实验四_血凝及血凝抑制实验4.28

3.在1-12孔内均加入“四价”血凝素25ul， 震荡后，室温静止作用5min。 4.在1-12 孔内均加入1%的鸡红细胞悬液 25ul，震荡，室温感作15-30min，每5min 观察一次结果。
5.观测结果，记录实验数据．

血凝抑制试验结果判定

测定孔



RBC沉于孔底中心，呈纽扣状。(+) 凝集 （-） 病毒对照孔：凝集 RBC对照孔：无自凝 血凝抑制试验效价：呈完全血凝抑制的最高血清 稀释度。
2
25 25 25 25
+++ +
2 3
4
25 25 25 25
+++ +
4
16
25 25 25 25
++++
5
32
25 25 25 25
++++
6
64
25 25 25 25
+++
7
128
25 25 25 25
++
8
256
25 25 25 25
+
9
、、
10
、、
11(+) 12（-)
8
25 25 25 25
实验步骤
1.取96孔V型反应板1块置于水平实验台上，在第1排 1-10孔内加入25ul生理盐水，第11孔不加。第12孔加 25ul生理盐水 2.在第1孔内加入血凝素25ul，混匀后吸出25ul加入 第2孔内，再混匀后吸出25ul加入第3孔内，依次类推 至第10孔时弃掉25ul。第12孔不加作阴性对照孔。
血凝试验结果判定


效价判定： 凝集特别显著：“＋＋＋＋” 凝集现象次之：“＋＋＋” 凝集清楚可见：“＋＋” 稍显凝集者：“＋” 血凝效价：呈“＋＋”凝集时的最高稀释度。 此时的稀释度即为1个血凝单位。
结果判定
1.在各组对照均正确的情况下，按下列标准判定
血凝反应强度示意图 “4＋” 红细胞呈片状凝集，均匀布满孔底，边缘有时不整齐或皱 缩。 “3＋” 红细胞呈片状凝集，但面积略小于“4+”。 “2＋” 红细胞呈片状凝集，但有少许沉积孔底中部呈小圆点状。 “＋” 红细胞大部分沉于孔底中央，周围有少量散在凝集颗粒。 “－” 红细胞均沉于孔底呈小圆点状，边缘整齐。 2.对照孔正常的情况下，红细胞凝集100%的稀释度为判定血凝价的 终点。凡能使鸡红细胞完全凝集的病毒最高稀释倍数为病毒的凝集
血凝抑制
1.取96孔V型反应板1块置于水平实验台上，在 第1排1-10孔内加入25ul生理盐水，第11孔不加。 第12孔加25ul生理盐水。 2.在第1孔内加入被检血清25ul，混匀后吸出 25ul加入第2孔内，再混匀后吸出25ul加入第3 孔内，依次类推至第10孔时弃掉25ul。第12孔 不加作阴性对照孔。

血凝素（HA） 柱状

血凝素（hemagglutinin HA）： （HA，从H1—H15),呈柱状由病 毒基因编码的糖蛋白刺突。 功能： ①吸附细胞：与细胞上受体结 合,使病毒侵入细胞 ②凝集多种动物的红细胞（血 凝试验）： HA能与人或其它 动物多种红细胞表面N－乙酰 神经氨酸酶受体结合引起红 细胞凝集 ③具抗原性：其抗体能中和病 毒 --- 中 和 抗 体 ： 抑 制 血 凝 （血凝抑制试验）
思考问题



1.计算出病毒的凝集价、血凝抑制价 2.血凝试验中为什么要加补充液？ 3.为什么加病毒液和红细胞悬液时要反向加？ 4.病毒凝集红细胞是不是一种特异的抗原体反应? 血凝抑制实验是不是特异的抗原抗体反应? 为什么?
孔号
稀释度
生理盐 血凝素
生理盐 水 1%鸡红 细胞 结果预 测
1
流感病毒结构模式图
血凝原理
血凝抑制原理
血凝抑制试验原理
病毒引起的血凝现象能被相应的抗血凝素抗体所 抑制，即抗体与病毒结合后，血凝素无法吸附于 红细胞表面的受体上，用免疫血清阻止红细胞凝 集的现象，称为血凝抑制．
实验材料
器材：U型或V型微量反应板、微量移液器、枪头
试剂：1%鸡红细胞、NDIV血凝素、NDIV抗血清、 生理盐水
-
25
25 25 25
-
25
25 25 25
-
25
25 25 25
-
25
25 25 25
-
25
25 25 25 ++
25
25 25 25
25
25 25 25
25
25 25 25
25
25 25 25
X
25 25 25
25
x 25 25 +++
+++ +++ +++ +++ -
凡能使鸡红细胞完全凝集的病毒最高稀释倍 数为病毒的凝集价。 能使红细胞完全凝集的最高稀释倍数的病毒 液0.25ul为一个病毒凝集单位。 凡能使4个凝集单位的病毒凝集红细胞的作用 完全受到抑制的血清最高稀释倍数，称为血 凝抑制价
+++ +
弃
x 25血 凝素 25 25
+++ +
H A
Βιβλιοθήκη Baidu
25 25 25 25
-
25 25 25 25
-
25 x 25 25
_
孔号
稀释度
1
2
2 3
4 8
4
16
5
32
6
64
7
128
8
256
9
、、
10
、、
11(+) 12（-)
HI
弃
生理盐
待检血 清
4HA血 凝素 1%鸡红 细胞 结果预
25
25 25 25



3.在1-12孔均加入25ul的生理盐水。 4.在每孔内加入25ul1%的鸡红细胞悬液，震荡， 室温静止感作15-30min，每5min观察一次结果。 5.计算血凝效价，稀释使成为四价备用．
以出现十十血凝的血凝素最高稀释度为其血凝效价， 即为1个血凝单位，实验时采用4个血凝素单位，例如 血凝素效价为1∶320，为1个单位，4个单位即为 1∶80稀释。下面前经校对取4个血凝单位用于实验
实验原理
某些病毒具有凝聚某些动物红细胞的能力， 称为病毒的血凝，利用这种特性设计的试 验称为血球凝集试验，以此来推测被检材 料中有无病毒存在，是非特异性的，但是 病毒的血凝可为相应的特异性抗体所抑制， 即血球凝集抑制实验，具有特异性，通过 HA-HI实验，可用已知的血清来鉴定未知 的病毒
血凝试验原理
实验四 血凝及血凝抑制实验
实验目的

1.了解血凝及血凝抑制实验原理 2.掌握血凝及血凝抑制试验方法 3.掌握基本操作技术,了解其实用价值
实验原理




凝集试验：颗粒性抗原与相应抗体结合后发生凝 集的血清学试验。 抗原与抗体复合物在电解质作用下，经过一定时 间，形成肉眼可见的凝集团块。 试验可在玻板上进行，称为玻板凝集试验，可用 已知抗原检查未知抗体，或用于已知抗体诊断未 知抗原，； 亦可在试管中进行，称试管凝集试验，主要用于 抗血清效价测定。