第七章 黄酮类化合物

异黄酮＞二氢黄酮醇＞黄酮＞黄酮醇。
➢ 分子中芳香程度高、共轭双键多，则聚酰胺对其的吸附力
强，故难于洗脱。 应用范围：适合各种类型的黄酮类化合物，包括苷、苷元、
查耳酮及二氢黄酮
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聚酰胺“双重色谱”原理
正相色谱
反相色谱
苷与苷元聚 酰胺色谱
聚酰胺：极性固定相（极性酰胺基团） 非极性固定相（非极性脂肪链）
➢ 常用洗脱剂：
碱性水溶液（0.1mol/L NH4OH），盐水溶液(0.05mol/L NaCl) 醇及含水醇，如甲醇，甲醇-水，乙醇等。 其它溶剂：含水丙酮、甲醇-氯仿(凝胶会膨胀， 体积变大)。
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黄酮类化合物在Sephadex-LH20(甲醇)上的Ve/Vo
黄酮类化合物
取代情况
Ve/Vo
第七章 黄酮类化合物(2)
----黄酮类的提取和分离
Flavonoid s
第七章 黄酮类化合物
1 概述 2 黄酮类化合物的结构和分类 3 黄酮类化合物的理化性质 4 黄酮类化合物的提取和分离 5 黄酮类化合物的检识和结构鉴定
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黄酮类化合物的提取和分离
提取
原理：黄酮类化合物的溶解性和酸性 相似相溶与酸碱理论
大部分黄酮苷类可以用7%酚/水洗下。
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黄酮类化合物的提取和分离 分离方法
极性 氢键 分子大小（量） 酸性 特殊结构
硅胶 聚酰胺 柱色谱法 凝胶 梯度pH萃取法 金属盐络合法
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黄酮类化合物的提取和分离 硅胶柱色谱
硅胶是一种高活性吸附材料，其化学分子式为mSiO2·nH2O 应用范围：
主要分离小极性和中等极性的化合物，应用最为广泛。
原理： 利用黄酮类与其它杂质极性 不同，选不同溶剂进行萃取
药材
水或醇-水，加热提取
提取液
浓缩，加3-4倍醇
醇水液
沉淀（水杂）
浓缩，回收醇，加水
水液
依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取
石油醚层
叶绿素等脂 溶性成分
氯仿层
黄酮苷元
乙酸乙酯层
大极性苷元 小极性的苷
5
正丁醇层
黄酮苷
水层
多糖 蛋白质
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黄酮类化合物的提取和分离 碱提酸沉法
芹菜素
5,7,4’－三OH
5.3
木犀草素
5,7,3’,4’－四OH 6.3
槲皮素
3, 5,7,3’,4’－五 OH
8.3
杨梅素
3, 5,7,3’,4’,5’－ 六OH
9.2
山奈酚-3-半乳糖鼠李糖-7-鼠 李糖苷
三糖苷
3.3
槲皮素-3-芸香糖苷
双糖苷
4.0
槲皮素-3-鼠李糖苷 14
单糖苷
4.9
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黄酮类化合物的提取和分离 葡聚糖凝胶柱色谱
提取：
苷元：极性小的溶剂，如氯仿、乙醚、乙酸乙酯等
回流提取
苷及极性大的苷元：
用丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、醇-水加热提取 极性稍大的甙元一般指：羟基黄酮、双黄酮、 橙酮、查尔
酮
多糖苷类：一般用沸水提取
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黄酮类化合物的提取和分离
粗分
➢溶剂萃取法（系统分离法） ➢碱提酸沉法 ➢炭粉吸附法
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黄酮类化合物的提取和分离 溶剂萃取法
洗脱剂：有机溶剂（氯仿-甲醇，极性小） 含水溶剂（甲醇-水，极性大）
先洗脱：游离黄酮（苷元，极性小）
苷（极性大）（柱色谱分离）
Rf值： 苷元 > 苷
苷元 < 苷（TLC色谱鉴别）
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正相与反相层析
硅胶 固定相（硅醇）极性 > 流动相（醇）极性时为正相 聚酰胺 固定相（聚酰胺脂肪链）极性 < 流动相（醇水）极性时为反相
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黄酮类化合物的提取和分离 活性炭吸附法
wk.baidu.com原理：活性炭吸附黄酮苷类化合物 用途：主要用于含量较高的黄酮苷类的精制 操作：植物的甲醇提取物中，分次加入活性炭，
搅拌，静置，定性检查上清液无黄酮反应时为止。 过滤，收集活性炭，依次用沸水、沸甲醇、7%酚/水、 15%酚/醇溶剂进行梯度洗脱，对各部分洗脱液进行定 性检查。
聚
酰
硅
胺
胶
TLC TLC
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黄酮类化合物的提取和分离 葡聚糖凝胶柱色谱
➢ 常用型号：Sephadex-G和Sephadex-LH20 ➢ 原理：吸附作用和分子筛
对游离黄酮，主要是吸附作用, 吸附程度取决于游离酚羟基的 数目，苷元的羟基数目越多，越难洗脱。 对黄酮苷，主要是分子筛原理, 洗脱时按分子量由大到小先后 洗脱下来。
规律：
➢苷元的羟基数越多，Ve/Vo越大，越
难以洗脱。
吸附作用
➢苷的分子量越大, 其上联结糖的数目
越多,Ve/Vo 越小, 容易洗脱。
分子筛原理
➢苷比苷元先洗脱。
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黄酮类化合物的提取和分离 梯度pH萃取法
原理： 黄酮类化合物具有酸性、且不同数目和不同位置的
酚羟基的酸性强弱不同 适用范围：适用于分离酸性强弱不同的黄酮苷元
酸性：7,4′-OH＞ 7-或4′-OH ＞一般酚OH＞5-OH
溶于5%NaHCO3 溶于5%NaCO3 溶于不同浓度NaOH
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黄酮类化合物的提取和分离 梯度pH萃取法
乙醚液
5% NaHCO3
乙醚液 碱液(7,4’-二OH黄酮)
5% Na2CO3
乙醚液 碱液(7或4’-OH黄酮)
0.2% NaOH
➢ 原理：酚羟基与碱成盐，溶于水；加酸后析出 ➢ 碱： 常用Ca(OH)2，即石灰乳(石灰水) ➢ 优点 A：使含酚羟基化合物成盐溶解
B：使含羧基杂质（果胶、粘液质、蛋白质等） 形成沉淀
➢ 注意 a：提取时，碱液浓度不宜过高。
b：加酸酸化时，酸性也不宜过强。
➢ 应用：芦丁和槲皮素的提取、分离和鉴定
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乙醚液 碱液(一般酚OH黄酮)
4% NaOH
乙醚液 碱液(3或5-OH黄酮) （脂杂）
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黄酮类化合物的提取和分离 金属盐络合法
原理：利用分子中某些特定官能团性质进行分离 具有邻二酚羟基的成分，用醋酸铅沉淀 不具有邻二酚羟基的成分，用碱式醋酸铅沉淀
具有邻二酚羟基的黄酮类化合物还可以与硼酸反应形成 溶于水的硼酸络合物，可以与不具有邻二酚羟基的其它 黄酮类化合物分离
异黄酮、二氢黄酮（醇）、高度甲基化（乙酰化）的黄酮 及黄酮醇
多羟基黄酮、黄酮醇及其苷类：硅胶加水去活化
吸附规律：
极性大吸附能力强
e g ： A 苷元 B 二糖苷 C 单糖苷
Rf：A > C > B
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黄酮类化合物的提取和分离 聚酰胺柱色谱
原理：氢键吸附（作用） 洗脱规律：（先—后）
➢ 母核上羟基增加，洗脱顺序递减 ➢ 羟基数目相同时，有缔合羟基 > 无缔合羟基 ➢ 苷元相同：三糖苷 > 双糖苷 > 单糖苷 > 苷元 ➢ 不同类型黄酮类化合物的洗脱先后顺序为：
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从柠檬果皮中分离降血压有效成分 提取分离实例1