实验五 植物根尖染色体压片技术

实验五植物根尖染色体压片技术

一、实验目的

1．学习植物根尖压片方法的基本技术。

2．熟悉细胞有丝分裂各个时期的形态特征及染色体的变化。

二、实验原理

有丝分裂是体细胞分裂的主要方式，一般发生在植物根尖或茎尖的分生组织中。在有丝分裂时，细胞核与细胞质有很大的变化，但以细胞核内染色体的变化最为明显，而且是有规律地进行。各种生物染色体在数目上和形态上是相对恒定的，并随科属种的不同而具有一定的特征。大蒜体细胞中有8对共16条染色体，在有丝分裂过程中，每个染色体能复制一份，然后分配到两个子细胞中，所以两个子细胞与母细胞所含的染色体在数目、形态和性质上都是相同的。在细胞遗传学研究中，人们常常需要了解某一物种的染色体数目，而最有效的方法就是观察细胞有丝分裂的中期，这样能得到较为准确的结果。

三、实验材料

大蒜根尖。

四、实验器具和药品试剂

显微镜、培养箱、恒温水浴锅、温度计、镊子、解剖针、刀片、载玻片、盖玻片、烧杯、量筒、滴瓶、大培养皿、纱布、吸水纸等。

卡诺氏固定液（甲醇或95%乙醇3份，冰醋酸1份）、改良苯酚品红染色液。

五、实验方法和步骤

1、材料准备选取大蒜茎块放在培养皿中，放清水浸泡，放进20～25℃培养箱内培养。当根尖长1～2cm 时，即可以进行处理。

2、低温处理将材料，浸入蒸馏水内，放置到4℃冰箱中处理24小时以上。

3、固定通常采用的是卡诺氏固定液。固定的目的是用化学的方法把细胞迅速杀死，使蛋白质变性，并尽量保持原来的分裂状态，同时更易于着色。固定时，将根尖投入固定液中4℃冰箱处理24小时。材料若不及时用，可经过90%酒精和70%酒精浸洗一次，再换入新的70%酒精中，置于冰箱内0～4℃保存备用。经过较长时间保存的材料，在进行观察前可用固定液再处理一次，效果较好。

4、解离目的是使分生组织细胞之间的果胶质层解掉，并使细胞壁软化，便于压片。解离的时间视根尖的粗细老嫩不同而有差异。方法是：将固定后（或保存后）的根尖分装到青霉素试管内，用清水洗几次，吸干水，加入1mol/L HCl溶液，在60℃下水解6~8分钟，解离成功的根尖，分生组织发白，伸长区已呈半透明，似烂状。解离后的根尖用水轻洗2～3次，以利于着色。

5、染色、压片将解离后的根尖放在培养皿内，滴加希夫试剂染色10分钟左右。制片时，

取一根尖放在洁净的载玻片上，用刀片切取1mm左右的生长区，其余部分弃掉，加半滴醋酸洋红染色剂（或改良苯酚品红染色液），加盖玻片。用镊子在材料的地方轻压几下，使生长区的细胞分散开来，再在盖玻片上覆盖一层吸水纸，用解剖针或铅笔上的橡皮头敲击根尖部位，重复几次，力一次比一次大，以盖玻片不破裂为准。

（六）观察将制好的标本片，置于显微镜下先作低倍观察，选取不同分裂时期的典型细胞，换高倍镜观察，注意核及染色体的动态变化。

六、作业

绘制出你观察到的有丝分裂各个时期的染色体图。