植物呼吸速率的测定

三、实验步骤
1. 取500ml广口瓶一个， 瓶口用打有三孔的橡皮塞 塞紧，一孔插一盛碱石灰 的干燥管，使呼吸过程中 能进入无CO2的空气，一 孔插温度计，另一孔直径 约1cm，供滴定用，平时 用一小橡皮塞塞紧，瓶塞 下面挂一铁丝纱小篮，以 便装植物样品，整个装置 即为广口瓶呼吸测定装置。
三、实验步骤
三、实验步骤
2.反应瓶及压力计处理： ⑴在中央小槽内加入20％KOH 0.2ml，用以 吸收CO2。为了增大吸收CO2的能力，可将 1cm×2cm滤纸折叠后插入中央小槽内，并在
中央小槽口上涂少量凡士林，防止碱液逸出。 ⑵侧管的玻璃棒涂以凡士林后塞紧。压力计 口亦涂上凡士林和反应瓶连接，转动反应瓶， 使封口凡士林呈透明为止，然后用橡皮筋将
四、结果计算
样品的呼吸速率（mg CO2/g· h） ＝（V0－Vs）×1/(W×t) 式中， V0 ：空白滴定用去的草酸量 （ml）； Vs ：样品滴定用去的草酸量（ml）； W：样品鲜重（g）；t：测定时间（h）。1表 示滴定所用每毫升1／44mol/L 的草酸相当于 1mgCO2。
五、分析讨论
四、结果计算
（一）反应瓶常数（k， μl /mm）计算：
其中，Vg＝V总－Vf－V种子 (μl) V总：反应瓶（至连接的压力计右侧臂150mm处）的总体积 （可根据反应瓶出厂编号查知）； Vf ：反应瓶中液体体积（本实验中包括加入的KOH和水的 体积）； V种子：实验所用种子体积； T：实验体系的绝对温度； α：压力为1atm、温度为T时气体（本实验为O2）的溶解 度（可查表获知）； P0：以Brodie液表示的标准压力（约为10000mm）。
实验4-2 小篮子法（广口瓶法） 测定植物呼吸速率
一、原理 植物呼吸时会放出CO2，一定量的植 物样品在单位时间内放出CO2的数量， 即可作为该样品的呼吸速率。 植物呼吸过程中放出的CO2可用氢氧 化钡溶液吸收，呼吸过程结束后用已知 浓度的草酸溶液滴定剩余的碱液，从空 白和样品二者消耗草酸溶液之差即可计 算出呼吸过程中释放的CO2的量。
四、结果计算 （二）呼吸速率计算：
（样品耗氧的）呼吸速率（μl/g·h）＝ h ×K/ W×t。 其中， h×K为根据实际压力差值（h，mm）求出 的氧气的吸收量（μl）；W为鲜样品质量（g）；t 为反应时间（h）
五、分析讨论
主要注意事项：
1. 操作中切勿对种子造成物理或化学损伤； 2. 压力计为精密玻璃仪器，须防止损坏； 3. 压力计与反应瓶编号要配套一致； 4. 压力计及反应瓶必需保证气密性良好； 5. 压力计读数时应暂停振荡，且不可将活塞 打开，也不可将压力计从水槽上卸下。 思考题： 1.本实验中为什么要设计温压计？ 2.反应瓶常数k与哪些因素有关？本实验是如 何满足其条件的？
二、材料、设备仪器及试剂
（一）材料：发芽的小麦种子。 （二）仪器设备：1.呼吸测定装置；2.天平；3.钟表； 4.酸式及碱式滴定管；5.温度计 （三）试剂： 1） 0.05mol/L 左右的Ba(OH)2：Ba(OH)2 8.6g溶于 1000ml蒸馏水中； 2） 1／44 mol/L 草酸溶液：准确称取重结晶的 H2C2O4· 2H2O 2.8651g溶于蒸馏水中并定容至 1000ml（每ml相当于1mg CO2）； 3） 酚酞指示剂：1g酚酞溶于100ml 95％乙醇中， 贮于滴瓶中。
三、实验步骤
3. 倒出瓶中废液，用无CO2的蒸馏水（煮沸过的） 洗净后，重加上述Ba(OH)2溶液20ml。称取5g左右 的发芽小麦种子（称前须擦干种子表面水分），装 入小篮子中，挂于橡皮塞下，塞紧瓶塞并开始记录 时间，经过20～30min，其间轻轻摇动数次（以破坏 溶液表面的BaCO3薄膜，利于充分吸收CO2）。到预 订时间后，打开塞子，将装有植物材料的小篮子迅 速取出，向瓶内加入2滴酚酞指示剂，立即塞紧塞子， 摇匀后用草酸滴定，方法如前。记录滴定所用草酸 的量（Vs，ml）。
一、原理: 1. 在密闭、定温及固定体积的系统中， 当气体被吸收时，气体分子减少，压力降低。 相反，当产生气体时，压力上升。压力的变 化可以用微量检压计测出，并可据此计算气 体吸收或释放的数量。因此，微量检压计可 用以研究呼吸作用、光合作用及与O2、CO2 及其它气体交换相关的反应如某些酶的活性 等。
二、材料、仪器设备及试剂
（三）试剂：1. 20％KOH；2. 凡士林； 3. Brodie氏溶液：NaCl 23g，牛胆酸 钠5g，溶于500ml水中，另加少许染料 （酸性品红）使溶液染色，并加数滴Leabharlann Baidu 麝香草酚乙醇溶液作为防腐剂。
三、实验步骤
（一）种子吸氧量的测定（测压计用）
1.种子处理： ⑴取发芽小麦种子6-8粒，用吸水纸将种子 表面水分吸干，称其鲜重（W）。 ⑵用排水法测定其体积（V种子）：取10ml量 筒，内盛约5ml的水，将种子充分放入量筒 内，二次水分体积之差即为种子体积。 ⑶将种子取出，再次用吸水纸吸干附在种子 外表的水分，将种子放入反应瓶的底部，并 往反应瓶底部加入0.5ml水。
反应瓶固定在压力计上。
三、实验步骤
3.压力计及反应瓶与水槽间温度的平衡：将 压力计固定在水槽上，并打开压力计活塞。 设置恒温水槽温度，启动水槽搅拌装置并启 动转盘振荡，使压力计平衡10～15min。在 此过程中要注意检查反应瓶是否漏气。
三、实验步骤
4.测定与读数：当反应瓶内温度与水槽温度 平衡后，停止振荡，将压力计上的活塞关闭 并重新开始振荡，记录开始时间。每隔 15min记录压力计左侧毛细管Brodie液面高 度（ h ）。读数时暂停振荡，并将压力计 的右管液面调至150mm处，记录左管液面高 度，共计四次（共1h）。
一、原理: 2. 由于在呼吸过程中吸收氧气和产生二 氧化碳是同时进行的，所以从压力计上所观 察到的压力变化是氧的吸收量和二氧化碳释 放量的总结果。若在反应瓶中加入碱液（如 氢氧化钾），呼吸时所产生的二氧化碳被碱 吸收，则可由压力的变化计算出氧的吸收量。
二、材料、仪器设备 及试剂
（一）材料：萌发的小 麦种子。 （二）仪器设备：1. 瓦 布格呼吸计（微量呼吸 检压计）；2. 移液管； 3. 量筒；4. 小镊子；5. 橡皮筋；6.吸水纸
三、实验步骤
（二）空白实验与测压计压力值校正
由于压力计左管口与大气相通，实验时 室内气压或水槽温度微小变化对读数均有影 响，为此，必须进行校正。 校正方法：⑴反应瓶中除不加种子外， 其他处理、测定及读数与测压计完全相同 （即空白实验，作温压计用）；⑵由测压计 读数与温压计读数的差值求得测压计的实际 压力值（校正值）。
主要注意事项： 1. 操作过程中应防止实验人员口中呼出的气 体进入广口瓶； 2. 应避免对植物材料造成理化损伤； 3. 摇动广口瓶时应小心，防止小篮子掉入碱 液中。 思考题：在本实验中要准确测定呼吸速率，还 需要注意哪些方面的问题？
2. 向广口瓶内加入0.05mol/L 的Ba(OH)2 溶液20ml，立即塞紧橡皮塞（不带小 篮），充分摇动广口瓶2min，使瓶内 CO2全部被吸收，拔出小橡皮塞，加入 酚酞指示剂2滴后摇匀，把滴定管插入孔 中，用标准草酸溶液进行空白滴定，直 到红色刚刚消失为止。记录滴定所用草 酸的量（V0，ml）