制药用水微生物检查方法的验证培训课件

制药用水微生物检查方法的验证
22
方法验证的必要性
- 为保证检验结果的可靠性，真实性，选择正确的检验方法 是至关重要的。因此试验前必须对选择的方法进行验证。
- 证明所采用的方法是适宜的，确认所采用的方法适宜于被 检供试品的微生物污染的检验。
制药用水微生物检查方法的验证
23
检验结果的影响因素
供试品的组分 环境影响
14
曲霉属（Aspergillus）
曲霉属的菌丝无色、淡色或表面凝聚有色物质，为有隔的多 细胞。本属的常见产毒霉菌有8个种，具有强烈的致癌性。
制药用水微生物检查方法的验证
曲霉 1．双层小梗分生孢子头 2. 单层小梗分生孢子头 3. 分生孢子梗基部足细胞 4. 双层小梗的细胞微结构
15
青霉属
菌丝无色或有色，为有隔的多细胞。分生孢子梗从菌丝垂直生出，无足细胞， 顶端不膨大，无顶囊，产生一轮至数轮分叉，在最后一级分枝的小梗上，长 出成串的分生孢子，形似扫帚状，称为帚状枝。本属的常见产毒霉菌有9个 种，其中展青霉可产生展青霉素，是一种神经毒素，并具有致畸、致突变和 致癌性；
制药用水微生物检查方法的验证
7
细菌的繁殖
细菌（bacterium）属于原核细胞型微生物，其特点是具 有细胞壁、原始的核质，以二分裂方式繁殖。 了解细菌的基本特性、细菌的鉴别，对新药的研发和防止药 品污染，保证药品质量具有重要的意义。
制药用水微生物检查方法的验证
8
细菌的形态
- 细菌体积微小，是无色半透明的，用肉眼直接观察难以看到 ，其结构和形状须经过显微镜放大数百倍至上千倍才能 观察。
制药用水微生物检查方法的验证
20
检查方法的验证
试验环境 无菌检查应在环境洁净度 10 000 级下的局部洁净度 100 级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全 过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污 染的措施不得影响供试品中微生物的检出。 检验依据 单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁 净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的 现行国家标准进行洁净度验证。
- 一般以微米（µm）作为测量单位。 - 在细菌学中，按其形态可分为球菌、杆菌、弧菌和螺杆菌。
经革兰染色法（Gram stain）可将细菌分成两大类： 革兰阳性菌（G+）和革兰阴性菌（G-）。
制药用水微生物检查方法的验证
9
细菌的形态
制药用水微生物检查方法的验证
10
细菌的形态
真菌（fungus；eumycete来自百度文库） 是具有真核和细胞壁的生物。种类很多，已报道的种超过10 万个。大多是由纤细管状菌丝构成的菌丝体。许多菌丝在一 起统称菌丝体。菌丝体在基质上生长的形态称为菌落。
制药用水微生物检查方法的验证
常见青霉分生孢子梗
16
霉菌菌落形态
制药用水微生物检查方法的验证
17
酵母菌显微镜下形态
制药用水微生物检查方法的验证
19
微生物检查法
微生物限度检查方法系检查非规定灭菌制剂及其原料、 辅料受微生物污染程度的方法。 检查项目包括 细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。 检查方法 多用平皿法、薄膜过滤法、涂抹法和 MPN 法， 国家药典规定应用经验证合格的方法。
制药用水微生物检查方法的验证
5
微生物的特点
适应强 易变异 多数细菌能耐0～－196℃的低温； 硫细菌可在250～300℃的高温条件下正常生长； 一些嗜盐细菌甚至能在饱和盐水中正常生活； 产芽孢细菌和真菌孢子在干燥条件下能保藏几十 年、几百年。
制药用水微生物检查方法的验证
6
微生物的类群和形态结构
微生物按其结构、化学组成及生活习性等分为三大类 ： 原核细胞型：细菌、放线菌、支原体、衣原体、立克次 氏体、螺旋体等 真核细胞型：真菌 非细胞型：病毒 噬菌体
制药用水微生物检查方法的验证
13
根霉属（RhizopusEhrenberg）
根霉属广泛应用于发酵工业，在潮湿的粮食及食品上能迅 速蔓延生长，引起粮食及食品的腐烂。
制药用水微生物检查方法的验证
根霉 A：1．营养菌丝 B：2. 匍匐菌丝 3. 假根 4. 孢囊柄 C ：孢囊放大图 1. 囊壁 2. 囊轴 3. 囊托
-2010版药典
制药用水微生物检查方法的验证
21
隔离系统的应用
应用隔离系统重要的目的 - 是保护产品免受外源性污染，包括操作人员、操作环境及
外包装等的污染，保证无菌实验结果的可靠性，实现一次 检出的要求。 - 是保护操作人员免受实验过程中的有害物质带来的污染。 隔离系统应按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度 须符合无菌检查的要求。 日常检验还需对试验环境进行监控。
制药用水微生物检查方法的验证
11
细菌的形态
真菌的形态具有多样性，大小不一，大的用肉眼可以看到 ，小的用普通光学显微镜放大数倍乃至千倍方可观察到。 其形态分单细胞、多细胞，单细胞呈圆形或卵圆形，如酵 母菌（yeast）。多细胞由菌丝和孢子组成，并交织成团 。
制药用水微生物检查方法的验证
12
药品污染常见的真菌
种类多 分布广
迄今为止，我们知道的微生物约有10万种，只占地球上 实际存在的微生物总数的20%。
制药用水微生物检查方法的验证
3
微生物的特点
各体小，表面积大 物体的表面积和体积之比称为表面积， 大肠埃希菌 的表面积是人的30万倍。
制药用水微生物检查方法的验证
4
微生物的特点
吸收多 转化快 如大肠埃希菌在合适条件下，每小时可以消耗相当于 自身重量2000倍的数量，而人体则需要40年之久。
制药用水微生物检查方法 的验证
微生物基础知识
微生物（microorganism, microbe）是一些 肉眼看 不见的微小生物的总称。 微生物（microorganism）包括细菌、支原体、螺旋 体、衣原体、立克次体、病毒及真菌霉菌、酵母菌和放 线菌）等。
制药用水微生物检查方法的验证
2
微生物的特点
抑菌剂、增溶剂、乳化剂及抗氧化剂，这 些 组分在一定浓度下对微生 物起一定的抑制作用也可对污染菌造成损伤。 不同类型的微生物及不同的存活状态对环境的 抗性是不同的。 如培养基的质量、检验人员的操作误差等。
毛霉属、根霉属、曲霉属、青霉属、木霉属 - 毛霉属（Mucor Micheli ex Fries） 毛霉属在自然界分布很广，常用于发酵工业。并引起水分 高的粮食及食品的霉烂变质。
毛霉属的分枝类型： 1.单生（不分枝） 2. 总状分枝 3.假轴状分枝 ⑵毛霉的孢子囊： 1. 孢子 2. 膜 3. 囊轴 4. 孢子囊柄