药品与化妆品微生物检测练习题

D发酵乳糖不产酸产气，平板上有典型菌落
铜绿假单胞菌 检验操作流程
未检出2天，检出4天
铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）属于假
单胞菌属，为革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性，能产生 绿脓菌素。此外还能液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸 盐，在 42℃±1℃条件下能生长。
该菌对人有致病力，可使伤处化脓，引起败血症等。在自然 界中分布甚广，空气、水、土壤.
一群需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌，在 44.5℃培养24h—48h能发酵乳糖产酸并产气。 该菌主要来自人和温血动物粪便，可作为粪便污染指 标来评价化妆品的卫生质量, 推断药品与化妆品中有否 污染肠道致病菌的可能。
双倍胆盐乳糖
产酸：黄色 产气：气泡
EMB琼脂
镜检
配培 养基 和稀 释液
供试 液的 制备
A 胰酪大豆与硫乙醇酸盐
B 改良马丁与营养琼脂
C 胰酪大豆胨琼脂,沙式葡萄糖琼脂
D 甘露醇高盐琼脂
练习题8
2015版中国药典检查耐胆盐大肠菌MPN计数法，用到的培
养基是（
）
A 胰酪大豆葡萄糖琼脂
B 紫红胆盐葡萄糖琼脂
C 硫乙醇酸盐葡萄糖琼脂
D 麦康凯葡萄糖琼脂
《化妆品卫生规范》
1．眼部化妆品及口唇等黏膜用化妆品以及婴儿和 用化妆品菌落总数<500cfu／ml(g)。
药品与化妆品微生物限度检验
培养与观察
除另有规定外，取规定量供试品，按方法适用性试验确认的 方法进行供试液制备和菌数测定，每稀释级每种培养基至少 制备2个平皿。
培养和计数 除另有规定外，胰酪大豆胨琼脂培养基平板在 30～35℃培养3~5天，沙氏葡萄糖琼脂培养基平板在20～ 25℃培养5 ~7天， 观察菌落生长情况,点计平板上生长的所有 菌落数，必要时可适当延长培养时间至7 天进行菌落计数并 报告。菌落蔓延生长成片的平皿不宜计数。点计菌落数后， 计算各稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规则报告菌 数。
5
27 11 5
─
6
不可计 305Βιβλιοθήκη Baidu12
─
7
000
─
270 30500 ＜１×10
报告方式 CFU/mL或 CFU/g
16000 或 1.6×104 38000或3.8×104 27000 或 2.7×104 510000 或 5.1×105 270或 2.7×102 31000 或 3.1×104
练习题3
对于药物异常毒性检查，错误的说法是（ ） A 本试验的动物不可以重复使用 B 初试小鼠5只，体重18〜22g，静脉给药 c 5只小鼠在给药后48小时有死亡，需复试 D 复试，取体重19〜21g的小鼠 8 只
练习题4
内毒素的特定专用单位是：（
）
A EU
B BET
C ㇸ
D EU/ML
练习题5
有关鲎试剂灵敏度复核实验，错误的说法是（ ） A 确定鲎试剂标示灵敏度是否合格 B 检查鲎试剂实验操作的流程 C 检查BET用水是否合格 D 检查药液内毒素是否超标
练习题6
对于无菌检查的理解，正确的是(
)
A 无菌检查结果合格，代表这批药物都合格
B 薄膜过滤法可以减少药物抑菌的干扰
常规洁净工作台设置
目前大部分微生物实验室布局
日常维护： 设备的计量与保证； 超净台及时清洁与杀菌（操作前后半小时）； 检验后材料的及时处理； 环境卫生（沉降菌的检测每周）。
问题2
油性样品如何处理
稀释液生理盐水-极性溶剂、液体石蜡-非极性溶剂、 吐温80-非离子型表面活性剂，分子一端是亲水基团， 一端是亲油基团，常用作增溶剂和油/水乳化剂。决 定了加入的顺序。
结果判断
各品种项下规定的微生物限度标准解释如下：
101cfu： 可接受的最大菌数为20； 102cfu： 可接受的最大菌数为200； 103cfu： 可接受的最大菌数为2000：依此类推。
若供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的检查结果均符 合该品种项下的规定，判供试品符合规定；若其中任何一项 不符合该品种项下的规定，判供试品不符合规定。
练习题 1
有关热原与内毒素的关系，错误的是：（
）
A 内毒素的主要成分是脂多糖
B 热原包括了内毒素
C 内毒素可以引起热原反应
D 热原是一种内毒素
练习题2
家兔检查热原判断，结果合格不能超过3.5℃的是（
）
A 1只家兔
B 3只家兔
C 5只家兔
D 8只家兔
1141异常毒性检查法、
异常毒性有别于药物本身所具有的毒性特征，是指由生产过程中引 人或其他原因所致的毒性。
增
菌 44.5±0.5℃ 检查
培 养
24-48h
结果 判断
不产酸不产气
书写检验 记录单
最终结 果判断
★粪大肠菌群检查流程图
分离培养
产酸产气
36±1 ℃
18~24h
蛋白胨水
培养
特
44.5±0.5℃ 24±2h
征 菌
落 靛基质
液面玫瑰红色
紫黑色
大肠埃希菌检验程序
供试品→ 供试液
↓ 不少于100ml的 胆盐乳糖增菌液
计数报告
报告规则
例次
表1 菌落计数结果及报告方式
不同稀释度平均菌落数 两稀释度菌 菌落总数
10-1
10-2 10-3 数之比
CFU/mL或
CFU/g
1
1365 164 20
─
16400
2
2760 295 46
1.6
38000
3
2890 271 60
2.2
27100
4
不可计 4650 513
─
513000
金黄色葡萄球菌 检验操作流程
未检出2天，检出3天
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为革兰氏阳
性球菌，呈葡萄状排列，无芽胞，无荚膜，能分解甘露 醇，血浆凝固酶阳性。
该菌是葡萄球菌中对人类致病力最强的一种， 能引起人体局部化脓性病灶，严重时可导致 败血症。
SCDLP培养基或 7.5%NaCl肉汤
生化试验 硝酸盐还原试验 42℃生长试验 明胶液化试验
盐酸层呈粉紫色 氯仿层呈蓝绿色
绿脓菌素试验
明胶液化 试验
N2
硝酸盐还原产气试验 明胶液化 明胶培养基（高层）
结果报告
被检样品经增菌分离培养后，经证实为革兰氏阴性杆 菌，氧化酶及绿脓菌素试验皆为阳性者，即可报告被 检样品中检出铜绿假单胞菌；如绿脓菌素试验阴性而 液化明胶、硝酸盐还原产气和42℃生长试验三者皆为 阳性时，仍可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌。
配培 养基 和稀 释液
供试 品的 处理
耐盐分 血琼脂
增 菌 24±2h 培 36±1℃ 养
分
离 24~48h 纯 36±1℃ 化
镜检
特征菌落
无菌落或无特征菌落
书写检验 记录单
最终结 果判断
革兰染色、镜检→ 生化试验:血浆凝固酶试验
甘露醇发酵试验
金黄色葡萄球菌检查流程图
灰/黑色
Baird Parker’s平板 血浆凝固酶试验
4 若所有稀释度的平均菌落数均小于30个，则应按稀释度最低的平均菌落数乘 以稀释倍数报告之(见表1例5)。
5 若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300个之间，其中一个稀释度大于300 个，而相邻的另一稀释度小于30个时，则以接近30或300的平均菌落数乘以稀 释倍数报告之(见表1中例6)。
6 若所有的稀释度均无菌生长，报告数为每g或每mL小于10CFU
C 培养基的氧化层不会影响实验结果
D 无菌检查的观察时间是7天
2015版药典微生物检查法内容——计数法
修订前 细菌数——营养琼脂 霉菌及酵母菌数——玫瑰红钠琼脂 修订后 需氧菌总数——胰酪大豆胨琼脂（TSA） 霉菌及酵母菌总数——沙式葡萄糖琼脂（TSB）
练习题7
2015版中国药典微生物计数（细菌，酵母与霉菌）用的培养 基是（ ）
↓35~37℃ 18~24h
取 0.2ml ↓
5mlMUG培养基中 ↓35~37℃ 5、24h
366nm紫外光下观察
↓ 加靛基质试剂
┌────────────┐
MUG阳性，靛基质 阳性
MUG阴性，靛基质 阳性
MUG阴性，靛基质 阴性
MUG阳性，靛基质 阴性
↓
↓取胆盐乳糖培养液划线
报告
曙红亚甲蓝琼脂平板或麦康凯琼脂平板
SCDLP培养基
配培 养基 和稀 释液
供试 液的 制备
十六烷三甲基 溴化铵琼脂
增
菌 18~24h 培 36±1℃ 养
分 离 18~24h 纯 36±1℃ 化
无菌落或无特征菌落
灰白色、扁 平、周围有 水溶性蓝绿 色素
特征菌落
镜检
书写检验 记录单
最终结 果判断
★铜绿假单胞菌检查流程图
革兰染色、镜检→ 氧化酶试验 绿脓菌素试验
TTC亦不可多加会抑制菌落生长
为便于区别化妆品中的颗粒与菌落，可在每 100mL 卵磷脂 吐温 80 营养琼脂中加入 1mL 0.5％的 TTC 溶液，如有细菌 存在，培养后菌落呈红色，而化妆品的颗粒颜色无变化。
计数原则
1 首先选取平均菌落数在30～300个之间的平皿，作为菌落总数测定的范围。当 只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即以该平皿菌落数乘其稀释倍数 (见表1中例1)。
儿童
2．其他化妆品菌落总数<1 000cfu／ml(g)。
3．化妆品中霉菌和酵母菌总数<100ccfu／ml(g)。
4．每克或每毫升产品中不得检出
粪大肠菌群、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌。
练习题9
化妆品3项控制微生物检验是：（
）
A 大肠菌群、铜绿假单胞菌，金黄色葡萄球菌 B 埃希菌、沙门菌、梭菌
↓36±1℃ 18~24h ┌────────────┐ 阳性
阴性
↓
↓
镜检、适宜的生化试验
报告
↓
结果报告
则可报 告被检样品中检出耐热大肠菌群
练习题
药品与化妆品怎样确认检出了大肠艾希菌（
）
A发酵乳糖产酸不产气，平板上有典型菌落
B革兰氏阴性短杆菌，靛基质试验阳性
C革兰氏阳性短杆菌，靛基质试验阳性
血浆凝块
甘露醇高盐琼脂
液态血浆
结果报告
凡在上述选择平板上有可疑菌落生长，经染色镜检， 证明为革兰氏阳性葡萄球菌，并能发酵甘露醇产酸， 血浆凝固酶试验阳性者，可报告被检样品检出金黄色 葡萄球菌。
霉菌和酵母菌 检验操作流程
霉菌和酵母菌数测定（Determination of molds and yeast count）化妆品检样在一定条件下培养后，1g或 1mL化妆品中所污染的活的霉菌和酵母菌数量，以判 明化妆品被霉菌和酵母菌污染程度及其一般卫生状况。
本方法根据霉菌和酵母菌特有的形态和培养特性，在 虎红培养基上，置28℃±2℃培养5d，计算所生长的霉 菌和酵母菌数。（5-50）
革兰氏染色操作流程
保证检验结果正确
设备： 恒温培养设备 高压灭菌器（验证） 超净工作台（生物安全柜） 均质器(旋涡混合器) 天平（0.1g） 显微镜（可要可不要无硬性要求）
2 若有两个稀释度，其平均菌落数均在30～300个之间，则应求出两菌落总数之 比值来决定，若其比值小于或等于2，应报告其平均数，若大于2则报告其中稀 释度较低的平皿的菌落数(见表1中例2及例3)。
3 若所有稀释度的平均菌落数均大于300个，则应按稀释度最高的平均菌落数乘 以稀释倍数报告之(见表1中例4)。
结果判断
若紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基平板上有菌落生长，则对
应培养管为阳性，否则为阴性。根据各培养管检查结果，从表2 查对1g 或 1ml 供试品中含有耐胆盐革兰阴性菌的最大可能数。
大肠艾希菌检验操作流程
未检出2天，检出3-4天
耐热大肠菌群 Thermotolerant coliform bacteria系
＜10
耐胆盐革兰阴性菌【2015版新增】
平皿法 薄膜过滤法 最可能数法（Most-Probable-Number Method，简称MPN 法）。
MPN 法用于微生物计数时精确度较差，但对于某些微生物污染量很小的供试品， MPN 法可能是更适合的方法。
定量试验 选择和分离培养 取相当于0.1g、0.01g 和0.001g（或0.1mL、0.01mL 和 0.001mL）供试品的预培养物或其稀释液分别接种至肠道菌增菌液体培养基 中，30～35℃培养24～48 小时。上述每一培养物分别划线接种于紫红胆盐 葡萄糖琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～24 小时。
试验用动物应健康合格，在试验前及试验的观察期内，均应按正常 饲养条件饲养。做过本试验的动物不得重复使用。
非生物制品试验
除另有规定外，取小鼠5 只，体重18〜22g，每只小鼠分别静脉给予 供试品溶液0.5ml。应在4〜5 秒内匀速注射完毕。规定缓慢注射的 品种可延长至3 0秒。除另有规定外，全部小鼠在给药后48小时内不 得有死亡；如有死亡时，应另取体重19〜21g的小鼠1 0只复试，全部 小鼠在4 8小时内不得有死亡。