小麦醇溶蛋白和麦谷蛋白的PAGE实验

小麦醇溶蛋白的A-PAGE电泳实验
（一）试剂配制
（1）醇溶蛋白提取液：0.05g甲基绿、25ml2-氯乙醇，1mlβ-巯基乙醇用蒸馏水定容到100ml，4℃保存备用。

（2）电泳缓冲液原液：0.4g甘氨酸、4ml冰醋酸用蒸馏水定容到100ml，4℃保存备用。

（用时稀释10倍）
（3）凝胶缓冲液：0.5g甘氨酸、10ml冰醋酸、30g尿素、0.5g抗坏血酸、
0.0125g硫酸亚铁，用蒸馏水定容到500ml，4℃保存备用。

（4）凝胶溶液：12g丙烯酰胺、0.375g N, N-亚甲基双丙烯酰胺，用凝胶缓冲液溶解并定容到100ml，4℃保存备用。

（5）0.6%H202溶液：0.2ml 30%H202,加纯水至100ml。

（6）固定液：10%三氯乙酸溶液。

（7）染色液：1%考马司斯亮蓝R-250无水乙醇溶液。

（二）醇溶蛋白的提取
样品籽粒磨碎成粉后取20mg，放入1.5 ml的离心管中，加入醇溶蛋白提取液0.3mL，充分振荡30min后，静置过夜，次日8000r/min离心8min，吸取上清液于另一新离心管，4℃保存备用。

（三）凝胶的制备
每块胶板取60ml（北京六一仪器厂，DYCZ-24F电泳槽，1.5ml 21格板）的凝胶溶液，加30μl 0.6%H202溶液，迅速摇匀后，倒入玻板之间，插好样品梳，让其聚合约30min。

胶凝后，先轻轻摇动样品梳，然后小心拔出。

如果加样槽不正或断裂，可用长针头扶正。

（四）点样及电泳
利用微量进样器向加样槽内加入样品提取液和对照样品15μl，换样品时，要用蒸馏水冲洗注射器2～3次，以防污染。

连接好电泳仪和电泳槽导线，注意正负极。

选择电泳仪在稳压状态，先调恒压200V，15℃电泳15-30min，然后调恒压400V，15℃下电泳5～6h。

电泳过程中，上电极槽中加入的溴酚蓝指示剂会在胶板形成一条明显的紫色指示线，当指示线移至胶板下端边沿时，蛋白质大概移至距边沿1cm左右处，电泳完成。

（五）染色及脱色
将胶板放入盛有300ml染色液的瓷盘中，加盖后置于摇床上慢速震荡染色。

染色约6h，至电泳条带清晰为止。

染色液可以重复使用。

染色后的胶板用放入盛
有蒸馏水的瓷盘中慢速震荡褪色。

褪色约需要2-3h，至电泳胶板底色褪掉为止。

（六）照相
用数码相机或成像系统拍照，并保留照片。