孕妇血清中红细胞血型抗体效价测定标准操作规程
母体IgG抗体效价检测卡操作规程
孕妇血清IgG抗体效价检测操作规程[样本要求]：血样标本最好采用EDTA抗凝（也可以用枸橼酸钠等抗凝），用血清代替血浆进行检测时，用前离心，2000g×10min，防止纤维蛋白干扰反应结果。
[样品准备]：试剂配制：用985ulPH7.4的PBS(或者生理盐水)溶解15ul二巯基乙醇（2-Me）,即为0.2M(2-Me)应用液,密封，避光，置2---6℃保存.红细胞标本的制备：用生理盐水配置红细胞悬液，红细胞最终浓度为1%左右.血清标本的制备：将被检者静脉血采入含兔脑粉或其它促凝剂的试管中,10分钟后离心取上清;或者将被检者静脉血采入无抗凝剂试管中,4℃放置12小时,或37℃放置2小时后离心,2000Rpm,10分钟,取上清.该上清不得有絮状物或沉淀；[配套试剂]：孕妇IgG抗体效价卡，标准A、B、O红细胞（取决于父亲血型），0.2M(2-Me)应用液[实验步骤]1、试剂卡室温平衡，离心一次，标记编号；2、配制中和血浆：先取待检者血浆200微升与生理盐水600微升做4倍稀释，然后取稀释后的标本和0.2M巯基乙醇(2-Me)应用液各200ul，混匀，37℃孵育30---60分钟，（充分破坏标本中IgM类抗体）既得到孕妇的中和血浆。
34、在所有孔中加入50ul健康人O型1%红细胞悬液(测定孕妇ABO血型系统以外IgG血型抗体)或所有孔中加入50ul健康人A型或B型1%红细胞悬液(测定孕妇ABO血型系统IgG血型抗体)，然后加入上述表格中稀释的中和血浆各50ul5、把加有血浆和红细胞的微柱卡置37 ℃专用孵育器孵育15分钟；6、用专用离心机离心5分钟（900r/min2分钟1500r/min3分钟）。
判定结果。
[结果判定]效价值：产生3+凝集的最高稀释度，其倒数即为效价。
[参考值]1、RH系统抗体效价16有临床意义2、ABO系统抗体效价64有临床意义[注意事项]1.据文献报道微柱凝胶法检测出的母体效价值比常规聚凝胺和抗人球蛋白试管法高出1-2个滴度（根据P.L.Mollison所著教材《临床医学中的输血（Blood Transfusion in Clinical Medicine）》）2. 红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应。
血型抗体效价测定标准操作规程(sop)
血型抗体效价测定标准操作规程一、目的为规范红细胞血型抗体效价测定的技术操作，保证结果的准确性从而为临床疾病的诊断和治疗做出正确的评估。
二、适用范围输血科负责红细胞血型抗体效价测定的技术人员。
三、原理：将受检血清（如检测IgG类红细胞血型抗体效价须先用巯基试剂裂解其中的IgM型抗体）经连续倍比稀释后与表达目标抗体对应的抗原红细胞试剂反应，以受检血清凝集试剂红细胞的最高稀释倍数的倒数作为受检血清中检测目标抗体的效价，同时根据“红细胞凝集强度与评分标准”评分。
四、步骤和方法（1）盐水介质法测定IgM类红细胞血型抗体效价1、排试管12支，编号，以第1支试管为原倍进行生理盐水倍比稀释受检血清，第12支试管为2048倍，稀释后容积定为100微升。
2、分别往12支试管加入3%目标抗体对应的抗原红细胞试剂50微升，轻摇混匀。
3、用专用离心机120g离心1min，观察有无溶血和凝集情况。
4、结果判断：镜检呈“1+”凝集的最高稀释倍数的倒数为目标抗体的效价，再根据“红细胞凝集强度与评分标准”评分。
（2）IgG类红细胞血型抗体效价测定1、取200微升受检血清加入0.2mol/L二巯基乙醇（2—Me）应用液200微升混匀，将试管口密封，37℃孵育30min。
2、排11支试管，编号，进行生理盐水倍比稀释2—Me处理过的血清。
由于第1支已经进行了稀释，所以第11支试管为2048倍，稀释后容积定为100微升。
3、凝聚胺法检测时，往11支试管加入3%目标抗体对应的抗原红细胞试剂50微升，轻摇混匀，按照凝聚胺法操作步骤进行试验。
4、抗球蛋白法测定时，往11支试管加入3%目标抗体对应的抗原红细胞试剂50微升，轻摇混匀后置37℃孵育30min后，按照抗球蛋白法操作步骤进行试验。
5、结果判断：镜检呈“1+”凝集的最高稀释倍数的倒数为目标抗体的效价，再根据“红细胞凝集强度与评分标准”评分。
（1）评分标准根据稀释血清各管凝集强度进行评分，凝集强度与评分标准为：4+为12分，3+为10分，2+为8分，1+为5分，+/-或W+为2分，阴性为0分，稀释各管评分之和为积分。
孕妇母体IgG抗体效价检测操作规程
孕妇母体IgG抗体效价检测操作规程【原理】新生儿溶血病HDN发生的主要原因在于母子血型不合，血型系统最主要的类型为ABO血型系统，本实验采用微柱凝胶检测孕妇血清中的抗A（B）IgG抗体效价。
【试剂】6%牛血清白蛋白；生理盐水；凝胶卡【标本采集】孕妇静脉血3毫升，肝素钠抗凝，孕妇爱人静脉血3毫升，肝素钠抗凝。
将孕妇标本制作成血清标本，孕妇爱人标本制成0.5%红细胞标本（用生理盐水洗涤后配制）。
本文来源于中华检验医学网【操作步骤】1．取孕妇血清标本50微升加入等体积的牛血清白蛋白，37度水浴温育30～60分钟；2．将血清倍比稀释成9管，依次为1：4、8、16、32、64、128、512、1024、2048管；3．将卡作好标记，在所有孔中加入经处理好的孕妇血清标本50ul；4．然后在所有孔中加入50ul的孕妇爱人0.5%红细胞标本；5．37度孵育15分钟（专用孵育箱）；6．专用离心机离心5分钟；900rpm2分钟，1500rpm3分钟；7．取出判定结果；【结果判定】阳性结果：红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中；阴性结果：红细胞完全沉降到胶底部，在凝胶管底部形成红细胞扣。
【结果报告】产生1+阳性凝集的最高稀释度，其倒数即为效价。
【注意事项】1．红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应，尽可能应用当日采集的新鲜血做本实验。
如不得不用过夜血或陈旧血，则必须首先用该标本做阴性对照试验，以确定该标本是否可以做本试验。
2．血清标本：血清标本必须充分去除纤维蛋白，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出，阻碍红细胞沉淀，呈假阳性反应。
3．如在微柱凝胶中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因所臻溶血，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员报告并讨论。
4．本凝胶卡价格不菲，成本较高，请您节约使用。
【临床意义】有人观察1632例孕妇血清中IgG抗A（B）≥1：64者249例；ABO-HDN发生率随IgG抗A（B）效价升高而上升；HDN与妊娠史的频率有关，随着年龄上升，孕妇个体IgG抗A（B）抗体效价也随之上升。
输血科红细胞血型抗体筛查标准操作规程
输血科红细胞血型抗体筛查标准操作规程红细胞血型抗体筛查标准操作程序红细胞血型抗体检查适用于下列情况：1．ABO血型鉴定发现受检者血清中有ABO血型以外的抗体时；2．供血者血清抗体筛检；3．输血前受血者血清抗体检查；4．输血后溶血性输血反应疑为由同种抗体引起时；5．孕妇血清的抗体检查；6．新生儿溶血病婴儿血液中抗体检查；7．直接抗人球蛋白试验阳性红细胞上抗体检查。
筛查方法一、盐水介质法：【方法原理】有些抗体能凝集盐水混悬的红细胞。
这些抗体通常是IgM类抗体，其中许多在22℃下反应最好。
在室温下有活性而在37℃无活性的抗体是没有什么临床意义的。
对患者或供血者的血样不需要用这种方法。
在37℃下也有活性的样本(如抗Kell，抗D)是有临床意义的，而这些抗体通常可用抗人球蛋白试验和酶技术来检查。
【试剂】1．试剂红细胞：由血型参比实验室或血液中心提供，或由各血库从供血者或工作人员中进行普查得到。
筛查红细胞以2个或3个人抗原互补的不同的红细胞为1套，单独分开分装，因为单一的筛查红细胞较混红细胞提供较高的敏感性。
因为许多抗体同双倍量抗原(纯合子)的红细胞反应比同单倍量抗原(杂合子)的红细胞反应要强得多，而不可能得到的都是纯合子红细胞，因此，筛查红细胞的抗原组成必须是互补，经提供尽可能多的必要的抗原。
筛查红细胞大多不包括低频率抗原，所以不可能检出低频率抗体。
这种抗体只有在抗体鉴定时被测到，或在交叉配血时被发现，或在新生儿出生后出现黄疽时被发现。
每一组筛查红细胞中至少有常见的抗原，而且是互补的。
如果某种抗体只能与一种特定抗原的纯合子细胞起反应，而筛查红细胞上这种特定抗原是杂合子，则该抗体可能被漏检。
合适的纯合子表现型的供血者是很少的，为了提供有重要抗原的纯合子细胞，需要使用来自3个供血者的红细胞。
2．血清标本：虽然血清和血浆中存在相同的红细胞抗体，但一般都采用血清进行抗体检查。
因为：①如果血浆中的凝血系统发生部分激活，就可产生纤维蛋白，干扰对凝集的解释；②只有通过激活补体的作用才能证实的抗体，不能在血浆中检出；③常用的抗凝剂是结合Ca2+来防止凝固，而Ca2+对于补体的激活是必不可少的。
血清抗体效价的检测方法
血清抗体效价的检测方法
血清抗体效价的检测方法主要包括免疫双向扩散法和酶联免疫吸附法（ELISA）。
免疫双向扩散法是一种简便的方法，其基本原理是抗原和抗体在同一凝胶内扩散，相遇后形成特异性的沉淀线。
具体操作步骤是将抗原与抗体分别加入同一凝胶板中两个相隔一定间距的小孔内，使两者进行相互扩散，当抗原抗体浓度之比相适宜时，彼此相遇形成一白色弧状沉淀线。
然而，该方法敏感性较低，易出现假阴性结果。
另一种常用的方法是酶联免疫吸附法（ELISA）。
该方法具有较高的灵敏度，将抗原置于反应板上，然后加入处理过的血清、组织液等检测样品液。
如果测试样本中有抗体，会与抗原结合。
然后加入酶标记的抗体，与样品中的抗体结合。
添加显色剂，显色后，通过吸光度测定抗体含量。
请注意，具体采用哪种检测方法可能需要根据具体情况进行选择，建议您咨询专业医师。
效价测定(精)
三、操作步骤
1、吸取受检者血清0.4ml，加2-Me应用 液0.4ml，混合，将试管口塞紧，置 37℃水浴中2h（充分破坏IgM类抗体）。 2、排列小试管（10mm×60mm）两排， 每排10支，第一排每管各加生理盐水 0.4ml。
3、第1排第1管加2-Me处理血清0.4ml， 混合，吸出0.6ml，移0.2ml至第2排第 1管内，其余0.4ml移入第1排第2管内， 混合。以此类推，作倍量稀释至第10 管， 每管内留有 1∶4, … 1:2048等 不同稀释度的血清各0.2ml。
• 也可使用二硫苏糖醇 （dithiothreitol,DTT）灭活IgM抗体， 以测定IgG抗体。DTT无恶臭味，反应快 速，但对强抗体灭活效果较差。
五、临床应用
• O型孕妇孕期内抗体水平的动态监测，预测 是否会发生ABO新生儿溶血病。
4、第1排每管各加5%A型红细胞悬液0.2ml， 第2排每管各加5%B型红细胞悬液0.2ml，置 37℃水浴温育1h。 5、结果观察：如在前几管内发现有红细胞 凝集者，是由于高效价IgG抗A(B)或IgA抗 A(B)所引起，称为“盐水效价”。
6、其余红细胞未见凝集的试管，再以生 理盐水洗涤3次，除去洗涤液，留取压实 红细胞。 7、每管各加生理盐水 2滴，混合。 8、每管各取1滴，分别移至另一排小试 管中，再各加抗人球蛋白血清1滴，混合。
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试验原理 试 剂 操作步骤 注意事项 临床应用
一、试验原理
失去与相应 红细胞凝集 的作用
IgM抗体 分子裂解 待检 血清
2-me (巯基 乙醇)
IgG抗体分 子不被灭活
保持血清学 特性(致敏相 应红细胞)
IgA抗体 分子部分 灭活
二、试剂
HDN产前血型血清学检验操作规程
HDN产前血型血清学检验操作规程 SXYJ-GZ-02181目的辅助临床诊断母婴血型不合而引发的新生儿溶血病的预测。
2适用范围既往患有新生儿溶血病病史、不明原因流产或死胎史的孕妇；夫妇ABO血型不相容的孕妇；Rh阴性并有过流产史、输血史的孕妇。
3职责检测者负责依据此程序进行HDN产前血型血清学检验操作。
4材料与设备抗-A、抗-B血清、反定型试剂红细胞、血型物质或二硫苏糖醇（DTT）；实验室常规应用的耗材备品准备充分、仪器设备运行状态正常5操作方法5.1ABO血型鉴定（方法参见SXYJ-GZ-0202）5.1.1ABO血型不合可致ABO溶血：例如，孕妇O型，丈夫A型/B型/AB型；5.1.2ABO系统以外溶血：孕妇可以是A、B、O、AB型，丈夫ABO血型可以是和孕妇同型，也可以不同型。
5.2RhD抗原鉴定（方法参见SXYJ-GZ-0205）。
5.3免疫性抗体检查5.3.1IgM抗A(B)破坏：夫妇ABO血型不合；5.3.1.1血型物质中和法：以孕妇为O型，丈夫为A型为例：取孕妇血清0.15ml或0.05ml加A型血型物质0.15ml，混匀→置室温15分钟→得到中和后血清、若孕妇为O 型，丈夫为AB型，可分别用A型、B型血型物质中和；5.3.1.2二硫苏糖醇法(DTT)：取0.1ml孕妇血清加0.7ml DTT做1:8稀释， 37℃水浴30分钟；5.3.2ABO以内免疫性抗体（IgG性质的抗A或/和抗B）检测：用中和或处理后血清2d加入相应的Ac或/和Bc（或用丈夫细胞）悬液1d，离心，检测是否中和彻底，若仍有凝集，可加大中和液的比例至中和后血清为理想血清。
5.3.3检出免疫性抗体者同时报效价，抗-A（B）抗体效价参考值为8-64。
ABO以外红细胞血型抗体的筛选和鉴定：方法参见SXYJ-GZ-0216。
5.3.4效价的检测：IgG抗A（B）用中和或处理后血清、ABO以外抗体用女血清分别加相应的红细胞悬液测定（方法参见SXYJ-GZ-0217）。
红细胞血型抗体效价测定标准操作规程
红细胞血型抗体效价测定标准操作规程本文介绍了红细胞血型抗体效价测定标准操作规程，以规范输血科医务科护理部的技术操作，并适用于评估母婴血型不合的新生儿溶血病的风险程度及产前检查等其他临床需要。
在材料和设备方面，需要3%～5%的A、B型反定型试剂红细胞、0.2 mol/L二巯基乙醇(2-Me)应用液、抗球蛋白试剂、待检者血标本、微柱凝胶抗球蛋白卡等。
在检测环境方面，室温应控制在18-27℃，湿度应控制在30%-70%。
在检测原理方面，对于IgM类红细胞血型抗体，将受检血清经连续倍比稀释后与表达检测目标抗体对应抗原的试剂红细胞反应，以受检血清凝集试剂红细胞的最高稀释倍数的倒数作为受检血清中检测目标抗体的效价，并根据“红细胞凝集强度与评分标准”评分，完成对IgM类红细胞抗体效价的测定。
对于IgG类红细胞血型抗体，则先用巯基试剂2-Me裂解其中的IgM型抗体，经巯基试剂2-Me处理后再测定IgG类红细胞血型抗体。
在操作步骤方面，盐水介质法测定IgM类红细胞血型抗体效价。
具体操作为将受检血清加入一系列稀释盐水中，分别加入A、B型反定型试剂红细胞，静置30分钟后观察凝集情况，以受检血清凝集试剂红细胞的最高稀释倍数的倒数作为受检血清中检测目标抗体的效价，并根据“红细胞凝集强度与评分标准”评分，完成对IgM类红细胞抗体效价的测定。
7.1.1.对12支试管进行排列编号，第2至第12管每管加入0.1ml生理盐水，第1管及第2管分别加入受检者血清0.1ml，混匀后吸出0.1ml移至第3管内，以此类推，连续倍比稀释至第12管（2048倍）。
7.1.2.在12支试管中，分别加入3%检测目标抗体对应抗原的试剂红细胞50μl，轻摇试管架。
7.1.3.使用血型血清学专用离心机进行离心，离心速度为120g，离心时间为1min，观察并记录有无溶血及凝集情况。
7.1.4.结果判读：镜检呈“1+”凝集的最高稀释倍数的倒数即为检查目标抗体的效价，根据“红细胞凝集强度与评分标准”进行评分。
孕妇血清中红细胞血型抗体效价测定标准操作规程
孕妇血清中红细胞血型抗体效价测定标准操作规程1、目的为规范输血科红细胞血型抗体效价测定的技术操作，确保检测结果准确，依据《输血实验室管理程序》4.1.9条款的要求制定本规程。
2、适用范围本文件适用于本院输血科测定IgG抗-A(B)抗体效价，用以评估胎母血型不合妊娠时发生胎儿及新生儿免疫溶血性疾病（HDN）的风险程度及其他临床需要。
3、职责：输血科技术人员负责本实验的技术操作。
4、原理将受检血清（如检测IgG类红细胞血型抗体，先用2-巯基乙醇处理）经连续倍稀释后与表达检测目标抗体对应抗原的试剂红细胞反应，以受检血清凝集试剂红细胞的最高稀释倍数的倒数作为受检血清中检测目标抗体的效价。
5、试剂：生理盐水，0.2mol/L的2-巯基乙醇（2-Me）应用液，博迅的微柱凝胶抗人球蛋白卡，0.8%的A和B型标准试剂红细胞。
6、仪器：XTL-4.7细胞洗涤离心机，博研微术凝胶卡专用孵育器及离心机，电热恒温水浴箱。
7、操作步骤与方法：7.1准备试剂：观察微柱凝胶卡的外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡放置室温（18－25℃）平衡，再用专用离心机离心5分钟。
吸取2-Me15μl,加生理盐水至1ml为0.2M 2-Me 应用液。
7.2血清/血浆标本的制备：取血清50ul和150ul的生理盐水作1：4的稀释后再加入0.2M 2-Me应用液200ul混匀，密封试管口，37℃水浴60分钟。
灭活母体血清中IgM时，必须将试管口密封，并经常摇晃试管，以保证灭活效果。
同时用单克隆抗A或抗B作为对照，用来确认2-Me是否有效灭活IgM抗体。
7.3取7只干净试管，做好标记；在第1管中加入处理后的血清200ul和200ul生理盐水，混匀（为1:16稀释）；第2-7管中依次加200ul的生理盐水和前一管中的血清/血浆200ul，做倍比稀释。
7.4将抗人球蛋白卡标记好，从第7管开始到第2管依次将倍比稀释后的相应50ul血清分别加入标记孔中。
血型抗体 效价测定
血型抗体效价测定目的了解血型抗体效价测定的操作方法。
原理将被检抗血清作倍比稀释后，加入一定量的抗原红细胞，观察凝集强度。
以抗体稀释后仍能与抗原红细胞出现1个（+）凝集的试管稀释倍数之倒数定为该抗体的效价。
器材小试管、刻度吸管、37°C水浴箱。
试剂1. 标准2%A型红细胞生理盐水悬液。
2．生理盐水。
标本被检者血清。
操作以抗A效价测定为例。
1．血清倍比稀释取10支小试管，每管加入生理盐水0.1ml。
在第1管中加入0.1ml 被检者血清，混匀后吸取0.1ml加入第2管，依此类推，至第10管，最后弃去0.1ml。
2．加入抗原红细胞于每管中加入2%A型红细胞生理盐水悬液0.1ml，混匀。
3．温育置15~20°C室温中温育15min。
4．离心和观察结果以1000r/min离心1min，以出现1个（+）凝集强度试管的血清稀释倍数的倒数定为该抗血清效价。
注意事项1．倍比稀释要准确，避免稀释不匀出现跳管现象。
2．离心后试管内上清液出现溶血，表明不仅有抗原抗体反应，而且有补体激活，具有重要临床意义。
血型抗体效价测定目的了解血型抗体效价测定的操作方法。
原理将被检抗血清作倍比稀释后，加入一定量的抗原红细胞，观察凝集强度。
以抗体稀释后仍能与抗原红细胞出现1个（+）凝集的试管稀释倍数之倒数定为该抗体的效价。
器材小试管、刻度吸管、37°C水浴箱。
试剂1. 标准2%A型红细胞生理盐水悬液。
2．生理盐水。
标本被检者血清。
操作以抗A效价测定为例。
1．血清倍比稀释取10支小试管，每管加入生理盐水0.1ml。
在第1管中加入0.1ml 被检者血清，混匀后吸取0.1ml加入第2管，依此类推，至第10管，最后弃去0.1ml。
2．加入抗原红细胞于每管中加入2%A型红细胞生理盐水悬液0.1ml，混匀。
3．温育置15~20°C室温中温育15min。
4．离心和观察结果以1000r/min离心1min，以出现1个（+）凝集强度试管的血清稀释倍数的倒数定为该抗血清效价。
抗体效价滴定操作规程
抗体效价滴定操作规程抗体效价是衡量抗体活性和浓度的重要指标，在医药研究和临床应用中有着广泛的应用。
抗体效价滴定操作规程是对进行抗体效价测定的步骤和方法进行规范和描述的文件，下面是一个关于抗体效价滴定操作规程的示例，包括前期准备、试验步骤和结果判定等内容。
一、前期准备1.阅读相关文献和实验说明书，了解抗体效价滴定的原理和方法。
2.了解实验所需物品清单，准备好所需的试剂、试管、移液器等实验器材。
3.检查实验设备，确认设备处于正常工作状态。
4.准备好质控抗体和待测抗体溶液，并按实验要求进行稀释。
二、试验步骤1.根据实验要求，将待测抗体和质控抗体分别加入试管中。
2.通过稀释系列将质控抗体稀释为一系列不同浓度的溶液。
3.充分混匀待测抗体和质控抗体溶液，保证溶液均匀。
4.将待测抗体和质控抗体溶液放置于室温，使其达到相同的温度。
5.取一组试管，依次加入相同体积的质控抗体溶液和待测抗体溶液，混匀后，在每个试管中加入适量的相同抗原。
6.将试管放置于恒温箱或洗涤器中，进行适当的培养时间，使抗原和抗体充分反应。
7.取出试管，加入适量的二抗或底物，并根据实验要求，进行适当的显色反应。
8.根据显色反应的颜色深浅和强度，判断抗体效价的高低。
9.计算抗体效价的对数，确定抗体效价。
三、结果判定1.根据检测结果，得出相应的抗体效价，记录在实验记录表中。
2.将实验结果进行统计和分析，确定最终的抗体效价。
3.根据实验结果，进行抗体效价滴定的质控和质量保证。
四、实验安全1.在操作过程中，注意安全操作，避免溶液的直接接触和飞溅。
2.使用刀片或针头等锐利物品时，要特别注意安全，防止划伤和刺伤。
3.遵守实验室的安全规定，佩戴实验室服装和防护设备，保证实验操作的安全性。
五、实验记录和数据处理1.记录实验过程中的各个步骤和操作细节，包括使用的抗体和试剂名称、溶液浓度和体积等。
2.记录显色反应的颜色深浅和强度，以及操作过程中的问题和异常情况。
3.对实验结果进行统计和分析，计算抗体效价的平均值和标准偏差，并进行结果的合理解释和讨论。
孕妇血清IgG抗A（B）抗体效价的检测与分析
孕妇血清IgG抗A（B）抗体效价的检测与分析【摘要】目的了解血型抗体效价异常在孕妇中所占比率及临床意义。
方法用抗人球蛋白法进行IgG抗A或抗B的ABO血型抗体效价检测。
结果523份血清中IgG抗体效价大于1∶64者有197例，异常检出率为37.67%。
不同孕次、不同年龄孕妇血清抗A和抗B抗体阳性率比较差异有高度显著性(P<0.01)。
结论在产前保健孕妇中进行ABO血型抗体效价检测，及早发现，及时治疗，可减少由于母婴血型不合引起的溶血病发生。
【关键词】幼红细胞增多症，胎儿；IgG抗体；血型目前，由于母婴ABO血型不合致使母体血液中的IgG抗A（B）效价增高而引起的新生儿溶血病（HDN）占整个新生儿溶血病比例的90%以上。
检测孕妇血清中IgG血型抗体水平是间接监测胎儿情况指标之一，是预防HDN的主要手段。
笔者对本院2006年2月以来检测的523例O型孕妇血清IgG抗A（B）抗体检测资料进行分析，报道如下。
1 资料和方法1.1 一般资料2006年2月～7月，在我科实验室检查的O型血孕妇523例，配偶均为非O 型血。
孕妇年龄20～38岁，孕20～35周，身体健康，无肝、肾、血液等方面疾病，无输血史。
主诉第一次妊娠者283例，2次及2次以上妊娠者240例。
其中，1次妊娠者按孕妇年龄分为A组20～29岁共197例，B组30～38岁86例。
1.2 试剂与方法采用深圳市伯劳特生物制品有限公司生产的IgG抗A（B）抗体快速检测试剂盒，其操作步骤严格按其配套使用说明书操作。
1.3 结果判断孕妇血清中抗A或抗B效价≥1∶64为阳性。
1.4 统计学方法计数资料采用χ2检验。
2 结果2.1 受检孕妇血清中IgG抗A（B）效价分布523例孕妇血清中IgG抗A（B）效价≥1∶64者197例，占37.67%，其中≥1∶128者54例，占10.33%，≥1∶256者15例，占2.87%。
两种方法检测孕妇产前血清中ABO血型IgG抗体效价的结果分析
平 均年 龄 ２ ． 。 经 产 妇 ２ ８ ９岁 ３例 ，初 产 妇 无 妊 娠 史 ２ ９例 ， 初 产 妇有 妊 娠 史 ４ ４例 。 １２ 材 料 ：本 实验 所 用 抗 人 球 蛋 白试剂 由上 海 血 液 生 物 医 ．
随机 抽 取 ２ １ ００年 ４月—８月期 间在 本 院产 前检 查 Ｏ 型 孕妇 ９ ６例 ，分 别 运 用微 柱 凝 胶 抗 人 球 蛋 白法 和 经 典 抗 人
球 蛋 白法检 测 其 血 清 中 Ｉ ｇ Ｇ抗 一 Ａ、抗 一 体 效 价 ，并 对 结 果进 行 比较 分 析 。 结 果 前 一种 方 法 比后 一 种 方 法判 读 结 果 Ｂ抗
目前 检测 孕 妇 产前 Ａ Ｏ血 型 ＩＧ抗 体 效 价 仍 然 是 预 防 Ｂ ｇ Ａ Ｏ血 型 系统 新 生 儿 溶 血 病 发 生 的 一 个 重 要 参 考 指 标 ，微 Ｂ
规程》 标准判读 结果 。微 柱凝胶 抗人球 蛋 白法按公 司提
供 的操 作 说 明 书 进 行结 果 判 读 。
・
４ ８・
广
州
医
药 ２ １ 年第 ４ 鲞箍 鱼 ００ Ｌ
・
医学 检 验 ・
两 种方 法检测 孕妇 产前 血 清 中 Ａ Ｏ血型 ＩＧ抗 体效 价 的结果 分 析 Ｂ ｇ
高 小华 胡永 红 陈 小 洁
广州 市第一人 民医院输血科 （ １ １０ ５０８ ）
【 摘
方法
要 】 目的 探讨运用微 柱凝胶技术检测孕妇产前血 清中 Ａ Ｏ血 型 ＩＧ抗体效价的可行性及 参考值设定。 Ｂ ｇ
抗一 Ｂ抗体效价的结果 ，探讨运用微柱凝胶技 术检测孕妇 产
产前血型抗体效价测定的方法评估
产前血型抗体效价测定的方法评估摘要】目的：评估产前血型效价测定方法在临床应用中的实用性，向临床提供准确和可靠的检验结果，指导妊期期治疗，降低新生儿溶血病的发生率。
方法：产前血型抗体效价测定过程中的质量控制及方法建立后，检测53例妊期期孕妇并对结果进行统计分析，结合临床资料进行方法实用性评估。
结果：53例受检孕妇有11例血型抗体效价≥1:64，阳性率为20.75%，对11例血型抗体效价≥1:64的受检者进行妊期治疗及追踪，有1例发生新生儿溶血（效价为≥1:512）发病率9.1%，且溶血症状不明显。
结论：实验过程关键点的质量控制前提下，临床反馈及检测结果分析，可以判断该方法适用于本院妊期期孕妇产前血型抗体效价的测定，指导临床产前诊断和妊期治疗。
【关键词】血型抗体效价；方法评估；新生儿溶血病【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）28-0148-02新生儿溶血病（hemolytic disease of the newborn，HDN）一般指母婴血型不合而引起的胎儿或新生儿免疫性溶血性疾病[1,2]。
发病机制起源于胎儿遗传了父亲的红细胞血型抗原，而母亲红细胞膜上正好缺失这种抗原，这些抗原刺激母体产生免疫抗体，主要是IgG抗体，这种抗体破坏胎儿的红细胞，因而发生溶血症状[3,4]。
对孕妇进行产前血型抗体效价测定，如血型抗体效价测定结果为阳性者可在妊娠期进行干预治疗，从而降低HDN发生，提高新生儿的生存率，本研究针对2012年1月～2012年7月来我院进行血型抗体效价测定的53例孕妇建立产前血型抗体效价测定的方法并对该方法进行评估，现就结果汇报如下：1.资料与方法1.1 一般资料本研究选取2012年1月～2012年7月来我院进行血型抗体效价测定的53例孕妇的临床资料进行分析，所有孕妇均为单胎，无高血压、糖尿病及其他心血管疾病；受试者知情同意。
试剂来源于长春博讯公司，所有试剂均在有效期内使用。
孕妇母体IgG抗体效价检测操作规程
孕妇母体IgG抗体效价检测操作规程
【原理】新生儿溶血病HDN发生的主要原因在于母子血型不合,血型系统最主要的类型为ABO血型系统本实验采用微柱凝胶检测孕妇血清中的抗A、BIgG抗体效价。
【试剂】 6%牛血清白蛋白生理盐水凝胶卡
【标本采集】孕妇静脉血3毫升、孕妇爱人静脉血3毫升EDTA-NA抗凝。
将孕妇标本制作成血清标本孕妇爱人标本制成0.5%红细胞标本用生理盐水洗涤后配制【操作步骤】
1.取孕妇血清标本50微升加入等体积的牛血清白蛋白，37度水浴温育60分钟
2.将血清倍比稀释成9管依次为1 4、8、16、32、64、128、512、1024、2048管
3.将卡作好标记在所有孔中加入经处理好的孕妇血清标本50ul
4. 然后在所有孔中加入50ul的孕妇爱人0.5%红细胞标本
5. 37度孵育15分钟专用孵育箱
6.专用离心机离心5分钟 900rpm2分钟 1500rpm3分钟
7. 取出判定结果
【结果判定】
阳性结果红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中
阴性结果红细胞完全沉降到胶底部在凝胶管底部形成红细胞扣。
【结果报告】产生1+阳性凝集的最高稀释度其倒数即为效价。
【注意事项】 1.红细胞标本一定不能被细菌污染否则出现假阳性反应尽可能应用当日采集的新鲜血做本实验。
如不得不用过夜血或陈旧血则必须首先用该标本做阴性对照试验以确定该标本是否可以做本试验。
2.血清标本血清标本必须充分去除纤维蛋白否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出阻碍红细胞沉淀呈假阳性反应。
3.如在微柱凝胶中出现溶血现象强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应也不排除其他原因所臻溶血故对此标本一定认真分析并向上级主管技术人员报告并讨论。
抗体效价滴定操作规程
抗体效价滴定操作规程 SXYJ-GZ-02171目的规范抗体效价滴定操作，确保红细胞血型抗体效价滴定的准确性。
2适用范围适用于全部血清（包括患者血清及试剂血清）效价的滴定。
3职责检测者负责依据此程序进行抗体效价滴定操作。
4材料与设备抗体筛选红细胞或谱细胞、IgG抗-D血清、3%RhD阳性红细胞盐水悬液、1%木瓜酶试剂、抗人球蛋白试剂、0.9%无菌生理盐水；一次性使用滴管、试管；KUBOTA KA-2200型离心机、S648型电热恒温水温箱（37℃）等。
5操作方法5.1待检标本的准备及要求5.1.1待检标本准备两管血样，一管用EDTA抗凝，另一管不抗凝血清：待检的不抗凝标本应退缩充分，用离心机离心并分离出血清；5.1.2细胞：从待检的抗凝标本中吸出一滴红细胞，用0.9%生理盐水充分洗涤三遍，配制成2%红细胞盐水悬液。
5.2血清连续倍量稀释法取10支小试管，标明序号，在每一管中加入0.1ml的生理盐水溶液，然后在第1管中加入待检血清（产前检查加入中和后血清）0.1ml，混匀后取出0.1ml依次向后稀释至第10管，从第10管中吸出0.1ml弃去，或暂时保留在另一试管中，以备必要时作进一步稀释；5.3加红细胞悬液每管加2%红细胞悬液0.1ml，混匀；5.4根据抗体性质的不同选用以下试验方法：5.4.1盐水法立即离心后观察，或置室温1小时观察结果；5.4.2间接抗人球蛋白法：方法参见SXYJ-GZ-0211；5.4.3木瓜酶法：方法参见SXYJ-GZ-0215。
6结果判定根据凝集强度(方法参见SXYJ-GZ-0202:5.2.1.6)对结果进行判断，通常以肉眼观察到的最后一个“1+”的凝集管作为判断的终点，终点血清稀释度的倒数为效价，或称滴度。
7注意事项7.1稀释液的容量越小，可能产生的误差越大，如果可能，可以增大稀释常量。
如果一种血清要分别和几种红细胞作用，要将血清做总稀释，然后分别移同样的实验容量到所需的几个试管中，这样会缩小误差。
血清效价测定实验报告
一、实验目的本实验旨在学习血清效价测定的原理和方法，掌握间接ELISA技术的操作步骤，并了解微柱凝胶法检测孕妇血清中IgG抗A（B）抗体效价的室内参考值。
二、实验原理1. 间接ELISA原理：利用间接ELISA技术测定血清效价。
将与抗体相应的抗原固定在载体上，制备固相抗原。
然后加入含有目标抗体的样本，抗体与抗原发生特异性结合。
接着加入酶标二抗，结合到抗原抗体复合物上。
最后加入底物，底物在酶催化下显色。
显色深浅与样本中抗体的含量呈正相关。
2. 微柱凝胶法：通过微柱凝胶法检测孕妇血清中IgG抗A（B）抗体效价。
将样本加入微柱凝胶中，若抗体与抗原结合，则在凝胶中形成可见的凝集现象。
通过观察凝集现象，判断抗体效价。
三、实验材料1. 间接ELISA实验材料：（1）抗原：牛血清白蛋白（BSA）浓度为5mg/ml。
（2）动物：经三次免疫后的BALB/c小鼠。
（3）其他试剂及器材：辣根过氧化物酶标记羊抗鼠lgG抗体、包被液、脱脂奶粉、洗涤液、底物显色液、终止液；手术剪、酒精棉、可拆卸酶标板、聚苯乙烯酶标板条、1.5ml离心管等。
（4）主要设备：离心机、冰箱、酶标仪、微量移液器、恒温箱。
2. 微柱凝胶法实验材料：（1）孕妇血清样本（2）微柱凝胶试剂（3）其他试剂及器材：加样器、离心机、显微镜等。
四、实验步骤1. 间接ELISA实验步骤：（1）包被抗原：将BSA（5mg/ml）稀释到终浓度为1ug/ml，100ul/孔，4℃孵育过夜，洗板3次，拍干。
（2）加入样本：加入含有目标抗体的样本，100ul/孔，37℃孵育1小时。
（3）洗涤：洗板3次，拍干。
（4）加入酶标二抗：加入辣根过氧化物酶标记羊抗鼠lgG抗体，100ul/孔，37℃孵育1小时。
（5）洗涤：洗板3次，拍干。
（6）加入底物：加入底物显色液，37℃孵育30分钟。
（7）终止反应：加入终止液，终止反应。
（8）酶标仪检测：在酶标仪上检测吸光度（OD）值。
2. 微柱凝胶法实验步骤：（1）加样：将孕妇血清样本加入微柱凝胶中。
抗体效价测定操作规程
抗体效价测定操作规程 Hessen was revised in January 2021抗体效价测定操作规程操作步骤：一．IgG类1.IgG类抗体效价滴定，须取适量血清200μL加等体积2—Me溶液混合，封口，置37℃水浴箱作用60分钟，先稀释血清：200L病人血清600L生理盐水备用，排列6支试管按顺序编号。
第二管开始到第六管加样枪各加生理盐水200L，在第一管和第二管中各加入稀释血清200L，第二管混匀后移出200L转至第三管，以同样操作第六管，从第六管吸出200L暂时保留在另一试管中（可做为第七管），以备必要时作进一步稀释。
这样从第一管到第六管的血清稀释度依次是1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256。
2.加红细胞悬液（自配红细胞悬液同反定型试剂）每管各加2％相应红细胞悬液200L，混匀。
（如待检血清抗体为抗A，则加入A型标准红细胞悬液；如待检血清抗体为抗B，则加入B型标准红细胞悬液；如待检血清中既有抗A又有抗B，则倍量稀释两份血清，一份加入A型标准红细胞悬液，另一份加入B型标准红细胞悬液；）3.先直接观察离心结果，之后在每管分别加入凝聚胺试剂盒中的R1液3d，混合30S均匀后，在各加R2液2滴，操作方法同凝聚胺交叉配血法，然后判读结果。
通常以肉眼观察到的第一个“±”的凝集管作为判断的终点，终点血清稀释度的倒数为效价（Titer），或称滴度。
二．IgM1.血清连续倍量稀释法先稀释血清：100L病人血清+700L生理盐水备用，排列6支试管按顺序编号。
第二管开始到第六管加样枪各加生理盐水200L，第一管和第二管中各加入稀释血清200L，第二管混匀后移出200L转至第三管，以同样操作第六管，从第六管吸出200L暂时保留在另一试管中（可做为第七管），以备必要时作进一步稀释。
这样从第一管到第六管的血清稀释度依次是1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256。
血清效价实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的本次实验旨在通过检测血清效价，了解受试者体内特定抗体水平，为临床诊断和治疗提供依据。
二、实验材料1. 样本：受试者血清样本2. 试剂：抗A、抗B、抗D等特异性抗原试剂3. 仪器：酶标仪、微量移液器、恒温培养箱等4. 试剂与仪器校准：严格按照说明书进行校准三、实验方法1. 抗原稀释：将抗A、抗B、抗D等特异性抗原试剂进行梯度稀释，制成一系列浓度梯度。
2. 样本处理：取受试者血清样本，按照实验要求进行倍比稀释。
3. 酶联免疫吸附实验（ELISA）：将抗原和样本混合，加入酶联抗体，进行孵育。
4. 洗涤：用洗涤液清洗反应板，去除未结合的酶联抗体。
5. 显色：加入底物，进行显色反应。
6. 测定：使用酶标仪测定各孔的吸光度（OD值）。
7. 数据处理：根据标准曲线计算血清效价。
四、实验结果1. 抗A效价：1:2562. 抗B效价：1:1283. 抗D效价：1:512五、实验讨论1. 本次实验结果显示，受试者抗A、抗B、抗D效价分别为1:256、1:128、1:512，均在正常范围内。
2. 抗A、抗B、抗D效价升高，可能与以下因素有关：（1）受试者曾接受过相应抗原的疫苗接种或感染。
（2）受试者处于某种疾病状态，导致免疫系统激活。
（3）受试者体内存在自身抗体，导致免疫反应。
3. 根据实验结果，可对受试者进行以下建议：（1）加强健康教育，提高受试者对相关疾病的认识。
（2）定期进行血清效价检测，监测抗体水平变化。
（3）针对抗体水平异常者，进行针对性治疗。
六、实验结论本次实验通过对受试者血清抗A、抗B、抗D效价的检测，为临床诊断和治疗提供了参考依据。
受试者抗体水平在正常范围内，无需特殊处理。
但需加强健康教育，定期监测抗体水平，以预防相关疾病的发生。
注：本实验报告仅为示例，具体实验结果及讨论需根据实际情况进行调整。
第2篇一、实验目的本次实验旨在通过检测血清中特定抗体的效价，评估机体对该抗体的免疫应答水平，为疾病的诊断、治疗及预后评估提供依据。
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孕妇血清中红细胞血型抗体效价测定标准操作规程
1、目的
为规范输血科红细胞血型抗体效价测定的技术操作，确保检测结果准确，依据《输血实验室管理程序》4.1.9条款的要求制定本规程。
2、适用范围
本文件适用于本院输血科测定IgG抗-A(B)抗体效价，用以评估胎母血型不合妊娠时发生胎儿及新生儿免疫溶血性疾病（HDN）的风险程度及其他临床需要。
3、职责：输血科技术人员负责本实验的技术操作。
4、原理
将受检血清（如检测IgG类红细胞血型抗体，先用2-巯基乙醇处理）经连续倍稀释后与表达检测目标抗体对应抗原的试剂红细胞反应，以受检血清凝集试剂红细胞的最高稀释倍数的倒数作为受检血清中检测目标抗体的效价。
5、试剂：生理盐水，0.2mol/L的2-巯基乙醇（2-Me）应用液，博迅的微柱凝胶抗人球蛋白卡，0.8%的A和B型标准试剂红细胞。
6、仪器：XTL-4.7细胞洗涤离心机，博研微术凝胶卡专用孵育器及离心机，电热恒温水浴箱。
7、操作步骤与方法：
7.1准备试剂：观察微柱凝胶卡的外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡放置室温（18－25℃）平衡，再用专用离心
机离心5分钟。
吸取2-Me15μl,加生理盐水至1ml为0.2M 2-Me 应用液。
7.2血清/血浆标本的制备：取血清50ul和150ul的生理盐水作1：4的稀释后再加入0.2M 2-Me应用液200ul混匀，密封试管口，37℃水浴60分钟。
灭活母体血清中IgM时，必须将试管口密封，并经常摇晃试管，以保证灭活效果。
同时用单克隆抗A或抗B作为对照，用来确认2-Me是否有效灭活IgM抗体。
7.3取7只干净试管，做好标记；在第1管中加入处理后的血清200ul和200ul生理盐水，混匀（为1:16稀释）；第2-7管中依次加200ul的生理盐水和前一管中的血清/血浆200ul，做倍比稀释。
7.4将抗人球蛋白卡标记好，从第7管开始到第2管依次将倍比稀释后的相应50ul血清分别加入标记孔中。
在所有孔中加入50ul与父亲同型的A型或B型0.8%红细胞悬液，测定孕妇血清中的抗A（B）IgG血型抗体。
7.5将加样后的试剂卡，置37℃孵育器中孵育15分钟后用专用离心机离心5分钟(900rpm 2分钟，1500rpm 3分钟), 取出，判定结果。
8、结果判定：
8.1产生1+凝集的最高稀释度，其倒数即为效价。
8.2 阳性结果：红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中。
8.3阴性结果：红细胞完全沉降到胶底部，在凝胶管底部形成红细胞扣。
9、注意事项：
9.1. 为保证灭活效果，避免母体效价值偏高，灭活前应将母体血清稀释至用父亲同型红细胞检测凝集强度为4+的最高稀释倍数。
9.2. 灭活后的母体血清用父亲同型红细胞检测（即反定型试验）无凝集，证明IgM灭活比较完全，如出现凝集，说明灭活不完全，需要重新灭活。
或者体内有IgG完全抗体，此种情况多见于O型血母亲。
9.3. 灭活时间不能超过60分钟，灭活时间过长或2-Me浓度过高可使血清蛋白变性呈胶冻状。
9.4. 为保证倍比稀释的准确度，从高浓度向低浓度倍比稀释时要求每次移液后更换新的吸头。
9.5. 父亲红细胞标本也可用与其同型的A型或B型红细胞代替。
9.6. 每日试验前，先取出微柱凝胶卡放置至室温。
9.7. 检测卡应放在18-25℃储存，如若长期放在4℃冰箱，建议每1-2个月取出，用专用离心机离心一次，以防止干胶或产生气泡。
10、相关文件。