得多；④采用实验室内种子发根，切取根尖后的种苗通常还可以进行正常种植，利于后续研究进行。
有丝分裂期在整个细胞周期中所占的时间相对较短，有丝分裂制片的主要目的是进行染色体鉴定，希望观察到更多分裂相，尤其是分裂中期相，通常要对材料进行不同的预处理。
预处理主要通过抑制和破坏纺锤丝的形成来获得更多的中期分裂相；同时，预处理还可改变细胞质的粘度，促使染色体缩短和分散，便于压片和观察。
常用的预处理有物理法、化学法、混合处理法等。
植物细胞的细胞壁对细胞形态和结构起支撑和保护作用，分生组织的细胞壁结构将分生细胞结合成一个整体，因此在压片之前需要采用适当方法软化或部分分解细胞壁使细胞间易于分离，这一操作称为解离。
同时，解离也可适当清除部分细胞质，使细胞质背景趋于透明化，便于观察染色体。
常用的解离方法主要有酸解法和酶解法。
酸解法：步骤简便、容易掌握。
根尖分生组织经过酸解和压片后，呈单细胞。
酸解法广泛用于染色体计数、核型分析和染色体畸变的观察及相关分析。
酶解法：常用于染色体显带技术或姊妹染色单体交换研究。
通过解离和压片，分生细胞的原生质体能够从细胞壁里压出，使染色体周围不带有细胞质或仅有少量细胞质，让后续制片处理直接作用于染色体。
在普通光学显微镜下观察染色体形态结构还需要对材料进行染色，通常采用染色体染色效果好而细胞质着色少的碱性染料、酸性染料或孚尔根试剂染色。
压片法观察植物染色体
压片法观察植物染色体植物根尖的分生细胞的有丝分裂，每天都有分裂高峰时间，此时把根尖固定，经过染色和压片，再置放在显微镜下观察，可以看到大量处于有丝分裂各时期的细胞和染色体。
根尖染色体压片法，是观察植物染色体最常用的方法，也是研究染色体组型、染色体分带、染色体畸变和姊妹染色单体交换的基础。
1.实验材料1.1 实验器材镊子、烧杯、培养皿、载玻片、盖玻片、温度计、试剂瓶、显微镜1.2 材料新鲜培养的豆芽根尖2.实验过程2.1 实验步骤2.1.1 材料准备：培养：取黄豆若干浸泡24h后放入沙盘，25℃下培养，当主根长至0.5—1cm 时去掉根尖，继续培养，直至侧根长度>0.5cm，剪下备用；前处理：用0.02%的秋水仙素处理剪下的根尖4h；固定：将上述根尖放入卡诺固定液（无水酒精：冰醋酸=3:1）中，固定24h；解离：酸解。
取出根尖用蒸馏水漂洗后再放到0.1mol/L的HCl中，60℃水浴中解离15min；染色：将上述根尖用蒸馏水漂洗后放在载玻片上，滴上几滴醋酸洋红溶液，染色20—30min，根尖着色后解压片观察；压片：把染色后的根尖放在洁净的载玻片上，盖上盖玻片，用滤纸吸去多余的染液，并用铅笔轻轻的敲打盖玻片5—8min，使细胞尽量分散开来；观察：将敲打好的片子放在显微镜下观察，找出最佳视野。
2.实验结果及分析经过上述操作，最终在显微镜下观察到了根尖细胞的染色体。
如下图：从上图中可以观察到这些是有丝分裂中期的细胞，染色体散乱的排列在赤道板上，并且可以清晰地数出染色体的数目。
实验注意事项：压片材料要少，以免细胞贴在一起，重复太多；用铅笔敲打盖玻片时要注意用力适中均匀，否则盖玻片很容易破裂。
实验一-植物细胞有丝分裂及染色体行为的观察
使细胞中的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转变为不溶性物质，以保持活体的形态；
使组织内各种物质成分产生不同的折光率，便于观察和鉴定； 使不同组织成分对染料有不同的亲和力，便于染色； 防止细胞过度收缩或膨胀，失去原有的形态结构。
醋酸洋红
将洋红粉末1g倒入100mL45%醋酸溶液中，边煮边搅拌， 煮沸(沸腾时间不超过30s)，然后悬入一生锈的小铁钉 于染液中，过1min取出，或加入1%～2%铁明矾水溶液 5-10滴，至此液变为暗红色而不发生沉淀为止。静置 12h后，过滤于一棕色试剂瓶中，储存备用。
卡宝品红
配制方法： 先配成三种原液,再配成染色液 原液A: 3 g碱性品红溶于100 ml 70%酒精中. 原液B: 取原液A 10 ml加入到90 ml 5%石炭酸水溶液中. 原液C:. 取原液B 55 ml,加入6 ml 冰醋酸和6 ml福尔马林(38%的甲醛). (原液A和原液C可长期保存,原液B限两周内使用). 染色液:取C液10—20 m1,加45%冰醋酸80～90 ml,再加山梨醇1.8 g,配成 10%～20%浓度的石炭酸品红液,放置两周后使用,效果显著(若立即用,则 着色能力差). 适用范围:适用于植物组织压片法和涂片法,染色体着色深,保存性好,使 用2—3年不变质.山梨醇为助渗剂,兼有稳定染色液的作用,假如没有山梨
6.镜检
• 压好的片先在低倍镜下镜检，找到分裂细胞后，再转换成 高倍镜观察染色体动态变化。 • 如果染色体分散良好，图像清晰，可以进行显微照相保存。
一个解离良好的材料，只要用镊子尖轻轻敲打盖玻片，分生组织细胞就可以铺 展成薄薄的一层，再用毛边纸把多余的染色液吸干，经显微镜检查后，选择理 想的分裂细胞，再在这个细胞附近轻轻敲打，使重叠的染色体渐渐分散，就能 得到理想的分裂相。
实验 植物染色体组型分析
实验植物染色体组型分析一、实验目的通过本实验，要求学生初步掌握植物有丝分裂观察的基本流程（包括试验材料的选取、预处理、固定、离解、染色、压片和核型观察等）和染色体组型的分析方法。
二、实验原理有丝分裂是细胞均等增殖的过程，是体细胞分裂的主要方式。
在有丝分裂过程中，细胞内每条染色体都能复制一份，然后分配到子细胞中，因此两个子细胞与母细胞所含的染色体在数目、形态和性质上均是相同的，在各种生长旺盛的植物组织中均存在着有丝分裂。
三、实验材料洋葱根尖四、实验用具显微镜、载玻片、盖玻片、酒精灯、解剖用具、刀片、秋水仙素8—羟基喹啉、醋酸洋红（或醋酸地衣红）、盐酸法莫氏固定液等。
五、实验方法1、洋葱根尖的培养在实验课前3～4天，取洋葱一个，放在广口瓶上。
瓶内装满清水，让洋葱的底部接触到瓶内的水面。
把这个装置放在温暖的地方，注意经常换水，使洋葱的底部总是接触到水。
待根长5 cm时，可取生长健壮的根尖制片观察。
2、预备处理细胞分裂时由于纺锤体的牵引及染色体不一定都缩到最短，故在制片时染色体易相互缠绕、重叠，所以，材料在固定前必须经理化因素预先处理，目的是改变细胞质粘度，破坏或抑制纺锤体的形成，使染色体缩短，并促使染色体分散等。
常用的药物浓度，处理如下：0.04%—0.2%秋水仙碱水溶液处理2—5小时，a—溴代萘饱和水溶液处理0.5—4小时；对二氯苯饱和水溶液处理2—4小时；0.002M—0.2M 8羟基喹啉2—4小时，上述处理在室温下即可，若低温处理则用蒸馏水在1—4度下处理24小时。
这些药物对植物细胞都有不同程度的毒害作用，高温或长时间的处理，往往会产生多倍体或使染色体发生粘结、聚缩和解体现象，因此处理时间一般以4小时以内为适宜，温度以10—16度效果较好。
本实验：用0.002 mol／L的8-羟基喹啉20℃条件下避光处理4 h，或者0.7mM的环己酰胺中室温处理8h，将处理液吸出，然后用蒸馏水漂洗。
3、固定目的是将细胞迅速杀死，并使染色体的结构尽可能保持不变和便于染色。
植物根尖染色体的压片法
植物根尖染色体的压片法
邱希慈
【期刊名称】《生物学教学》
【年(卷),期】1981(000)001
【摘要】<正> 观察植物细胞的染色体在有丝分裂过程中的运动和分配,最好是选用洋葱、蚕豆或玉米做现察材料。
这是因为它取材容易,操作简便,加上它们体细胞的染色体数目少、外形较大所以观察起来也比其它植物清楚。
现以洋葱为例,谈谈其的制作方法。
一、取材:可直接从田间取,也可在室内培养取。
室内的取材方法是,将洋葱置水中萌发.具体步骤是,先取一只100毫升的烧杯盛满水,随后取一张
10×10厘米的窗沙,用绳子将其扎在烧杯口上,然后将洋葱放在上面。
注意根基部需接触到水。
并要求放在具有阳光的条件下进行培养.常温下2～3天后就可得到1～2厘米长的根,此时便可进行取材固定或前处理。
二、前处理,目的是阻止纺锤体的活动,以便得到更多的中期分裂相。
另外使染色体相对的缩短和改变细胞质的粘滞度,因而可达到在制片时染色体易分
【总页数】2页(P44-45)
【作者】邱希慈
【作者单位】
【正文语种】中文
【中图分类】R73
【相关文献】
1.根尖压片法制备树莓染色体标本的研究 [J], 王小蓉;汤浩茹;李玲;段娟;邓群仙
2.中药黄芪根尖染色体压片技术 [J], 杨德奎
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根尖压片实验(使用)
实验2 植物染色体压片法
一、实验原理
植物根尖的分生细胞的有丝分裂，每天都有分裂高峰时间，此时把根尖固定，经过染色和压片，再置放在显微镜下观察，可以看到大量处于有丝分裂各时期的细胞和染色体。
二、实验目的
通过实验，掌握根尖染色体压片法。
三、实验材料
小麦的种子。
四、实验步骤
（1）催芽：5-20粒种子放入培养皿（铺两层滤纸），有一薄层水。
室温下浸种24h左右。
（2）低温预处理：待种子刚萌发时（露白），放入4℃冰箱处理1-2天（一般为1天，24～36h也可）。
（3）生根：将培养皿中的水吸干。
种子腹沟朝下。
放入25℃培养箱中17～20h，不光照。
一般在头一天的早上10点左右放，第二天10点左右取根。
一天中取根较好的时间在早上10点左右，下午4点左右。
（4）取材：当根生长到0.5-2cm时，取根尖0.5cm左右，放入盛水试管中（取根时速度尽量快）。
（5）预处理：在1-4℃下，离体处理24-36小时，最好放在冰浴中，置4℃冰箱。
（6）固定：用卡诺氏Ⅰ（C arnoy’sⅠ）固定液，无水乙醇或95%乙醇：冰乙酸(体积比)=3：1，固定2—7天，4℃冰箱中存放或冰浴中。
（7）转入70%乙醇中保存（-20℃可长期保存）。
第（8）可以不要：（8）根尖处理：将根尖从保存液（70%乙醇）中取出，清水冲洗，加入1N盐酸适量，65℃水浴7-8分钟，取出清水冲洗，
放入锡夫试剂，20分钟后观察（制片观察）。
常规压片法制作植物染色体玻片标本
常规压片法制作植物染色体玻片标本一、实验目的1、了解植物细胞周期中染色体的动态变化。
2、学习植物染色体常规压片技术。
二、实验原理植物染色体的常规压片技术是观察染色体常用的方法。
该技术以生长、分裂比较旺盛的植物根尖细胞为材料，经预处理、固定、解离、染色、压片等程序，就可以观察到较多的处于有丝分裂中期的细胞和染色体。
三、实验材料洋葱鳞茎或蚕豆种子。
四、实验器具及药品恒温培养箱，恒温水浴锅，显微镜，解剖器，载玻片及盖玻片，白瓷盘，秋水仙素，甲醇，冰醋酸，盐酸，乙醇，改良石炭酸品红（卡宝品红）。
卡宝品红染色液的配制：先配母液A 和B。
母液A：称取3 克碱性品红，溶解于100 毫升的70％酒精中（此液可长期保存）。
母液B：取母液A10 毫升，加入90 毫升的5％石碳酸水溶液，充分混匀，置37℃温箱温溶2-4小时（2 周内使用）。
母液C：取母液B55 毫升，加入6 毫升冰醋酸和6 毫升37％的甲醛。
充分混匀。
染色液：取母液C10—20 毫升，加入80—90 毫升45％的醋酸和1.0 克山梨醇（sorbitol）。
此染色液初配好时颜色较浅，放置二周后，染色能力显著增强，在室温下不产生沉淀而较稳定。
常温下可保存2年。
五、实验说明1.根尖由于取材方便，是观察植物染色体最常用的材料，有些植物种子难以发芽，或仅有植株而无种子，也可以用茎尖作为材料。
2.植物细胞分裂周期的长短不尽相同，通常在十到几十小时之间，温度明显地影响分裂周期，对于一个不太熟悉的实验材料，最好在特定温度下长根，掌握有丝分裂高峰期，以便得到更多的有丝分裂的细胞。
3.前处理的目的是降低细胞质的粘度，使染色体缩短分散，防止纺锤体形成，让更多的细胞处于分裂中期，一般在分裂高峰前，把根尖放到药剂中处理3—4 小时。
可处理的药剂很多，如秋水仙素、对二氯苯、8-羟基喹啉等。
4.解离的目的是使分生组织细胞间的果胶质分解，细胞壁软化或部分分解，使细胞和染色体容易分散压平，解离方法有酸解法和酶解法。
压片法实验报告
题目：压片法实验报告目的：掌握压片法的基本技术，以葱为例观察植物有丝分裂的各个时期,并对葱的染色体计数。
材料：葱根尖。
方法与操作步骤一、取材：上午8:30取洁净的葱根尖，取尖端2-3cm长于称量瓶中。
二、前处理：为了得到更多中期分裂项的细胞，同时使染色体缩短和良好分散，可对根尖进行预处理。
处理方法为：浓度为0.002M的8-羟基喹啉前处理3小时三、固定：卡诺氏（无水乙醇：冰醋酸=3:1）固定液（用量应在材料大小的20倍以上）固定9个小时。
四、解离1、用蒸馏水冲洗材料后，用50%乙醇处理30分钟。
2、1mol／L盐酸解离37分钟。
3、软化45%冰醋酸处理30min。
五、染色：改良苯酚品红染色10-18个小时。
六、制片1、取一个根尖放于一张洁净的载玻片的中间。
2、切取根尖端的3-4mm。
3、在材料上滴一滴蒸馏水，盖上盖玻片。
4、用食指和中指固定住盖玻片，然后用笔平整的一端撞击盖玻片，用吸水纸吸取多余水分。
七、镜检1、镜检时先用10*10倍需找比较适合观察的各分裂相细胞。
2、然后在换10*40倍进一步观察所选细胞的染色体分散效果如何，是否在一个近似的平面上。
选取染色体分散比较好，且近似在一个平面上的中期分裂相的细胞做染色体计数；选取典型的各分裂时期观察有丝分裂的前期、中期、后期和末期。
3、将10*40倍下选好的细胞换到油镜（10*100）倍观察，在100倍物镜下观察需要滴香柏油在盖玻片上。
结果与分析一、结果分析1、染色体计数的观察如下列图片所示2n=162n=162n=16 通过以上的观察数出葱染色体条数为2n=16。
1、根尖的选取时间应该在植物细胞分裂最旺盛的时刻，具体时间可以参考前人的研究，如果没有经验可以借鉴则要不同时间段多次取材以作比较。
本实验是根据前人的经验在上午8:30取材。
2、最好在根尖3-5cm长时取材。
3、前处理的时间及8-羟基喹啉的浓度要依材料染色体的大小而定。
如果是大染色体则需要处理时间长，小染色体需要处理的时间短。
实验一 植物有丝分裂过程中染色体行为的观察
实验原理及目的
实验原理：植物根尖细胞的有丝分裂，在适当的 时间对其进行固定，经染色和压片，镜检，可看 到大量处于有丝分裂各时期的细胞和染色体。
实验目的：掌握有丝分裂各时期的特点和根尖染 色体压片法，此法是观察植物染色体最常用的方 法，也是研究染色体组型、染色体分带、染色体 畸变和姊妹染色单体交换的基础。
卡诺固定液：3份无水酒精＋1份冰醋酸。 酒精：有固定、硬化和脱水作用，可以固
定多种材料，但对核蛋白固定效果较差； 冰醋酸对材料有膨胀作用，对核蛋白的固
定效果好。 固定时间:3-24小时.
解离
使分生组织细胞间的果胶质分离，细胞壁 软化或部分分解，使细胞和染色体容易分 散压平。
酶解：纤维素酶和果胶酶，所需时间较长， 成本高，一般不用。
植物根尖的分区
flash
实验材料
蚕豆的种子 洋葱
蚕豆根尖的准备
吸胀24h
盖上双层纱布
铺上双层纱布
蚕豆根尖的准备
20-25℃培养
洋 葱 根 尖 的 准 备
实验步骤
材料准备
固定
水洗 制片
解离染色 镜检
作业及思考题
实验材料为什么要进行固定? 绘制你所观察到根尖染色体的分裂相。
固定
酸解：1份浓盐酸＋1份无水酒精（解离 液），处理时间依不同材料而有差别。
水洗
水洗作用是什么？如果不水洗会有什么 后果？
水洗至少3次.
染色
将水洗后的根尖切去伸长区等，留下 分生区段染色.
染色液：改良石碳酸品红溶液. 染色时间：一般10-15min左右（但也
需依不同材料而定）.
大蒜的核型分析
大蒜染色体的核型分析摘要：本实验采用染色体常规压片法，对大蒜的染色体数目和核型进行了研究核型分析时，通过计算染色体的相对长度、臂指数、着丝粒位置等参数，对大蒜的染色体进行分类，然后按染色体的大小和类型，配对排列后得到大蒜染色体的核型，结果表明，大蒜的染色体数目为：2n=16,核型公式为：2n=16=2X=12m+4sm。
染色体的长度类型公式2n=16=1L+7M2+8M1。
染色体不对称指数为：9.829。
核型分类属于2A型。
关键词：大蒜染色体核型分析1选课背景1.1目的和意义：1.1.1目的：1.了解大蒜染色体的形态及数目。
2.掌握用压片法制作染色体标本的方法。
3.掌握显微摄影、照片冲洗技术和核型分析方法。
1.1.2意义：染色组型分析是对染色体进行分组，对核型的各种特征进行定量和定性的描述，如对染色体长度、着丝点位置、臂比和随体有无等。
为细胞遗传学、分类学和进化遗传学等研究提供实验依据。
1.2国内外研究进展：染色体核型分析是遗传学研究的重要手段, 也是物种分类和鉴定的基本依据。
国内外学者目前已研究出很多核型分析的方法，如：手工核型分析法、染色体图像核型分析系统分析法、利用Adobe Photoshop 软件进行核型分析等。
1.3理论依据：染色体组通常是指生物体细胞染色体所有可测定的表型特征的总称，包括染色体的总数，染色体组的数目，组内染色体基数、每条染色体大小，形态等。
它是物种特有的染色体信息之一，具有很高的稳定性和再现性。
染色体组型分析是对染色体进行分组，对核型的各种特征进行定量和定性的描述，如对染色体长度、着丝点位置，臂比和随体的有无等。
为细胞遗传学、分类学和进化遗传学等研究提供实验依据。
1.4研究方法：制作染色体玻片标本、核型分析1.5研究内容：大蒜染色体核型分析1.6研究条件：种子萌发取根：生长健壮的根尖不仅细胞分裂频率较高，而且染色体形态也比较平直，也就是所谓的“硬染色体”；而根尖生长势差的材料，不仅细胞分裂频率低，而且染色体形态也多是扭曲的，也就是所谓的“软染色体”。
实验一植物染色体压片法
植物 名称 小麦 小麦 小麦 小黑麦 豌豆 烟草 蚕豆 蚕豆 洋葱 茄子 大麦
染色体 数(2n） 42 42 42 56 14 48 12 12 16 24 14
处理因素
0.2%秋水仙素水溶液 对二氯苯饱和水溶液 1～4℃冰箱 对二氯苯饱和水溶液 对二氯苯饱和水溶液 对二氯苯饱和水溶液 0.05～0.1%秋水仙素水溶液 0.05～0.1%秋水仙素水溶液 0.05～0.1%秋水仙素水溶液 0.002M 8-羟基喹啉 0.05～0.1%秋水仙素水溶液
①低温预处理：低温处理可以引起染色 体的缩短并可获得较多的中期分裂相;而且此 法无须使用任何药物，安全性高; 但不同的植 物所需的预处理温度是有差异的，如小麦的 处理温度为1～5℃，水稻和玉米则需6～8℃， 剪下的根尖置于盛有蒸馏水的烧杯内，放入 冰箱中低温预处理20～40h。
②秋水仙素colchicine：是从百合科植物秋水 仙的种子和鳞茎中提取的一种生物碱; 它的分子式为 C22H25NO6。纯的秋水仙素为针状结晶;一般商品 秋水仙素为淡黄色粉末。熔点为155℃，味苦。易溶 于冷水 酒精、氯仿和甲醛，但在热水中溶解度较低， 不易溶于苯和乙醚。
四 实验方法和说明
一生根
用刀片将洋葱的老根削去露出鳞基;然后将 鳞基置于盛水的小烧杯上，放在25℃培养箱内 培养; 待根长到2cm左右时，在上午九时切下 根尖进行下一步处理。
植物细胞分裂周期的长短不尽相同，通常 在十到几十小时之间，温度明显地影咱分裂周 期，对于一个不太熟悉的实验材料，最好在特 定温度下生根，掌握有丝分裂高峰期，以使得 到更多的处于有丝分裂中期的细胞。
各种生物染色体在数目上和形态上是相对恒定的， 并随科属种的不同而具有一定的特征。
植物细胞染色体标本的制作与观察
普通生物学实验课须知1.新生进实验室之前要认真阅读实验室基本知识。
2.每次进入实验室的时间为以课表为准，提前10分钟进入实验室。
3.应严格按照实验平台上预约时间进入实验室进行实验，不来者，视为旷课。
如因特殊情况请假，需在实验开始前至少三天向指导教师说明，在选课平台系统中取消原预约时间，重新预约，一次不做实验或一次不交报告，即按不及格论处。
4.预习实验内容和有关知识，写好预习报告（手写）,前四部分内容（一、实验目的，二、实验原理，三、实验器材与试剂，四、实验步骤与操作方法），无预习报告者扣10分。
5. 实验过程中应认真操作，仔细观察实验现象，做好原始记录(三个实验需要用相机或手机拍照，DNA指纹图谱实验需用U盘拷贝实验结果，请自备拍照工具和U盘)。
6. 预习、课堂操作、课堂纪律、善后处理、实验报告是评分的依据。
7. 实验完毕，要将自己使用的仪器刷洗干净，药品按序恢复原位，台面擦净，把自己做实验的一套东西找齐，经指导老师检查合格并签字后方可离开。
8. 值日生要认真清扫地面、水槽、台面，检查水、电、门窗是否关好。
9. 实验讲义：实验预约系统中可以下载，也可到生命科学与技术学院网站下载。
10. 实验报告模板见附件，需注明姓名、学号、组号、做实验具体时间。
植物细胞染色体标本的制作与观察上课地点：化学楼120 上课时间：选课时任课教师：陈丽杰办公地点：生化楼215 电话：课程要求：预习实验内容，掌握实验目的及原理、仪器和试剂、实验步骤；手写完成预习报告（实验名称、实验目的、实验原理、实验器材与试剂、实验方法与步骤），课堂检查预习报告情况。
实验注意事项：1、实验台上物品按实验室管理老师要求摆放整齐；2、实验废物按实验室管理老师要求收集；3、实验结束后，经老师检查后方可离开。
实验纪律：1、按时上课2、穿实验服（白大衣）3、不许吃东西，课堂严禁大声喧哗4、手机静音实验成绩：预习报告： 20分实验操作： 40分报告内容：结果和讨论 40分植物细胞染色体标本的制作与观察1. 实验背景与原理染色体的研究在生物进化、发育、遗传和变异中都有十分重要的作用。
染色体技术之制片技术的原理
三、比较：
植物染色体标本的制备最常用的方法是压片法， 但压片法的不足是由于细胞堆积致使染色体很难彻 底分散开。 而去壁低渗火焰干燥法则有效地克服了压片法 中存在的染色体分散不开，平展不开等不足，现已 广泛用于核型分析，染色体显带
原理：
有丝分裂是体细胞分裂的主要方式，一般发生在植物的根 尖或茎尖的分生组织中。在有丝分裂时，细胞核与细胞质有 较大的变化，但以细胞核内染色体的变化最为明显，而且是 有规律的进行。 各种生物染色体在数目和形态上是相对恒定的，并随科属 种的不同而具有一定的特征。 人们若需了解某一物种的染色体数目，最有效的方法就是 观察有丝分裂的中期，这样可以得到较为准确的结果。
二、去壁低渗干燥火焰法
原理：
植物细胞有很坚实的细胞壁，染色体很难像动物染色体 那样平整地贴在载玻片上，可通过纤维素酶和果胶酶处理去 掉细胞壁；用低渗溶液处理可以提高染色体的分散程度。 去壁低渗干燥火焰法是：先用纤维素酶和果胶酶去除细胞 壁，得到原生质体，再将细胞进行低渗处理，即把细胞置于 低渗液（低浓度的kcl或蒸馏水）中，使细胞充分吸胀,染色 体分散，平展地铺在载玻片上，再用火焰干燥让染色体紧贴 在载玻片上。
实验一 植物染色体压片法共39页文档
36、“不可能”这个字(法语是一个字 )，只 在愚人 的字典 中找得 到。--拿 破仑。 37、不要生气要争气，不要看破要突 破，不 要嫉妒 要欣赏 ，不要 托延要 积极， 不要心 动要行 动。 38、勤奋，机会，乐观是成功的三要 素。(注 意：传 统观念 认为勤 奋和机 会是成 功的要 素，但 是经过 统计学 和成功 人士的 分析得 出，乐 观是成 功的第 三要素 。
39、没有不老的誓言，没有不变的承 诺，踏 上旅途 ，义无 反顾。 40、对时间的价值没有没有深切认识 的人， 决不会 坚韧勤 勉。
6、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。——斯宾诺莎 7、自知之明是最难得的知识。——西班牙 8、勇气通往天堂，怯懦通往地狱。——塞内加 9、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。——赫尔普斯 10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。——笛卡儿
植物染色体标本的制备和观察
植物染色体标本的制备和观察摘要：目的1、掌握常规压片法制备植物染色体标本的基本原理和方法；2、学会观察和统计植物细胞的染色体数目；3、了解和学习去壁低渗法进行植物染色体制片的基本原理和方法。
方法大蒜的根尖是分裂比较旺盛的，我们可以利用秋水仙素处理根尖使得大蒜根尖的细胞分裂处于分裂中期，然后经固定染色等处理将染色体染色固定，以便观察。
结果大蒜的染色体有16条，都被染色成红色的条状或细丝状物质。
结论大蒜染色体有16条。
关键词：植物染色体；大蒜；秋水仙素前言染色体是遗传物质的载体，本实验便是观察染色体的形态和数目。
植物染色体标本的制备，常用分生组织，如根尖、茎尖和嫩叶做材料。
常规压片法仍是当今观察植物染色体常用的方法。
其程序包括取材、预处理、固定、解离、染色和压片等步骤，即可观察到较多的、处于有丝分裂中期的细胞和染色体。
由于现在洋葱发根较难，我们采用的是大蒜根尖进行相关实验。
材料与方法1.实验材料大蒜根尖、白姜花的根尖、野百合的根尖等。
2.实验试剂：0.02%秋水仙素；改良苯酚品红染液；卡诺氏固定液，1N盐酸，浓盐酸：95%乙醇（1:1）解离液。
3. 实验用具显微镜、剪刀、镊子、刀片、培养皿、吸水纸、滴管、载玻片、盖玻片。
4.实验植物和试剂大蒜根尖、 0.02%秋水仙素；改良苯酚品红染液；卡诺氏固定液，1N盐酸；70%酒精；95％乙醇；85％乙醇；蒸馏水5.实验方法和步骤5.1 取材先将大蒜浸泡若干小时，然后转入一个垫有湿润滤纸的培养皿中，置25℃恒温培养箱中萌发，待幼根长至1~2cm时，于上午9~11时剪下根尖。
5.2 预处理将剪下的根尖放进装有0.02%秋水仙素溶液的烧杯中，浸泡处理3～4小时。
5.3 固定将经过预处理或没有预处理的材料，放到卡诺氏固定液中固定（固定液的量约为材料的10倍，要求一个容器中所装的材料不能太多，温度不能太高）。
固定2～24h后分别在95％和85％乙醇中各30min ，再转入70%酒精中，于4℃冰箱内保存，保存时间最好不超过二个月。
植物细胞有丝分裂染色体制片及观察
三、实验材料
洋葱（Allium cepa）及蚕豆（Vicia faba） 等
四、实验用具及药品
1．用具：显微镜、水浴锅、剪刀、镊子、 刀片、载玻片、盖玻片、酒精灯等。 2．药品：无水乙醇、70%乙醇、冰乙酸、 饱和对二氯苯水溶液、0.1%秋水仙素、 0.1N盐酸。
五、实验步骤
酸解: 取材 固定 解离 酶解 染色 压片 镜检
六、制作永久玻片
冷冻脱片封片法 酒精一叔丁醇脱水封片法 酒精—二甲苯脱片封片法
七、作业及思考题
1.根据你的实验情况总结出制备好一张优 良的细胞分裂标本应注意哪些问题？ 2.常用染料的特点如何？ 3.绘制2～3个有丝分裂典型时期简图。
实验一 植物细胞有丝分裂染色 体制片及观察
一、实验目的
学习和掌握植物根尖细胞有丝分裂染色 体压片技术；观察有丝分裂过程中染色 体的形态特征和动态变化。
二、实验原理
有丝分裂是植物体细胞增殖的主要方式。在有 丝分裂过程中，细胞核内染色体能准确地复制， 并能有规律地均匀分配到两个子细胞中去，使 子细胞遗传组成与母细胞完全一样，从而保证 了性状的发育和遗传的稳定性。 有丝分裂是一个连续的过程，可分为前期、中 期、后期和末期。高等植物的有丝ห้องสมุดไป่ตู้裂主要发 生在根尖、茎尖及幼叶等部位的分生组织。经 过适当的取材处理、固定、离析、染色、压片 等步骤，可获得清晰的植物细胞有丝分裂染色 体动态变化的装片。以进行有丝分裂和染色体 动态的观察。
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背景介绍
血液病是原发于造血系统的疾病，或影响造血系统伴发 血液异常改变，以贫血、出血、发热为特征的疾病。
白细胞 疾病
造血系统 恶性肿瘤
常见血液病
贫血症
出血性疾 病
恶性血液病类型
检测方法
MICM
? FAB形态学诊断(Morphology)：包括血 液和骨髓形态学及组织化学染色。
? 免疫学检查(Immunology ) ? 遗传学检查(Cytogenetics) ? 分子生物学检查(Molecular)
一、形态学
是诊断的基础，任何淋巴造血系统增生性 疾病的诊断都离不开形态学诊断。形态学诊断 技术包括
? 细胞学：外周血、骨髓涂片 ? 组织学：骨髓活检、血凝块
? 外周血涂片检测（血液病血常规）：用 来观察外周血细胞形态、数量。是对血 液分析仪检测的血常规的镜下检测补充。
? 意义： ? （1 ）铁低见于缺铁性贫血； ? （2 ）铁高见于再生障碍性贫血、巨幼红细胞性贫血、
白血病、感染和多次输血病人 ； ? （3 ）环形铁粒幼细胞（ RS ），环铁大于 15% ， 见于
RAS 。
铁粒幼红细胞定义
三、免疫分型
应用：1 、确定系来源：利用不同系有特定的抗原表达可以确定髓 系/B 系/T/NK 系/组织细胞和树突状细胞。
胞的评估具有优势
? 骨髓纤维化、细胞致密可干抽 ? 不存在干抽和骨髓稀释
Байду номын сангаас
? 可做组织化学染色（如铁染） ? 可做免疫组织化学染色
? 对缺铁性贫血、慢性疾病引起的 ? 对再生障碍性贫血、低增生性白血
贫血、巨幼细胞性贫血、和急性
病、淋巴瘤、转移癌、骨髓增生性
白血病的诊断尤其有帮助。
肿瘤的诊断具有重要价值
意义：升高见于严重感染，类白，急淋，骨纤，真 红，再障，ITP , 淋巴瘤等。
降低见于慢粒，急性粒细胞白血病，PNH 。
故可用于慢粒和类白、骨纤；再障和PNH ；急粒和急 淋的鉴别。
? 6 、糖原染色（PAS ）：
? 阳性为红色。可以计算阳性率和阳性指数。
? 意义：（1 ）正常情况下，红细胞系统的原、
? 幼红细胞和成熟红细胞；粒细胞系统的原粒细胞、
? 原单核细胞和大多数淋巴细胞为阴性反应。自早幼粒
? 阶段以后的粒细胞和幼单核细胞可呈弱阳性反应。
? （2 ）急淋、红白血病、戈谢病的原始细胞呈强阳性反应或阳性 反应；缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍、MDS 亦可呈阳性反应； 急性粒细胞白血病、急性单核细胞白血病、良性淋巴细胞增多症、 尼曼-皮克细胞呈阴性反应或弱阳性反应。巨幼细胞性贫血、溶 血性贫血、再生障碍性贫血等幼红细胞为阴性反应。偶有个别幼 红细胞呈阳性反应。
? 3 、骨髓小粒 ? 4 、有无转移瘤和寄生虫。
骨髓病理检测：在高倍镜下观察骨髓的组织结构 和各成分的分布及相互关系。
骨髓活检和骨髓/血涂片
骨髓/血涂片
骨髓活检
? 骨髓涂片细胞细微结构清楚
? 骨髓活检显示骨髓的组织结构和各
评估红系、粒系增生情况及幼稚
成分的分布及相互关系，对巨核细
细胞比例具有优势
? （3 ）帮助鉴别不典型巨核细胞和霍奇金细胞，巨核细胞呈强阳 性反应；霍奇金细胞呈弱阳性或阴性反应。
? （4 ）帮助鉴别白血病细胞和腺癌骨髓转移的腺癌细胞，腺癌细 胞呈阳性反应。
? 7 、酸性磷酸酶染色（ACP ）：阳性酶活
性部位出现红色沉淀，胞核为蓝色。
? 意义：1 、鉴别戈谢细胞和尼曼 -匹克细胞，前 者阳性，后者为阴性。
骨髓涂片看细胞、骨髓活检看结构， 相互补充相互验证 不能相互替代
? 血凝块：废物利用、骨髓活检的补充
骨髓活检常见问题
? 标本取材条件：要求穿刺 1 cm以上骨髓组 织
? 诊断不明确：取材部位是否有病灶 ? 保存液：10%福尔马林固定
二、细胞组织化学染色
? 以形态学为基础，运用化学或生物化学 技术研究细胞内化学成分的分布及变化 的检测方法。对某些血液病的诊断、鉴 别诊断、疗效、判断预后有一定的意义。
? 5 、中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP ）：阳性为灰黑色或黑
色。计算阳性率和积分值：
? 阳性率：计数100 个中性杆状核和分叶核粒细胞，观察其阳性细 胞的个数，即为阳性率。(正常值＜40%)
阳性指数：（+）×1 + （++ ）×2 + （+++ ）×3 + （++++ ） ×4 的总和。（正常值40-80 分）
? 2 、多毛细胞白血病为阳性反应，且耐 L- 酒石 酸的抑制作用。淋巴肉瘤细胞和慢性淋巴细胞 白血病的淋巴细胞，酸性磷酸酶染色也呈阳性 反应，但此酸可被 L- 酒石酸抑制。
? 3 、T 淋巴细胞呈阳性反应，而 B 淋巴细胞为阴 性反应。
? 8 、铁染色（Fe 染色）：阳性为淡绿色。
? 细胞内铁观察有核红细胞； ? 细胞外铁观察骨髓小粒及网状细胞。
? 意义：急性单核细胞白血病强阳性，且 能被氟化钠抑制。急性粒细胞白血病弱 阳性或阴性，不被氟化钠抑制。
? 3 、特异性酯酶（SE ）：阳性红宝石色 颗粒。
? 意义：急性粒细胞白血病阳性或强阳 性。急性单核细胞白血病阴性。慢粒急 粒变阳性增强。
? 4 、苏丹黑B 染色（SBB ）：阳性为黑色。 ? 意义：和POX 基本一样。
? 检测内容包括：白细胞如粒细胞、单核 细胞、淋巴细胞；红细胞；血小板。
? 骨髓涂片检测： ? 1 、骨髓增生程度， G:E ，骨髓小粒及脂肪
油滴有无及分度。
? 2 、粒细胞系统、红细胞系统、淋巴细胞系 统、单核细胞系统、巨核细胞系统、浆细胞系 统以及其他细胞（网状细胞、内皮细胞、纤维 细胞、成骨细胞、破骨细胞、组织嗜碱细胞、 退化细胞等）的形态及比例。血小板的情况。
? 常用的细胞化学染色有：
? 1 、过氧化酶又称髓过氧化酶 (Myeloperoxidase ，MPO 或POX) ： 阳性为棕黑色。用于急性白血病的鉴别： 急性粒细胞白血病为阳性，其中M3 为强 阳性，急性单核细胞白血病为弱阳性， 急性淋巴细胞白血病为阴性。
? 2 、非特异性酯酶（NSE ）：包括中性 非特异性酯酶（α -NAE ，棕黑色）、酸 性非特异性酯酶（A-NAE ，棕红色）， 碱性非特异性酯酶（ α -NBE ，棕红 色） 。