组胺含量的测定5
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实验五组胺含量的测定
一、实验目的：学习比色法测定组胺含量的原理和方法
二、实验原理：鱼肉中的组胺用正戊醇提取，与偶氮试剂反应显橙色，与标准系列比较定量，
即可求出组胺含量
三、实验原料：鱼肉
四、实验试剂与仪器：
Na2CO3、NaOH、对硝基苯胺、正戊醇、三氯乙酸、盐酸、组胺标准品、具塞锥形瓶、
分液漏斗、721分光光度计等
五、实验方法：
1、组胺标准曲线的制定：称取25mg于105℃干燥至恒重的磷酸组胺定容至100ml 得到250ug/ml，再稀释配制成100ug/ml的组胺标准液，取上述标准使用液0、0.4、0.8、1.
2、1.6、2.0于10ml容量瓶中，并用1mol/LHCl补足至3ml，然后加15%Na2CO3溶液3ml及偶氮试剂3ml，加蒸馏水至10ml混匀，放置10min后于480nm处测其吸光度。作出标准曲线。
2、样品中组胺的提取：取10.0g左右切碎的鱼肉于具塞锥形瓶中，加入20ml 0.1g/ml三氯乙酸浸泡2—3h过滤小烧杯中，用NaOH跳PH为9—10，取1ml滤液于分液漏斗中，再加入3.0ml正戊醇振摇5min，吸取上层液，重复操作3次，合并上层液于10ml容量瓶，用正戊醇定容至10ml，取1.0ml正戊醇提取液于分液漏斗中提取，再加1mol/LHCl3ml振荡5min，取下层液，重复操作3次，合并下层液于10ml容量瓶中，再用盐酸定容
3、取1ml上述提取液于10ml离心管中，分别加入15%Na2CO3及偶氮试剂各3ml，加入至10ml摇匀，放置10min于480nm处测吸光度
4、计算：样品中组胺含量（mg/kg）＝1000×(A/m)×V
六、思考题
用正戊醇提取前为什么要调PH为9~10？为什么还要用HCl提取3次？