淋球菌耐药研究进展

ｍｔｒＲ活化子的结合位点，Ｔ／Ａ缺失破坏了活化子的 结合；③Ｔ／Ａ缺失可能促进ｍｔｒＣＤＥ的启动子与 ＲＮＡ聚合酶或转录活化子的结合。王冬梅等¨４ ｏ研 究证实，ｍｔｒＲ启动子区域１３ｂｐ回文序列单个Ｔ／Ａ 碱基的缺失引起的ｍｔｒＣＤＥ外排泵表达增加与外膜 孔蛋白表达的缺失或下降导致的膜通透性降低，在 介导淋球菌产生高水平多蕈耐药中起一定的作用。 Ｍａｒ即细菌表现出对多种化学结构完全不同的 抗菌药物的耐药。近来一系列的研究表明细菌中的 主动外排系统是细菌产生Ｍａｒ的主要原因之一。淋 球菌的ｍｔｒＣＤＥ外排系统表达异常导致淋球菌对 ＨＡＳ的耐药，同时ｍｔｒ系统的突变与特异性耐药机 制的共同存在使细菌的耐药性更加复杂。研究发 现，淋球菌对ＨＡＳ的抗性增加，ｍｔｒＣ蛋白含量增加， ｍｔｒＲ突变三者常同时出现。在人工构建ｍｔｒＲ基因 突变株中，上述现象得到证实，其中Ｔ／Ａ缺失致高 水平的耐药，ｍｔｒＲ编码区基因突变致中等水平的耐 药。因此，ｍｔｒＲ基因突变在淋球菌Ｍａｒ菌株的产生 中起重要作用。ｍｔｒ基因的突变可引起淋球菌对四 环素、氯霉素、疏水性Ｂ一内酰胺类抗生素、夫西地 酸、利福平、红霉素、阿齐霉素等药物的Ｍａｒ性或抗 性增加。Ｄｏｕｇｈｔｅｒｔｙ在１９８６年报道，Ｂ一内酰胺酶阴 性的青霉素耐药淋球菌株中毫无例外均有ｍｔｒＲ基 因的变异，因此染色体介导的青霉素耐药株与ｍｔｒ 基因变异有密切的关系。Ｍｉｎｓｈｅｎｇｘｉａ对１９９５—１９９７ 年发生在美国ｋｉｎｇ Ｃｏｕｎｔｒ）ｒ地区６５例由Ｍｔｒ株引起 的淋球菌病例进行研究，６５例标本中选择１９株进 行ｍｔｒＲ基因序列以及脉冲电泳分析发现，１９株中 １８株淋球菌有１３ｂｐ回文序列的３ ７端一个Ｔ／Ａ的缺 失。Ｃｏｕｓｉｎ等¨纠先后分离出ｍｔｒＲ启动子１３ｂｐ回 文序列发生单个Ｔ碱基插入的淋球菌，该突变并未 引起淋球菌对红霉素、青霉素、四环素的敏感性发生 改变。在对乌拉圭５ｌ例淋病患者的研究中发现，淋 球菌对阿齐霉素的敏感性普遍降低，并同时表现出 ＨＡＳ的交叉抗性；进一步分析发现ｍｔｒＲ４５位氨基 酸的突变是导致上述现象出现的主要原因。临床分 离的喹诺酮耐药株亦有旋转酶突变与主动外排耐药 机制共同存在而导致耐药性增高的报道。 ２染色体介导的耐药 耐青霉素淋球菌菌株（ＰＰＮＧ）的耐药机制有两 种，即由质粒介导的（产Ｂ一内酰胺酶）和染色体介 导的耐药，后者不产生Ｂ一内酰胺酶，而是由于染色 体上多位点选择性突变所致。因此，通过测定Ｂ一 内酰胺酶将淋球菌分成质粒介导的和染色体介导的 二种耐药株。：染色体上的基因位点的突变引起的淋 球菌对抗生素的耐受现象被称为染色体介导的耐 药。细菌内膜青霉素结合蛋白（ＰＢＰｓ）的位点改变 是产生染色体介导的耐药青霉素株的关键。淋球菌 主要有３种分子量的ＰＢＰｓ，分别为ＰＢＰｌ（８７０００）、 ＰＢＰ２（５９０００）、ＰＢＰ３（４４０００），其中染色体介导的淋 球菌对青霉素的耐药部分是因为ＰＢＰ２改变所引 起。染色体介导的与青霉素及与四环素耐药相关的
５ＡＡＡＡＡＧＡＣ姗，该序列３’端的一个Ｔ／Ａ易缺
ｍｔｒＣ基因间的启动子区域有一段１３ｂｐ回文序列
失。ＤＮＡ结合蛋白有ａ一螺旋一转折一ａ一螺旋超二级
基序（ＨＴＨ），其中第２个ａ一螺旋结构介导ＤＮＡ结 合蛋白与目标ＤＮＡ结合，并对维持ＤＮＡ－蛋白质结 构的稳定性有重要作用。而４５位氨基酸即位于 ＭｔｒＲＨＴＨ结构的第２个ａ一螺旋中，因此４５位甘氨
离菌株及实验室重构菌株常见突变位点为：①ＭｔｒＲ
的４０位氨基酸（丙氨酸一苏氨酸），４５位氨基酸（甘 氨酸一天门冬氨酸），１０５位氨基酸（组氨酸一酪氨
酸），其中以４５位氨基酸的突变最常见；②ｍｔｒＲ与
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明显增加，虽然有很多研究显示头孢曲松对淋球菌
的敏感性依然很高【１，２３，但其一线用药的霸主地位 已经发生动摇，已经有很多耐头孢曲松菌株的报 告¨。Ｊ。有研究显示，淋球菌对青霉素、四环素耐药 率分别为９１．５％和７０．４％，环丙沙星的耐药率已高 达９２．３％Ｌ６ Ｊ。某些地区环丙沙星耐药高达９８． ９９％Ｌ７Ｊ，淋球菌的耐药已成为淋病防治中的一大难 题。通过对近年文献进行研究，现将淋球菌耐药机 制综述如下。 １主动外排系统
主要位点包括ｐｅｎＡ、ｐｏｎＡ、ｐｅｎＢ、ｐｅｎＣ、ｍｔｒ及 ６。。研究发现，编码ＰＢＰ２的研究发现，编码 ＰＢＰ２的青霉素结合蛋白２基因（ｐｅｎＡ）出现点突 变，在对青霉素敏感的淋球菌株的ｐｅｎＡ插入一个 精氨酸序列（ＣＧＡ），就会导致其编码的青霉素结合 蛋白２（ＰＢＰ２）结构的改变，使ＰＢＰ２与青霉素的亲 和力下降，细胞膜对青霉素的渗透性降低，细菌耐药 水平升高。ｇｙｒＡ和ｐａｒＣ基因突变主要与喹诺酮类 药物耐药密切相关［１７】，还可能与头孢菌素类抗生素 敏感性降低有关。 ３质粒介导淋球菌耐药 质粒是染色质外的双链环形ＤＮＡ，可形成超螺 旋结构，并能自主复制，随宿主细胞分裂而传给后 代。细菌中许多天然的质粒含有抗药性基因，可编 码合成能分解破坏抗生素的酶，这种质粒称为抗药 性质粒，又称Ｒ质粒。另有质粒基因编码的蛋白质 能使两个细菌间形成细管样接合，通过细管，遗传物 质可在两个细菌间传递，这称为Ｆ质粒。许多细菌 耐药常与Ｒ质粒在细菌间传播有关，而Ｆ质粒能促 使这种传递。１９７３年，４．２ｋｂ的隐蔽性质粒首次从 １例淋病患者中被检测到，以后陆续检测到耐青霉 素质粒（非洲型５．３ｋｂ，亚洲型７．４ｋｂ和４．９ｋｂ多伦 多型质粒）、高度耐四环素质粒（４２．５ｋｂ）和接合型 质粒（３９．５ｋｂ）。研究表明：接合型质粒与耐药性质 粒在菌株间的播散有密切的关系，它能够在不同的 淋球菌之间甚至淋球菌与其他细菌之间转移其耐药 质粒，淋球菌可以通过质粒的结合、转化等途径实现 其耐药基因在菌株间的传递。张铁军等¨驯的研究 证明，淋球菌的耐药质粒可以在不同的菌属之间进 行交换，导致耐药性在不同的菌株之间、不同的种属 之间进行传递，引起菌株耐药性的流行。并认为７． ４ｋｂ的质粒可能会介导淋球菌高水平的青霉素耐药 性，４２．５ｋｂ及３９．５ｋｂ质粒可能与介导四环素高水 平耐药有关‘１９ ３。 目前，虽然对淋球菌的耐药性研究取得了一定 的进展，但仍存在着许多问题，淋球菌的耐药日趋严 峻，目前对青霉素、四环素、环丙沙星等耐药率已相 当高，头孢曲松、大观霉素也已逐渐出现敏感性降低 的情况，并且有的地区耐药率正在上升。随着抗菌 药物的广泛应用，淋球菌的耐药性问题会更为突出， 且将会更加严重。因此，要加强临床菌株的耐药性 研究，并根据淋球菌耐药情况及耐药原因针对性地 进行处理，例如对相应染色体改变进行的调整、对耐 药质粒的消除，或者对外排系统的干预，恢复淋球菌 对传统抗生素的敏感性，为指导临床合理用药以及 抗生素的开发提供了新的证据。 参考文献： ［１］ 朱邦勇，李伟，黄培勇，等．淋球菌耐药监测的 流行病学研究［Ｊ］．中国麻风皮肤病杂志， ２００９，２５（１）：３２－３４． ［２］ 张铁军，周晓明，张颖华，等．上海地区淋球菌 临床分离株对不同抗生素的敏感性分析［Ｊ］．
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ｓｉｓｔａｎｃｅ
达水平，但在具有ｍｔｒ表型的淋球菌，ｍｔｒＦ介导其
对ＨＡＳ的高水平耐受中起着关键性的作用¨“。 回文序列中Ｔ／Ａ缺失，同样促进ｍｔｒＣ的表达， 提高细菌的主动外排功能。可能的机制为：０）Ｔ／Ａ 的缺失缩短了ｍｔｒＲ一１０、３５区的距离，可能影响 ＲＮＡ聚合酶的结合；②１３ｂｐ的回文序列可能为
近年来，一系列的研究表明淋球菌的主动外排
系统中的多重可传递耐药（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｔｒａｎｓｆｅｒｒａｂｌｅ ｍｔｒ）系统的基因突变是引起淋球菌多重耐 药的主要原因之一【ｇＪ。 Ｉｎｔｌ＂系统的调节机制主要发生在转录水平， ＭｔｒＲ阻遏蛋白与ｍｔｒＣＤＥ结合影响转录。Ｉｍｅａｓ证 实，ＭｔｒＲ与ｍｔｒＣＤＥ结合于ｍｔｒＣＤＥ启动子区～段 长度为２６ｂｐ的区域，包括ｍｔｒ的启动子和ｍｔｒＲ启 动子３５区。ｍｔｒＲ编码区及ｍｔｒＲ启动子区的突变 影响ＭｔｒＲ的表达，进而影响ｍｔｒＣＤＥ的转录，最终 影响ｍｔｒＣＤＥ主动外排复合体蛋白的功能。临床分
［２ ３
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Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｏｌｅ
ｈｉｓｈ ｌｅｖｅｌ ａｎｔｉｍｉｅｍｂｉａｌ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ
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１Ｊ
Ｆｏｌｓｔｅｒ ＪＰ．Ｓｈａｒｅｒ ＷＭ．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｔｒＦ
ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｉｎ
ｅ嚣一
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酸一天门冬氨酸变异破坏了螺旋结构，使ｍｔｒＲ与
ｍｔｒＣＤＥ的结合降低，阻遏作用减弱，ｍｔｒＣ转录表达 增加，ｍｔｒ系统的外排功能增加。４０位氨基酸位于 第一ａ螺旋结构内，１０５位氨基酸位于ＨＴＨ超二级 结构外，两者氨基酸突变对ｍｔｒ系统具体影响机制
不清楚。有研究发现在对大环内酯类药物产生耐受
过程中，ｍｔｒＣＤＥ可以单独发挥作用介导淋球菌产生 耐药旧］。赖维等［１们通过体外人工诱导头孢曲松耐 药株，然后应用抑制性消减杂交及基因芯片技术分 析耐药机制，发现淋球菌对头孢曲松耐药与ｍｔｒＲ和 ｍｔｒＣ等有关，可能通过外排泵活性增强途径介导耐 药。国内多组研究表明，ｍｔｒＦ基因在介导淋球菌产 生高水平多重耐药过程中发挥着十分重要的作 用¨Ｉｔｌ２ Ｊ。一般认为，ｍｔｒＦ并不属于ｍｔｒＣＤＥ外排泵 的核心成分，ｍｔｒＦ自身不能介导淋球菌对脂溶性因 子（ＨＡＳ）耐受，并且ｍｔｒＦ也不能影响ｍｔｒＣＤＥ的表
淋球菌耐药研究进展
兰宝霞 （天津市宝坻区人民医院检验科， 关键调：
中图分类号：
天津
宝坻３粒
Ｒ９１Ｓ
文献标识码：
Ｂ
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６－６２３３．２０１０．０４．嘲
淋病是世界范围内发病人数较多的性传播疾病 （ＳＴＤ）之一，亦是我国目前流行的ＳＴＤ中发病率最 高的病种。它的病原体为淋病奈瑟菌（淋球菌）。 由于抗生素的广泛应用，淋球菌对抗生素的耐药株
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自身防控，进行机体调理及环境的改善。预防和消 除亚健康，形成一个有利于提高期刊竞争力的心理 健康促进体系。 参考文献： ［１］ 王育学．２ｌ世纪健康新概念一亚健康［Ｍ］． 南昌：江西科学出版社，２００６。６．