实验四总氮量的测定——凯氏定氮法

蒸馏、吸收
❖取2～3个50ml的维形瓶，加入5ml左右2%硼酸-指示剂混 合液，用表面皿覆盖备用。准确吸取10mL样品处理液由小 漏斗流入反应室，并以10mL水洗涤小烧杯使之流入反应室 内，塞紧玻璃塞。从安全漏斗中慢慢加入10mL400g/L氢 氧化钠，溶液应呈蓝褐色。不要摇动，将定氮球连接好。 用直火加热蒸馏30min，将蒸馏装置出口离开液面继续蒸 馏1min，用蒸馏水淋洗尖端后停止蒸馏。
❖ 最好将三氯乙酸沉淀的蛋白质部分再去消化，消化后测含氮 量，这个含氮量应相等于由总氮及非蛋白氮计算的蛋白氮量。
但操作麻烦一些。
再见
注意：
❖ 蒸馏时实验室中切忌有碱性雾气（如氨），否则将严重地影 响实验结果的准确度。
❖ 若反应室内液体太多，超过1/2，又不易排出时，只能拆开 仪器倒出贮液。但是一般尽量避免发生此种情况。折卸时应 特别小心，防止损坏仪器。拆卸仪器应首先放松用来固定冷 凝管的万能夹，然后小心地将冷凝管向下错开，待反应室外 壳与冷凝管分开后，再移动反应室。
❖ “空白”滴定值包括水及氢氧化钠溶液中含有的微量的氨。 因些，水质对“空白”滴定值的影响甚大。“消化样品”最 后用“消化空白”进行校正计算，“不消化的样品”最后用 “不消化的空白”进行校正计算。而且，在实验中，稀释样 品的水与“空白”的水应当取自于同一瓶中。
❖ 蛋白质是一类复杂的含氮化合物，其中每一种蛋白质都有恒 定的含氮量，一般大约为14-18%，平均为16%。由凯氏定 氮法测出含氮量，再乘以系数6.25（即每含氮1g，就表示该 物质含蛋白质6.25g）即为蛋白质量。
❖ ③硫酸钾
❖ ④氢氧化钠溶液：400g/L ❖ ⑤硼酸吸收液：40g/L，称取20g硼酸溶解于
500mL热水中，摇匀备用。 ❖ ⑥ HCl标准溶液：0.1000mol/L。 ❖ ⑦甲基红-溴甲酚绿混合指示剂：5份2g/L溴甲酚绿
95%乙醇溶液与1份2g/L甲基红乙醇溶液混合均匀 。
主要仪器：
➢如图，凯氏定氮蒸馏装置。 ➢50mL消化管 ➢50mL容量瓶 ➢分析天平 ➢电炉 ➢小玻璃珠 ➢3mL微量滴定管 ➢烘箱 ➢1000mL蒸馏烧瓶 ➢远红外消煮炉
❖ 若样品中除有蛋白质外，尚有其他含氮物质，则样品蛋白质 含量的测定要复杂一些。首先，需向样品中加氯乙酸，使其 最终浓度为5%，然后测验定未加三氯乙酸的样品及加入三 氯乙酸后样品的上清液中的含量氮量，得出非蛋白氮量及总 氮量，从而计算出蛋白氮，再进一步折算出蛋白质含量。
蛋白氮=总氮-非蛋白氮 蛋白质含量（克/%）=蛋白氮×6.25
❖ 小心摇匀后，按图安装消化装置，置于电炉上，在通风橱内 加热消化。
❖ 消化时先以小火缓慢加热，待内容物完全炭化、泡沫消失后， 加大火力保持瓶内液体微沸，消化至溶液呈蓝绿色透明后， 再继续加热微沸0.5h，取下冷却，小心加入20mL水，移入 100mL容量瓶中，用少量水洗定氮瓶，并入容量瓶中，再加 水至刻度，混匀备用。同时做试剂空白试验。
❖待样品和空白消化液均蒸馏完毕后，同时进行滴定。
滴定
❖ 全部蒸馏完毕后，用0.0100N标准盐酸溶液滴定各 锥形瓶中收集的氨量，直至硼酸-指示剂混合液由绿 色变回淡紫色，即为滴定终点。
结果Biblioteka Baidu算
（ ） 样品的 克 /% 总 氮 A B 氮 0 .01 含 1 0 1 4% 0 0 量 C 10000
实验流程
样品消化 蒸馏吸收 滴定
实验流程
样品消化
❖ 准确称取0.1g左右的干燥面粉作为本实验的样品。
❖ 准备4个50ml的凯氏烧瓶，并标号，向第1、2号烧瓶内各加 入样品0.1g，催化剂（K2SO4-CuSO4·5H2O）200mg，消 化液5mL。注意加样品时应直接送入烧瓶底部，切勿沾于瓶 口及瓶颈上。向3、4号烧瓶加入0.1ml蒸馏水和与1及2号瓶 相同的催化剂和浓硫酸，作为空白对照，测量试剂中可能含 有的微量含氮物质，以对样品进行校正。
❖ 测定时常用硼酸溶液收集氨，氨与溶液中的 氢离子结全，生成铵离子，使溶液中氢离子 浓离降低。然后再用强酸滴定，直至恢复溶 液中原来氢离子浓度为止。所用的强酸的当 量数即相当于被测样品中氨的当量数。
❖ 本法适用的范围为0.2-1.0mg氮。相对误差应 小于±2%。
试剂
❖ ①浓硫酸
❖ ②硫酸铜
若测定的样品含氮部分是蛋白质，则有
样品克 的 /% 氮 总 A B 氮 0 .01 含 4 0 1% 0 0 量 0
C 10000
式中：A为滴定样品用去盐酸平均毫升数：B为滴定空白用去 盐酸平均毫升数；C为称量样品的克数；0.0100为盐酸的当量 浓度（实际上，此项应按实验中使用盐酸的实际浓度填写） ；14为氮的原子量；6.25为系数（1ml0.01N盐酸相当于 0.14mg氮）。