实验五 植物根尖染色体压片技术
植物染色体标本的制备和观察
植物染色体标本的制备和观察【实验目的】掌握常规压片法和去壁低渗法制备植物染色体标本的基本原理和方法。
【实验原理】植物染色体标本的制备，常用分生组织，如根尖、茎尖和嫩叶做材料。
常规压片法仍是当今观察植物染色体常用的方法，其程序包括取材、预处理、固定、解离、染色和压片等步骤。
但压片法的不足之处是染色体很难分散开，染色体容易变形和断裂。
而去壁低渗法则能较好地克服这弊端，方法也较简单，不需要特殊设备。
它是借助纤维素酶和果胶酶将细胞间的果胶质和组成细胞壁的α-纤维素、半纤维素溶解掉，使植物细胞只有质膜，然后按哺乳类动物染色体标本制备的方法——低渗、火焰干燥法制备植物染色体标本。
实验证明，这一技术可以显著提高染色体的分散程度，现已广泛应用于植物染色体显带，姊妹染色单体交换等研究，大大促进了植物细胞遗传学研究的发展。
【实验仪器、材料和试剂】（一）仪器、用具培养箱、显微镜、剪刀、镊子、刀片、培养皿、滤纸、吸水纸、青霉素瓶、染色缸、载玻片、盖玻片、玻璃板、酒精灯（二）材料蚕豆种子、洋葱鳞茎（三）试剂1．Giemsa 母液：原液的配制：Giemsa 粉0.5g甘油（AR）33ml甲醇（AR）33ml先将少量甘油加入研鉢中，将Giemsa 粉充分研细，再倒入剩余甘油，并在56℃温箱中保温2 小时，然后再加入甲醇混匀，贮存在棕色瓶内。
2．磷酸缓冲液、甲醇、冰醋酸、混合酶液、秋水仙素（或对二氯苯）3．改良苯酚品红染色液。
【方法与步骤】（一）压片法制备染色体标本1．取材把洋葱鳞茎置于盛水的小烧杯上，放在25℃温箱中发根，待根长至2cm左右，于上午9～11 时剪下根尖。
或者把蚕豆种子预先浸泡6小时，然后转入垫有湿润滤纸的培养皿中，置25℃温箱中发芽，幼根长至1～2cm左右，于上午9～11时剪下根尖。
2．预处理将剪下的根尖置对二氯苯饱和水溶液，或0.02%秋水仙素溶液中，浸泡处理4 小时。
3．固定用水洗净处理过的根尖，经甲醇-冰醋酸（3∶1）固定6～12 小时，再经95%、85%酒精各半小时，最后转入70%酒精中，4℃保存备用。
经典遗传学实验(绝对经典)
四、作业和思考题
1．写出制片步骤流程图。 2．制作两张质量较好的临时片（有条件可制作永久片），并绘制减数分裂粗线期、终变期、 中 I、后 I、中 II、后 II 的图像。
二、实验材料和实验用品
1．实验材料 玉米雄花序 2．实用品 显微镜、解剖针、载玻片、盖玻片、镊子、培养皿、酒精灯、吸水纸、纱布、刀片、滤纸、 火柴、等。 3．实验药品 无水乙醇、95%乙醇、重铬酸钾、浓盐酸、浓硫酸、冰醋酸、二甲苯、加拿大树胶和洋红（或 苏木精）。
三、实验方法与步骤
1．取材：选取适当大小的花蕾，是观察花粉母细胞减数分裂的关键性步骤。不同植物取材时 期不同。
（3）封片：片子从最后一级培养皿内取出后稍凉，于载玻片上原来加盖玻片的位置中间滴一 滴完整的加拿大树胶，然后翻转盖玻片（使有材料的一面朝下），按原来的方向和位置轻轻盖在树 胶上。要使盖玻片随着胶的扩展自然下沉，不要施加压力或移动盖玻片。然后平放在阴凉处晾干 再镜检。对于镜检符合要求的片子，在载玻片右端贴上标签，注明标本名称，制片日期。
实验一 植物花粉母细胞减数分裂制片和染色体观察
一、实验原理
减数分裂是生物在性母细胞成熟形成配子过程中发生的一种特殊有丝分裂，它包括连续两次 的细胞分裂，第一次分裂是减数的，第二次是等数的。第一次分裂的前期较长，染色体变化较复 杂，可细分为 5 个时期，即细线期、偶线期、粗线期、双线期和终变期。染色体在减数分裂的行 为对遗传物质的分配和重组产生重大影响。
植物染色体压片法
第一部分植物染色体压片法一实验目的1. 学习并掌握根尖处理、染色、压片及制片观察的方法。
2. 观察有丝分裂各时期染色体的形态变化，了解有丝分裂全过程。
二实验原理高等植物有丝分裂主要发生在根尖、茎尖生长点及幼叶等器官的分生组织(分生区)，其中根尖是最常用的材料：①根尖取材容易，操作和鉴定也比其它器官与组织方便；②实验室内采用种子萌发后所长出的新鲜幼嫩根尖，不受植物生长季节的影响和限制，并且可以大量获得；③对于某些珍贵而又稀少的试验材料，取用自然条件下生长植株的根尖，比取用茎尖、花器等对材料的伤害要小得多；④采用实验室内种子发根，切取根尖后的种苗通常还可以进行正常种植，利于后续研究进行。
有丝分裂期在整个细胞周期中所占的时间相对较短，有丝分裂制片的主要目的是进行染色体鉴定，希望观察到更多分裂相，尤其是分裂中期相，通常要对材料进行不同的预处理。
预处理主要通过抑制和破坏纺锤丝的形成来获得更多的中期分裂相；同时，预处理还可改变细胞质的粘度，促使染色体缩短和分散，便于压片和观察。
常用的预处理有物理法、化学法、混合处理法等。
植物细胞的细胞壁对细胞形态和结构起支撑和保护作用，分生组织的细胞壁结构将分生细胞结合成一个整体，因此在压片之前需要采用适当方法软化或部分分解细胞壁使细胞间易于分离，这一操作称为解离。
同时，解离也可适当清除部分细胞质，使细胞质背景趋于透明化，便于观察染色体。
常用的解离方法主要有酸解法和酶解法。
酸解法：步骤简便、容易掌握。
根尖分生组织经过酸解和压片后，呈单细胞。
酸解法广泛用于染色体计数、核型分析和染色体畸变的观察及相关分析。
酶解法：常用于染色体显带技术或姊妹染色单体交换研究。
通过解离和压片，分生细胞的原生质体能够从细胞壁里压出，使染色体周围不带有细胞质或仅有少量细胞质，让后续制片处理直接作用于染色体。
在普通光学显微镜下观察染色体形态结构还需要对材料进行染色，通常采用染色体染色效果好而细胞质着色少的碱性染料、酸性染料或孚尔根试剂染色。
植物根尖染色体的压片法
植物根尖染色体的压片法
邱希慈
【期刊名称】《生物学教学》
【年(卷),期】1981(000)001
【摘要】<正> 观察植物细胞的染色体在有丝分裂过程中的运动和分配,最好是选用洋葱、蚕豆或玉米做现察材料。
这是因为它取材容易,操作简便,加上它们体细胞的染色体数目少、外形较大所以观察起来也比其它植物清楚。
现以洋葱为例,谈谈其的制作方法。
一、取材:可直接从田间取,也可在室内培养取。
室内的取材方法是,将洋葱置水中萌发.具体步骤是,先取一只100毫升的烧杯盛满水,随后取一张
10×10厘米的窗沙,用绳子将其扎在烧杯口上,然后将洋葱放在上面。
注意根基部需接触到水。
并要求放在具有阳光的条件下进行培养.常温下2～3天后就可得到1～2厘米长的根,此时便可进行取材固定或前处理。
二、前处理,目的是阻止纺锤体的活动,以便得到更多的中期分裂相。
另外使染色体相对的缩短和改变细胞质的粘滞度,因而可达到在制片时染色体易分
【总页数】2页(P44-45)
【作者】邱希慈
【作者单位】
【正文语种】中文
【中图分类】R73
【相关文献】
1.根尖压片法制备树莓染色体标本的研究 [J], 王小蓉;汤浩茹;李玲;段娟;邓群仙
2.中药黄芪根尖染色体压片技术 [J], 杨德奎
3.孔雀草的根尖压片技术及染色体形态分析研究 [J], 齐迎春;周光来;高扬
4.番木瓜根尖染色体压片技术的研究 [J], 任鹏荣;冯瑞祥;游恺哲;李卫红;张颖聪;陈韶辉;周常清
5.一种改进的大麦根尖染色体压片法及其应用 [J], 李淑洁
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根尖压片实验(使用)
实验2 植物染色体压片法
一、实验原理
植物根尖的分生细胞的有丝分裂，每天都有分裂高峰时间，此时把根尖固定，经过染色和压片，再置放在显微镜下观察，可以看到大量处于有丝分裂各时期的细胞和染色体。
二、实验目的
通过实验，掌握根尖染色体压片法。
三、实验材料
小麦的种子。
四、实验步骤
（1）催芽：5-20粒种子放入培养皿（铺两层滤纸），有一薄层水。
室温下浸种24h左右。
（2）低温预处理：待种子刚萌发时（露白），放入4℃冰箱处理1-2天（一般为1天，24～36h也可）。
（3）生根：将培养皿中的水吸干。
种子腹沟朝下。
放入25℃培养箱中17～20h，不光照。
一般在头一天的早上10点左右放，第二天10点左右取根。
一天中取根较好的时间在早上10点左右，下午4点左右。
（4）取材：当根生长到0.5-2cm时，取根尖0.5cm左右，放入盛水试管中（取根时速度尽量快）。
（5）预处理：在1-4℃下，离体处理24-36小时，最好放在冰浴中，置4℃冰箱。
（6）固定：用卡诺氏Ⅰ（C arnoy’sⅠ）固定液，无水乙醇或95%乙醇：冰乙酸(体积比)=3：1，固定2—7天，4℃冰箱中存放或冰浴中。
（7）转入70%乙醇中保存（-20℃可长期保存）。
第（8）可以不要：（8）根尖处理：将根尖从保存液（70%乙醇）中取出，清水冲洗，加入1N盐酸适量，65℃水浴7-8分钟，取出清水冲洗，
放入锡夫试剂，20分钟后观察（制片观察）。
实验五 植物根尖染色体压片技术
实验五植物根尖染色体压片技术一、实验目的1．学习植物根尖压片方法的基本技术。
2．熟悉细胞有丝分裂各个时期的形态特征及染色体的变化。
二、实验原理有丝分裂是体细胞分裂的主要方式，一般发生在植物根尖或茎尖的分生组织中。
在有丝分裂时，细胞核与细胞质有很大的变化，但以细胞核内染色体的变化最为明显，而且是有规律地进行。
各种生物染色体在数目上和形态上是相对恒定的，并随科属种的不同而具有一定的特征。
大蒜体细胞中有8对共16条染色体，在有丝分裂过程中，每个染色体能复制一份，然后分配到两个子细胞中，所以两个子细胞与母细胞所含的染色体在数目、形态和性质上都是相同的。
在细胞遗传学研究中，人们常常需要了解某一物种的染色体数目，而最有效的方法就是观察细胞有丝分裂的中期，这样能得到较为准确的结果。
三、实验材料大蒜根尖。
四、实验器具和药品试剂显微镜、培养箱、恒温水浴锅、温度计、镊子、解剖针、刀片、载玻片、盖玻片、烧杯、量筒、滴瓶、大培养皿、纱布、吸水纸等。
卡诺氏固定液（甲醇或95%乙醇3份，冰醋酸1份）、改良苯酚品红染色液。
五、实验方法和步骤1、材料准备选取大蒜茎块放在培养皿中，放清水浸泡，放进20～25℃培养箱内培养。
当根尖长1～2cm 时，即可以进行处理。
2、低温处理将材料，浸入蒸馏水内，放置到4℃冰箱中处理24小时以上。
3、固定通常采用的是卡诺氏固定液。
固定的目的是用化学的方法把细胞迅速杀死，使蛋白质变性，并尽量保持原来的分裂状态，同时更易于着色。
固定时，将根尖投入固定液中4℃冰箱处理24小时。
材料若不及时用，可经过90%酒精和70%酒精浸洗一次，再换入新的70%酒精中，置于冰箱内0～4℃保存备用。
经过较长时间保存的材料，在进行观察前可用固定液再处理一次，效果较好。
4、解离目的是使分生组织细胞之间的果胶质层解掉，并使细胞壁软化，便于压片。
解离的时间视根尖的粗细老嫩不同而有差异。
方法是：将固定后（或保存后）的根尖分装到青霉素试管内，用清水洗几次，吸干水，加入1mol/L HCl溶液，在60℃下水解6~8分钟，解离成功的根尖，分生组织发白，伸长区已呈半透明，似烂状。
植物染色体制片
实验结果
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实验报告
❖ 在制片的过程中有哪些需要注意的问题？ ❖ 为什么在压片前需要先经过酸水解？ ❖ 植物染色体制备和动物染色体制备的相同
点和主要区别。
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植物根尖染色体标本的制备
1
Hale Waihona Puke 目的要求❖ 掌握植物染色体标本的制备技术
2
实验原理
❖ 制备植物细胞的染色体标本，在取材上必 须选择细胞分裂较旺盛，而且取材较方便 的组织作为实验材料。如植物的根尖。
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实验用品
1、器材：显微镜、水浴锅、载玻片、盖玻片、 镊子、刀片、烧杯等。
2、试剂： 0.1%秋水仙素；Carnoy固定液；1mol/L HCL；
改良苯酚品红 3、实验材料： 洋葱根尖
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预处理：切取长约5mm的植物根尖，浸入 0.1%秋水仙素中，室温下处理3~6小时
将根尖放入1mol/L的盐酸中，60℃水浴， 恒温条件下解离10~15min。
解离后倒出HCl，水洗2次，每次3~5min。将 材料直接浸入改良苯酚品红中，盖上盖玻片。
用镊子或铅笔轻轻敲打，使根尖细胞分散开。
实验根尖有丝分裂和分化
换高倍镜逐一观察分化细胞，注意各种细胞的形
态、结构特点。
各种导管细胞（运输水分和无机盐）
2、使用高倍镜查找处于分裂期：前期、中期、后期、
生长点细胞的特征：
1、细胞体积小，排列紧密； 2、细胞核相对较大； 3、有的出现染色体。
实验2：植物根部细胞分化的观察 一、实验材料：植物幼根 二、实验步骤：
1、幼根装片的ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ作
取1-2cm的有根毛的幼根→置于载玻片上→纵切、 压扁→染色→压片 2、镜检：低倍镜下观察：根冠、分生区、伸长区、 成熟区（根毛区）的根毛和导管细胞。
各种导管细胞（运输水分和无机盐）
植 物 根 尖 的 结 构
具有连续分裂 能力
实验：植物细胞有丝分裂的观察
一、洋葱根尖临时装片制作
1、取材、固定 至根尖酥软透明。 3、漂洗：将根尖在培养皿用清水洗0.5分钟。
2、解离：将根尖在培养皿中用 20%HCl处理8-10分钟，
4、染色：将根尖先于吸水纸上吸去多余的水分，在
载玻片加1-2滴龙胆紫染液，染色1-2分钟。 5、压片：在根尖上加盖玻片，垫2层吸水纸，用拇指 垂直下压，使根尖成均匀薄层，用引流法加少量水。 6、镜检：先低倍镜，后高倍镜观察，找生长点细胞，
观察生长点细胞的特点。
二、观察洋葱根尖固定装片，查找有丝分裂各期图像。
1、在低倍镜下，找到生长点细胞；
末期的细胞，观察各期细胞的主要特征。
实验一 物染色体压片技1.
实验一植物染色体压片技术一、实验原理:植物染色体压片技术是利用化学或物理的方法,将具有分裂能力的细胞保持原有的分裂状态,并对其染色体进行染色,压片后观察它的染色体分裂的一种方法。
二、实验目的:植物染色体压片技术是细胞遗传学和细胞分类学等研究中应用最为普遍的基本技术,是其他新技术所不能完全取代的,是从事染色体研究的工作者首先应该掌握的一项基本的实验方法。
三、材料的制备:黑麦根尖(2n=14根尖材料的制备:1.浸泡:大、油、壳→浸泡24h(23~25℃;小、裸的不浸泡。
2. 发根:将材料放入具有团粒结构条件的土壤中培养(锯木屑、土壤、砾石、麦杆、谷草;最适温度(23~32℃;培养24h→再放入0~4℃冰处理1~7天。
目的:(1使分裂速度减慢,根尖长度整齐一致;(2调节工作时间。
再将材料从冰箱中取出又放回最适温度条件下培养1~2天;待根尖长度为1.5~2Cm即可处理。
3. 愈伤材料的制备:(适合春、夏两季用刀片将树杆割去保护组织露出伤口,用75﹪乙醇消毒包裹一天,再用50~75ppm赤霉素处理;几天后长出白色幼嫩的愈伤组织即可固定。
四、预处理:1. 方法:(化学和物理两种(1 化学方法:(适合所有生物a. 秋水仙素0.05~0.2﹪(白色粉末,易溶于水的巨毒药品;b. 0.002M 8-羟基喹啉(淡黄色晶体,用少量的乙醇溶解再稀释,对禾本科植物的随体表现很清楚;C.а-溴萘饱和液(淡黄色的乳浊液,易溶于乙醇和苯;难溶于水,100ml水中倒入1~2滴剧烈的振动5分钟;(以上abc三种药剂在15~18℃温度下处理3~5hd. 对二氯苯饱和液(淡黄色的晶体,难溶于水;具有强烈的腐蚀性,只能处理1~1.5h。
(2 物理方法:(适合禾本科作物,本次实验所采用冰水混合物在0~4℃温度下处理24h。
预处理的目的破坏或抑制纺锤体形成;增加中期图象,改变细胞质的粘度,使染色体缩短变粗,易于染色体的显带及研究。
五、固定:卡诺氏Ⅰ 3︰1 (乙醇︰醋酸;卡诺氏Ⅱ 6︰3︰1 (5︰3︰2(乙醇︰氯仿︰醋酸;固定的目的利用药剂迅速杀死正在分裂的细胞,使之保持细胞中的染色体处于被固定前的原有状态。
实验四 植物染色体标本的制备与观察
实验四植物染色体标本的制备与观察一、实验目的1、掌握常规压片法制备植物染色体标本。
2、了解中期染色体的形态和结构以及染色体的生物学意义。
二、实验原理染色体是细胞分裂时期遗传物质存在的特定形式，是染色质紧密包装的结果，对染色体的观察在研究生物进化、发育、遗传和异变中有十分重要的作用。
植物染色体标本的制备，常用分生组织如根尖、茎尖和嫩叶做材料。
常规压片法仍是当今观察植物染色体常见的方法，其程序包括取材、预处理、固定、解离、染色和压片等步骤，简单易操作，但是染色体易变形、难分散开。
三、实验仪器、材料和试剂（一）仪器、用具：显微镜、剪刀、镊子、刀片、培养皿、滤纸、吸水纸、青霉素瓶、染色缸、载玻片、盖玻片、玻璃板、酒精灯。
（二）材料：蚕豆(Vicia faba, 2n=2x=12)、黑麦(Secale cereale, 2n=2x=14)、大麦(Hordeum sativum, 2n=2x=14)、普通小麦(Triticum aestivum, 2n=2x=42)、玉米(Zea mays, 2n=2x=20)、豌豆(Pisum sativum, 2n=2x=14)、洋葱（Aillum cepa，2n＝16）等根尖。
（三）试剂1、Carnoy固定液、1%秋水仙素(或对二氯苯)。
2、苯酚品红染色液。
四、实验方法与步骤压片法制备染色体标本：(1) 取材：把蚕豆种子预先浸泡12h，然后转入垫有湿润滤纸的培养皿中上面蒙上湿纱布，置25℃温箱中暗培养发根，经过48h后幼根长至1—2cm左右，于上午9—11时剪下根尖。
(2) 预处理：将剪下的根尖置于对二氯苯饱和水溶液或0.1％秋水仙素溶液中，浸泡处理2-4 h。
(3) 固定：用水洗净处理过的根尖，经Carnoy固定液中固定2-4h，转入70％乙醇中，4℃保存备用。
(4) 解离：取出根尖，用蒸馏水洗净，放入l M HCl中60℃解离8－10min，再用蒸馏水洗净。
(5) 染色：改良苯酚品红染色5—10min。
根尖压片实验报告
一、实验目的1. 掌握植物根尖压片实验的基本操作步骤。
2. 观察植物细胞有丝分裂中期染色体的形态特征。
3. 学习对染色体进行计数，了解植物细胞有丝分裂过程中染色体数目的变化规律。
二、实验原理有丝分裂是植物细胞分裂、体细胞增殖的主要方式。
在有丝分裂过程中，细胞核内染色体准确地复制，并有规律地、均匀地分配到两个子细胞中，使子细胞和母细胞具有同样数目和形态结构的染色体，保证了植物细胞的遗传性状的一致。
根尖压片实验通过药物处理使细胞分裂停止在中期，便于观察染色体的形态特征和计数。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：洋葱根尖、黑麦根尖、玉米根尖、小麦根尖、蚕豆根尖等。
2. 仪器：显微镜、载玻片、盖玻片、解剖针、镊子、滴管、酒精灯、酒精灯架、酒精、盐酸、无水乙醇、冰醋酸、碱性品红、苏木精、秋水仙素、饱和对二氯苯等。
四、实验步骤1. 解离：将洋葱根尖剪取2～3mm，放入盛有质量分数为15%的盐酸和体积分数为95%的酒精混合液的玻璃皿中，室温下解离3～5分钟。
2. 漂洗：用镊子取出解离后的根尖，放入盛有蒸馏水的玻璃皿中漂洗约10分钟。
3. 染色：将漂洗后的根尖放入盛有碱性品红的玻璃皿中，染色3～5分钟。
4. 制片：将染色后的根尖用解剖针轻轻压在载玻片上，盖上盖玻片。
5. 压片：用拇指轻轻按压载玻片，使根尖细胞相互重叠，便于观察。
6. 观察：在显微镜下观察根尖细胞有丝分裂中期染色体的形态特征，并对染色体进行计数。
五、实验结果与分析1. 观察到洋葱根尖细胞有丝分裂中期染色体的形态特征：染色体呈棒状，有两条染色单体，染色质均匀分布，核仁明显。
2. 对染色体进行计数，发现洋葱根尖细胞有丝分裂中期染色体数目为16条。
3. 通过对其他植物根尖细胞有丝分裂中期的观察和计数，发现不同植物根尖细胞有丝分裂中期染色体数目存在差异，如小麦根尖细胞有丝分裂中期染色体数目为14条，玉米根尖细胞有丝分裂中期染色体数目为20条。
六、实验讨论1. 实验过程中，解离、漂洗、染色等步骤对实验结果有重要影响。
压片法观察植物染色体
压片法观察植物染色体植物根尖的分生细胞的有丝分裂，每天都有分裂高峰时间，此时把根尖固定，经过染色和压片，再置放在显微镜下观察，可以看到大量处于有丝分裂各时期的细胞和染色体。
根尖染色体压片法，是观察植物染色体最常用的方法，也是研究染色体组型、染色体分带、染色体畸变和姊妹染色单体交换的基础。
1.实验材料1.1 实验器材镊子、烧杯、培养皿、载玻片、盖玻片、温度计、试剂瓶、显微镜1.2 材料新鲜培养的豆芽根尖2.实验过程2.1 实验步骤2.1.1 材料准备：培养：取黄豆若干浸泡24h后放入沙盘，25℃下培养，当主根长至0.5—1cm 时去掉根尖，继续培养，直至侧根长度>0.5cm，剪下备用；前处理：用0.02%的秋水仙素处理剪下的根尖4h；固定：将上述根尖放入卡诺固定液（无水酒精：冰醋酸=3:1）中，固定24h；解离：酸解。
取出根尖用蒸馏水漂洗后再放到0.1mol/L的HCl中，60℃水浴中解离15min；染色：将上述根尖用蒸馏水漂洗后放在载玻片上，滴上几滴醋酸洋红溶液，染色20—30min，根尖着色后解压片观察；压片：把染色后的根尖放在洁净的载玻片上，盖上盖玻片，用滤纸吸去多余的染液，并用铅笔轻轻的敲打盖玻片5—8min，使细胞尽量分散开来；观察：将敲打好的片子放在显微镜下观察，找出最佳视野。
2.实验结果及分析经过上述操作，最终在显微镜下观察到了根尖细胞的染色体。
如下图：从上图中可以观察到这些是有丝分裂中期的细胞，染色体散乱的排列在赤道板上，并且可以清晰地数出染色体的数目。
实验注意事项：压片材料要少，以免细胞贴在一起，重复太多；用铅笔敲打盖玻片时要注意用力适中均匀，否则盖玻片很容易破裂。
植物根尖有丝分裂制片观察.
The Cell Cycle
What is the purpose of making more cells?
Growth
Larger bones, bigger heart, more brain tissue
Repair of damaged tissues
Muscle tears, dead skin cells, broken blood vessels
Chromatin condenses into chromosomes visible under the microscope.
Nuclear envelope fragments. Spindle fibers begin to form.
Metaphase
Chromosomes (2 chromatids) line up along the metaphase plate.
自1937年美国学者布莱克斯利 （A.F.Blakeslee）等用秋水仙素加倍曼陀罗等植物 的染色体数获得成功以后，秋水仙素就被广泛应用于 细胞学、遗传学的研究和植物育种的工作中。例如， 小麦与黑麦杂交，杂种是不育的，用秋水仙素处理， 使染色体加倍，就变成可育的异源八倍体小黑麦，在 云贵高寒地区种植，产量和品质都比小麦和黑麦好。 50年代日本用秋水仙素处理普通甜菜得到了四倍体， 后者与二倍体品种相间种植，从四倍体植株上收获到 三倍体种子。推广种植三倍体甜菜，获得了很大的经 济效益。1951年，日本学者木原均，用同样方法培育 成功三倍体无籽西瓜，秋水仙素也起了重要作用。
The nucleus and its contents are divided.
There are 4 phases of mitosis:
根尖细胞装片制作流程
根尖细胞装片制作流程
方法和步骤
① 根的培养洋葱的根用水培养。
培养皿盛满水，将洋葱底部浸入水中，放在实验室北侧的窗边，室温、自然阳光下，并每日换一次水，3-5日可取根。
种子发芽培养时用直径15cm的培养皿，底部铺两层浸湿的吸水纸，放在室温（23°C）的条件下3-5日即可。
② 固定解离及染色
a从上午8时开始每隔1h选取一定数量的根放入酒精：兵醋酸=3：1的固定液中，室温下浸泡10min，然后转入70%的酒精溶液中保存待用。
b、将固定以后的根转入盛有15%HCl溶液的试管中，再将试管放入盛有60°C-65°C的水溶液中解离约3min。
c、将根从解离液中取出，放在载波片上，切取尖端1mm-3mm滴加0。
2%的醋酸洋红液1-3滴染色5min。
③ 装片的制作
染色以后的根尖之上，盖上盖波片，用拇指垂直轻压盖波片，以使细胞分散开。
若要制成永久装片，可用干冰法，取掉盖波片，室温下风干一昼夜。
④ 观察
先在低倍镜下找到生长点部位，然后换上高倍镜详细观察。
大蒜根尖染色体观察实验.
大蒜根尖染色体实验报告一、实验目的与实验要求1、掌握洋葱培养的方法，掌握利用秋水仙素诱导植物多倍体的方法。
2、掌握洋葱根尖制片的方法，复习染色、压片的基本操作。
3、通过对于有丝分裂相的观察，统计洋葱染色体数目，加深对于细胞有丝分裂过程的理解。
4、对比进行多倍体诱导前后的洋葱根尖，理解四倍体与二倍体的区别，认识微核和植物细胞分裂期的各形态特征。
5、体验开放式实验教学，培养生物实验意识，提高学习的主动性、获取实验知识的能力和撰写实验报告水平。
二、实验方案1、实验仪器显微镜、载玻片、盖玻片、试管、烧杯、小塑料管、滤纸、刀片、解剖针、滤纸等 2、实验药品新鲜、健康的洋葱鳞茎一个；0.02%秋水仙素、1mol/L HCl、醋酸洋红染液、卡诺氏固定液，碱性品红、乙酸，乙醇等。
3、实验原理 (1 洋葱的根尖洋葱根尖的整体结构如右图，其中只有分生区的初生分生组织由于细胞始终处于持久而强烈的有丝分裂之中而作为我们的观察对象，其余部分在制片时都应当尽量剔除来保证观察效果。
(2 多倍体的诱导多倍体的诱导使用秋水仙素，秋水仙素可以阻止微管蛋白的聚合，从而使有丝分裂中期纺锤体不能正常形成，但是姐妹染色单体照常想成，只是没有被拉向两级，于是染色体数目加倍。
各步骤的作用：固定液可以迅速杀死细胞，保持细胞形态在有丝分裂相。
解离可以破坏细胞的胞间层（果胶），使细胞之间的联系变松散，有利于压片和染色。
漂洗可以洗去过量的盐酸，防止解离过度破坏细胞结构或影响染色效果（盐酸是酸性，而醋酸洋红是碱性染料）。
(3 有丝分裂完整的有丝分裂相包括G1期（合成前期）、S 期（合成期）、G2期（合成后期）和M 期（分裂期），其中G1期、S 期和G2期合称间期，细胞完成DNA 的复制以及有丝分裂的准备，而M 期又可以分为前期、中期、后期和末期，为了形态观察的方便，本实验采用后一种分法。
如表一。
表一植物有丝分裂各时期特点4、实验步骤(1 将大蒜剥皮后放进垫了滤纸的培养基中，加入清水，放进25℃恒温培养箱中2~3天，催化大蒜生根。
植物染色体研究技术
二 地衣红 一种地衣中提取的紫红色染料。 配制方法 100ml45%冰乙酸置200ml三角烧瓶加热煮沸，移去 火源，缓缓（切记缓缓，否则沸腾喷溅）加入2g地衣红 粉末，搅动溶解。此为母液，装棕色瓶储存备用。母液用 45%冰乙酸稀释成1%地衣红染色液直接用于染色。 另有一种可以省略材料解离的方法是将上述母液取9 份与1份1mol/L HCl混合为A液，再将母液用45%乙酸稀 释成1%地衣红（B液）。 制片时，固定的材料稍加水洗，直接投入A液，酒精 灯加热数秒，室温放置30分钟，取出材料B液染色压片。 乙酸地衣红染色不能在压片前加热烘烤，只能在压片 之后进行，否则退色。地衣红易溶于酒精，制片不可用酒 精脱水封片。
A 离体处理 将根尖从植物体上切割下来，浸入处理液中进行前处理。 B 非离体处理 一般在植物原材料较小，如萌发的种子，而且是无土培养，可 以采用此方法。无须切割根尖，把整个种子浸泡于处理液中即可。此 方法的优点是根尖生长未受到断绝营养的影响，可以获得更多中期分 裂相的细胞。但很多材料无法应用该方法，又所需处理液较多。
C 正常栽培植株根 a 季节性强，一般只能在春季和夏季进行；b 生长状态一般要求 植株生长健壮。
鳞茎水培根 百合科、石蒜科鳞茎植物，如葱、蒜、百合等。优点是培养方便， 易于解决水气矛盾，根尖洁净而利于压片操作。 扦插条根 木本植物或多年生具地上茎草本：杨、柳、菊花。 归根结底，种子根尖取材是想方设法 使得根尖生长旺盛，分生组织细胞分裂指数 高，也就是有可能大量细胞同时处于分裂过 程中。这就需要给予培养材料最适宜的培养 条件。 质量好的根尖：可以看到大量根毛， 且为乳白色。
三 处理时间
处理时间受下面几个因素的影响，为其共同作用的结果。一般情 况下，处理时间控制在半个工作日。 A 材料 B 染色体大小 C 处理方法 D 处理液浓度 E 材料大小 F 处理液温度：多在室温。 具体材料的处理条件和时间由预实验摸索。当然，许多植物植物 都有人研究过，我们在计划实验之前，首先要参考别人的工作。如果 没有，可参照近缘物种的处理条件和时间。
实验三 植物染色体压片技术
四、实验步骤
取大蒜置于盛水的培养皿上，25℃培养，当根长到2cm时， 摘下根尖，加入0.02%秋水仙素溶液，3-4小时。 处理过的根尖用卡诺氏固定液固定24小时，70%乙醇清洗后， 泡在70%乙醇溶液中。(已完成） 取1-3个根尖用蒸馏水清洗后，放到HCl中，60 ℃8-10min， 用蒸馏水清洗后于载玻片上，用石炭酸品红染液染色35min。 压片：去掉根冠及延长区，加1滴染液，盖片，压片。
有丝分裂过程
有丝分裂包含两个紧密相连的过程：先是细胞
核分裂，即核分裂为两个；后是细胞质分裂，即细 胞分裂为二，各含有一个核。 细胞分裂是一个连续的过程，但为了便于描述 起见，一般把核分裂的变化特征分为四个时期，前
期、中期、后期和未期。
现把这4个时期描述如下：
1、前期 前期：细胞核内出现细长而卷曲的染色体，以后
大蒜根尖解剖针镊子载玻片盖玻片培养皿显微镜等70酒精卡诺氏固定液石炭酸品红染液蒸馏水01m盐酸等三实验材料取大蒜置于盛水的培养皿上25培养当根长到2cm时摘下根尖加入002秋水仙素溶液34小时
一、实验目的
利用根尖染色体压片技术观察植物染色体。
掌握压片方法。
二、实验原理
植物根尖的分生细胞进行有丝分裂，在分裂 高峰时间，固定根尖，经过染色、压片，可 以观察有丝分裂各时期染色体的特点。
逐渐缩短变粗，每个染色体含有两个染色单体。
核仁和核膜逐渐模糊不明显，出现纺缍丝 。
看模式图
前期的四个时期模式图
2. 中期 核仁和核膜消失，细胞内出现由来自两极的纺 锤丝所构成的纺锤体。各个染色体的着丝点均 排列在纺锤体中间的赤道面上。染色体具有曲 型的形状，因此是鉴别和计数的好时期。
洋葱根尖实验
一、实验目的
实验目的
学习和掌握植物根尖细胞有丝分裂染 色体压片技术；观察有丝分裂过程中 各分裂时期的染色体形态特征
三、实验材料
实验材料
洋葱、蚕豆、吊兰等 植物根尖
四、实验用具及药品
1．用具：显微镜、镊子、刀片、载玻 片、盖玻片、吸水纸、培养皿等。 2 ． 药 品 ： 20%HCL 、 0.2% 龙 胆 紫 染 液 、 清水、卡诺固定液（冰醋酸：乙 醇=1：3）
有丝分裂是植物体细胞增殖的主要方式。
固定：卡诺固定液（冰醋酸：乙醇=1：3）
分生区（生长点）：细胞排列整齐紧密，成方形，细胞核大有点正在进行分裂
高等植物的有丝分裂主要发生在根尖、茎尖及幼叶等部位的分生组织。
洋葱、蚕豆、吊兰等 植物根尖
分裂间期 分裂前期 分裂中期
谢谢观看
漂洗:目的洗去酸性解离液，便于用碱性染料染色
洋葱、蚕豆、吊兰等 植物根尖
压片：吸去多余的染液，加1滴清水，盖上盖玻片，覆上2-3层吸水纸用拇指用力下压（不能辗转）。
实验
植物细胞有丝分裂的观察
观察有丝分裂过程中各分裂时期的染色体形态特征
有丝分裂是一个连续的过程，可分为前期、中期、后期和末期。
取材：（上午8：00）左右根长到1cm时剪下
1．用具：显微镜、镊子、刀片、载玻片、盖玻片、吸水纸、培养皿等。
取材：（上午8：00）左右根长到1cm时剪下
固定：卡诺固定液（冰醋酸：乙醇=1：3）
压片：吸去多余的染液，加1滴清水，盖上盖玻片，覆上2-3层吸水纸用拇指用力下压（不能辗转）。
解离：20%HCL（5分钟左右）目的：使根尖组织
易于分散
2%龙胆紫染 液 、 清水、卡诺固定液（冰醋酸：乙醇=1：3）
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实验五植物根尖染色体压片技术
一、实验目的
1．学习植物根尖压片方法的基本技术。
2．熟悉细胞有丝分裂各个时期的形态特征及染色体的变化。
二、实验原理
有丝分裂是体细胞分裂的主要方式，一般发生在植物根尖或茎尖的分生组织中。
在有丝分裂时，细胞核与细胞质有很大的变化，但以细胞核内染色体的变化最为明显，而且是有规律地进行。
各种生物染色体在数目上和形态上是相对恒定的，并随科属种的不同而具有一定的特征。
大蒜体细胞中有8对共16条染色体，在有丝分裂过程中，每个染色体能复制一份，然后分配到两个子细胞中，所以两个子细胞与母细胞所含的染色体在数目、形态和性质上都是相同的。
在细胞遗传学研究中，人们常常需要了解某一物种的染色体数目，而最有效的方法就是观察细胞有丝分裂的中期，这样能得到较为准确的结果。
三、实验材料
大蒜根尖。
四、实验器具和药品试剂
显微镜、培养箱、恒温水浴锅、温度计、镊子、解剖针、刀片、载玻片、盖玻片、烧杯、量筒、滴瓶、大培养皿、纱布、吸水纸等。
卡诺氏固定液（甲醇或95%乙醇3份，冰醋酸1份）、改良苯酚品红染色液。
五、实验方法和步骤
1、材料准备选取大蒜茎块放在培养皿中，放清水浸泡，放进20～25℃培养箱内培养。
当根尖长1～2cm 时，即可以进行处理。
2、低温处理将材料，浸入蒸馏水内，放置到4℃冰箱中处理24小时以上。
3、固定通常采用的是卡诺氏固定液。
固定的目的是用化学的方法把细胞迅速杀死，使蛋白质变性，并尽量保持原来的分裂状态，同时更易于着色。
固定时，将根尖投入固定液中4℃冰箱处理24小时。
材料若不及时用，可经过90%酒精和70%酒精浸洗一次，再换入新的70%酒精中，置于冰箱内0～4℃保存备用。
经过较长时间保存的材料，在进行观察前可用固定液再处理一次，效果较好。
4、解离目的是使分生组织细胞之间的果胶质层解掉，并使细胞壁软化，便于压片。
解离的时间视根尖的粗细老嫩不同而有差异。
方法是：将固定后（或保存后）的根尖分装到青霉素试管内，用清水洗几次，吸干水，加入1mol/L HCl溶液，在60℃下水解6~8分钟，解离成功的根尖，分生组织发白，伸长区已呈半透明，似烂状。
解离后的根尖用水轻洗2～3次，以利于着色。
5、染色、压片将解离后的根尖放在培养皿内，滴加希夫试剂染色10分钟左右。
制片时，
取一根尖放在洁净的载玻片上，用刀片切取1mm左右的生长区，其余部分弃掉，加半滴醋酸洋红染色剂（或改良苯酚品红染色液），加盖玻片。
用镊子在材料的地方轻压几下，使生长区的细胞分散开来，再在盖玻片上覆盖一层吸水纸，用解剖针或铅笔上的橡皮头敲击根尖部位，重复几次，力一次比一次大，以盖玻片不破裂为准。
（六）观察将制好的标本片，置于显微镜下先作低倍观察，选取不同分裂时期的典型细胞，换高倍镜观察，注意核及染色体的动态变化。
六、作业
绘制出你观察到的有丝分裂各个时期的染色体图。