1糖的呈色反应和还原糖的检验(讲稿)

糖的呈色反应和还原糖的检验（讲稿）

本次实验目的是了解鉴定糖和还原糖的原理以及方法，并通过实验操作予以验证。2人一组，前1-18组1个实验室。

二、实验原理。

糖的鉴定：糖经浓无机酸处理，脱水产生糠醛或糠醛衍生物。戊糖形成糠醛，己糖则形成羟甲基糠醛。这些糠醛和糖醛衍生物在浓无机酸作用下，能与酚类化合物缩合生成有色物质。与一元酚如α-萘酚作用，形成三芳香环甲基有色物质。与多元酚如间苯二酚作用，则形成氧杂蒽有色物质。

通常使用的无机酸为硫酸。如用盐酸，则必须加热。常用的酚类为α-萘酚、甲基苯二酚、间苯二酚和间苯三酚等，有时也用芳香胺、胆酸、某些吲哚衍生物和一些嘧啶类化合物等。

还原糖和非还原糖的鉴别：含有自由醛基(-CHO)或酮基(>C=O)的单糖和二糖为还原糖。在碱性溶液中，还原糖能将金属离子(铜、铋、汞、银等)还原，糖本身被氧化成酸类化合物，此性质常用于检验糖的还原性，并且常成为测定还原糖含量的各种方法的依据。

三、实验内容

本次实验一共采用了6种糖液作为测试糖液，2％葡萄糖，果糖，麦芽糖，蔗糖，1％淀粉溶液和1种未知糖液，每种糖液均有专门的移液管移取（贴有标签，有些实验可能只需加几滴，可以在移液管头部套上胶头滴加），不要弄混，所有试剂都有相应的移液管移取（大概4个组公用1套），用后请放回原位，方便别的同学使用。

实验包括2个部分，共7个实验。

（一）糖的呈色反应

1．Molish反应(α-萘酚反应)

本实验是鉴定糖类最常用的颜色反应。糖在浓酸作用下形成的糠醛及其衍生物与α-萘酚作用，形成红紫色复合物。在糖溶液与浓硫酸两液面间出现紫环，因此又称紫环反应。自由存在和结合存在的糖均呈阳性反应。此外，各种糠醛衍生物、葡萄糖醛酸、丙酮、甲酸、乳酸等皆呈颜色近似的阳性反应。因此，阴性反应证明没有糖类物质的存在；而阳性反应，则说明有糖存在的可能性，需要进一步通过其他糖的定性试验才能确定有糖的存在。

步骤：取6支已标号的试管，分别加入各种测试糖液lmL(约15滴)，再各加入Molish 试剂2滴，摇匀。逐一将试管倾斜，分别沿管壁慢慢加入浓硫酸l mL，然后，小心竖直试管，使糖液和硫酸清楚地分为两层，观察交界处颜色变化。如几分钟内无呈色反应，可在热水浴中温热几分钟。记录各管出现的颜色，说明原因，检定未知糖液。

该实验希望大家注意：

1、按书上步骤操作，尽量不要让糖液和浓硫酸混合，以方便观察出现的紫环。

2、该实验阳性只能说明有糖的存在。

3、Molisch反应非常灵敏，0．001％葡萄糖和0．0001％蔗糖即能呈现阳性反应。因

此，不可使碎纸屑或滤纸毛混入样品中。过浓的果糖溶液，由于硫酸对它的焦化作用，将呈现红色及褐色而不呈紫色。需稀释糖溶液后重做。

2．蒽酮反应

糖经浓酸水解，脱水生成的糠醛及其衍生物与蒽酮(10-酮-9，10-二氢蒽)反应生成蓝-绿色复合物。

步骤：取6支标号的试管，分别加入lmL蒽酮溶液，再将测试糖液分别滴加到各试管内，混匀，观察颜色变化，鉴定未知糖液。

注意：加入糖液的量会影响颜色的变化，本次实验加入量不要太多，几滴即可，（太多形成的颜色不再是蓝绿色）

3. Seliwanoff反应(间苯二酚反应)

该反应是鉴定酮糖的特殊反应。在酸作用下，己酮糖脱水生成羟甲基糠醛。后者与间苯二酚结合生成鲜红色的化合物，反应迅速，仅需20-30s。在同样条件下，醛糖形成羟甲基糠醛较慢。只有糖浓度较高时或需要较长时间的煮沸，才给出微弱的阳性反应。蔗糖被盐酸水解生成的果糖也能给出阳性反应。

步骤：取试管6支，编号，各加人Seliwanoff试剂ImL。再依次分别加入测试糖液各4滴，混匀，同时放人沸水浴中，比较各管颜色变化及出现颜色的先后顺序，分析说明原因。

注意：

1、该反应注意观察颜色出现（反应）的先后顺序，并记录下来。可将出现颜色的试管及时取出，避免干扰。

2、这是鉴别醛糖和酮糖的反应，注意蔗糖比较特殊，为什么？

4．Bial反应(甲基间苯二酚反应)

戊糖与浓盐酸加热形成糠醛，在有Fe3+存在下，它与甲基间苯二酚(地衣酚)缩合，形成深蓝色的沉淀物。此沉淀物溶于正丁醇。己糖也能发生反应，但产生灰绿色甚至棕色的沉淀物。

步骤：将2滴测试糖液加到装有1ml Bial试剂的试管中，沸水浴中加热，观察颜色变化。如遇到未知糖呈色不明显，可以3倍体积水稀释，并加入1ml戊醇，摇动，醇液呈蓝色，即为阳性反应。

注意：

本次实验提供的已知糖液全为己糖

（二）还原糖的鉴定

（课堂上讲的那些糖属于还原糖？）

1．Fehling反应

费林试剂是含有硫酸铜与酒石酸钾钠的氢氧化钠溶液。硫酸铜与碱溶液混合加热，则生成黑色的氧化铜沉淀。若同时有还原糖存在，则产生黄色或砖红色的氧化亚铜沉淀。

在碱性条件下，糖不仅发生烯醇化、异构化等作用。也能发生糖分子的分解、氧化、还

原或多聚作用等。由这些作用所形成的复杂混合物具有强烈的还原作用，因此企图用简单的氧化还原作用来写出反应平衡式是不可能的。

为了防止铜离子和碱反应生成氢氧化铜或碱性碳酸铜沉淀，Fehling试剂中加入酒石酸钾钠，它与Cu2+形成的酒石酸钾钠络合铜离子是可溶性的络离子，该反应是可逆的。平衡后溶液内保持一定浓度的氢氧化铜。费林试剂是一种弱的氧化剂，它不与酮和芳香醛发生反应。

步骤：取8支试管，各加Fehling试剂A和B各lmL。摇匀后，分别加人测试糖液各4滴，沸水浴煮2—3min，取出冷却，观察沉淀和颜色的变化。

2. Benedict反应

Benedict试剂是Fehling试剂的改良。它利用柠檬酸作为Cu2+的络合剂，其碱性比Fehling 试剂弱，灵敏度高，干扰因素少，因而在实际应用中有更多的优点。

步骤：于8支试管中先各加入Benedict试剂2ml，再分别加入测试糖各4滴，沸水浴中煮2-3min，冷却后，观察颜色变化。

3．Barfoed反应

该反应的特点是在酸性条件下进行还原作用。在酸性溶液中，单糖和还原二糖的还原速度有明显差异。单糖在3min内就能还原Cu2+而还原二糖则需20min。所以，该反应可用于区别单糖和还原二糖。当加热时间过长，非还原性二糖被水解也能呈现阳性反应，如蔗糖在10 min内水解而发生反应。还原二

糖浓度过高时，也会很快呈现阳性反应，若样品中含有少量氯化钠也会干扰此反应。

步骤：分别加入测试糖液2-3滴到含有1ml Barfoed试剂的试管中，煮沸约3min，放置20min以上，比较各管颜色变化及红色出现的先后顺序。

注意：

1、本实验需要比较红色出现的先后顺序，因此在20分钟的放置过程中，需不时拿起试管观察底部。

2、理论上是出现Cu2O红色沉淀，但试剂反应时若反应速度快则生成的Cu2O颗粒较小，呈黄绿色；反应慢时，生成的Cu2O颗粒较大，呈红色。有保护胶体存在时，常生成黄色沉淀。实际生成的沉淀含有大小不同的Cu2O颗粒，因而每次观察到颜色可能略有不同。溶液中还原糖的浓度可以从生成沉淀的多少来估计，而不能依据沉淀的颜色来区别。

三、实验试剂的配制

以上实验中，有4种试剂需要在临用前配制：

①Molish 氏试剂

称取α－萘酚2克，溶于95％乙醇中并定容到100ml。注意临用前，新鲜配制，贮于棕色瓶中。

②蒽酮(Anthrone)试剂

溶解0.2g蒽酮于100mL浓硫酸(A.R．，比重1.84，含量95%)中。当日配制、使用。