可溶性淀粉溶液

优点：酶既能与反应物接触，又能与产物分离，同 时，固定在载体上的酶还可以被反复利用
缺点：一种酶只能催化一种化学反应，而在生产实 践中，很多产物的形成都通过一系列的酶促 反应才能得到的
固定化的方法：
包括吸附法、共价偶联法、交联法、包埋法等 1、吸附法： 将酶吸附在载体表面上 常见载体：有机硅胶、活性炭、 石英砂、多孔玻璃等 酶蛋白的一些基团在温 2、共价偶联法：
课后练习
1.如何证明洗涤固定化酶柱的流出液中没有淀粉酶?
可在试管中加入1ml可溶性淀粉，再加几滴淀粉酶柱 流出液，保温几分钟后用碘液检验。如仍显蓝色，则 流出液中没有淀粉酶了。 2.耐高温的淀粉酶有哪些可能的用途? 可以在高温下使淀粉水解快，而且酶不会因高温上 而失活，所以可在一些需要高温加热同时又要水解 淀粉的反应中使用。
实验原理：
用吸附法将枯草杆菌的a-淀粉酶固定在石英砂上。一定 浓度的淀粉溶液经过固定化酶柱后，可使淀粉水解成糊 精。用淀粉指示剂溶液KI-I2测试，流出物呈红色，表明 水解产物糊精生成。
淀粉 遇碘显 蓝色
a-淀粉酶
糊精 遇碘显 红色
β-淀粉酶
糖化淀粉酶
麦芽糖 遇碘不 显色
葡萄糖
Baidu Nhomakorabea
这里使用的是枯草杆菌的a-淀粉酶，其作用的最适温度为
50~75℃；最适PH为5.5~7.5
实验材料制备
a-淀粉酶的固定化
在烧杯中将5mg a-淀粉酶溶于4ml蒸馏水中。再加入 5g 石英砂，不时搅拌，30分钟后装入层析柱中。 用10倍体积的蒸馏水洗涤此层析柱以除去未吸附的游离 淀粉酶，流速控制为1ml/min。
可溶性淀粉溶液 取50mg可溶性淀粉溶于100ml热水中，搅拌均匀。 5mmol/L KI-I2溶液 称取0.127g碘和0.83g碘化钾。加蒸馏水100ml。
一快一慢一注意
快：洗涤未固定的酶 慢：淀粉溶液经过固定酶的过程。0.3mL/min的流 速，这样做的目的是控制流速让淀粉和淀粉酶充 分接触反应。 注意：洗涤后的蒸馏水放尽后才可加入淀粉溶液
显色。在流出5mL后接取0.5mL过滤液，然后向试 管中加入1-2滴KI-I2 溶液。切记，KI-I2 溶液不 要加入太多，以免碘液颜色覆盖糊精淀粉反应后 的颜色。
实验步骤
1.将灌注了固定化酶的注射器放在注射器架上，用滴管滴加 淀粉溶液，使淀粉溶液已0.3mL/min的流速过柱。在流出5mL 后接收0.5mL流出液，加入1-2滴KI-I2 溶液，观察颜色。用 水稀释1倍后再观察颜色。 实验预期结果：水解产物糊精遇碘呈红色
2.试验后，用10倍体积的蒸馏水洗涤此层析柱，放置在4℃ 冰箱里，几天后再重复上述实验，看是否有相同结果。
和条件下能与载体共价 结合，从而被固定化
3、交联法： 将酶相互连接起来 将酶包埋在凝胶交联 4、包埋法： 后的“格子”中
固定化酶的反应柱示意图
底物
将固定化酶装 柱，当底物经 过该柱时，在 酶的作用下转 变为产物。 反应柱
固定化酶
分布着小 孔的筛板 产物
实验目的： 1、制备固定化a-淀粉酶
2、进行淀粉水解的测定
实验6 α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测
实际问题： ①酶在水溶液中很不稳定
②溶液中的酶很难回收，不能被再次利用， 提高了生产成本，且不利于工业化使用。 ③反应后酶会混在产物中，可能影响产品质量
将水溶性的酶用物理或化学的方法固定在不溶 于水的载体（即介质）上，使之不溶于水而又 有酶的活性的制剂。使用时将固定在载体上的 酶与反应物接触，催化反应后与产物分离，这 样酶可以被反复利用，被称为固定化酶。