实验四 肝组织中核酸的提取和鉴定
肝组织中核酸的分离与鉴定
动物组织中核酸的提取与组分的鉴定[适用对象]药学、药物制剂、中药学、中药学（国际交流方向）、制药工程、中药学（知识产权保护方向）、生物工程专业[实验学时] 4学时一、实验目的掌握核酸分离的方法及各成分的鉴定，熟悉台式离心机的使用，并学会小鼠的处死。
二、实验原理组织细胞中的核酸大部分与蛋白质结合而形成核蛋白。
核蛋白被三氯醋酸沉淀后，用10%NaCl溶液提取核酸的钠盐，再加入乙醇可使核酸钠沉淀析出。
核糖核酸（RNA）与脱氧核糖核酸（DNA）均可被硫酸水解产生磷酸、碱基（嘌呤和嘧啶）和戊糖（RNA含核糖，DNA含脱氧核糖）。
此三类化合物可用下述方法鉴定之。
1、磷酸与钼酸铵作用产生磷钼酸，后者在还原剂氨萘酚磺酸作用下形成蓝色的钼蓝。
2、嘌呤与硝酸银产生灰褐色的嘌呤银化合物。
3、核糖经浓盐酸或浓硫酸作用生成糖醛，后者和3，5-二羟甲苯缩合而成绿色化合物。
4、脱氧核糖在浓酸中生成ω-羟（基）-γ-酮（基）戊醛，它与二苯胺作用生成蓝色化合物。
三、仪器设备台式离心机四、相关知识点核酸组成知识；化学呈色反应知识；离心技术知识。
五、实验步骤（一）制备匀浆将小白鼠1只，拉断脊椎致死，剖腹取出全部肚组织；用清水冲净血污后，用滤纸吸干，用剪刀剪碎，再加0.9%NaCl 溶液2ml于研钵中制成匀浆。
（二）分离提取取全部匀浆于离心管（或小试管）内，加2%三氯醋酸2ml，用玻璃顶替搅匀，静置3分钟，3000转/分离心3分钟。
3000转/分离心3分钟。
弃上清液，于沉淀中加入10%NaCl2ml，充分混匀；置沸水浴中加热8分钟，用玻璃顶替边加热边搅拌（防止玻管底破裂），使之充分生成核酸钠化合物。
取出放冷，3000转/分离心3分钟。
将上清液倒入另一试管内，逐滴加入95%冷乙醇2ml，边加边搅拌，待析出白色沉淀。
静止5分钟后，再3000转/分离心5分钟，倾去上清液后沉淀备用。
（三）核酸水解于上述白色沉淀（核酸钠）中加入5%H2SO4溶液4ml，用玻璃棒搅匀，在沸水浴中加热10分钟，即得核酸水解液。
生化实验核酸实验报告
实验名称：动物组织中核酸的提取与鉴定实验日期：2023年11月15日实验目的：1. 学习和掌握动物组织中DNA和RNA的提取方法。
2. 了解核酸的组成成分，并进行鉴定。
3. 掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离血清蛋白质。
实验原理：核酸是生物体内重要的生物大分子，包括脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）。
DNA主要存在于细胞核中，而RNA主要存在于细胞质中。
本实验通过提取动物组织中的DNA和RNA，并对其进行鉴定，以了解核酸的基本特性。
实验材料：1. 动物组织（如肝组织）2. 提取试剂：酚/氯仿、Tris-HCl缓冲液、EDTA、NaCl、SDS、RNA酶、蛋白酶K、乙醇、异丙醇等3. 实验仪器：高速离心机、电热恒温恒湿箱、紫外可见分光光度计、凝胶成像系统、移液器、玻璃棒等实验步骤：一、DNA的提取1. 将动物组织剪碎，加入适量Tris-HCl缓冲液、EDTA、NaCl和SDS，充分混匀。
2. 加入蛋白酶K，置于55℃水浴中消化1小时。
3. 加入等体积的酚/氯仿，充分混匀，静置10分钟。
4. 12,000 r/min离心15分钟，取上清液。
5. 加入等体积的氯仿，充分混匀，静置10分钟。
6. 12,000 r/min离心15分钟，取上清液。
7. 加入2倍体积的95%乙醇，混匀，静置2小时。
8. 12,000 r/min离心10分钟，弃去上清液。
9. 用75%乙醇洗涤沉淀，干燥后溶于适量Tris-HCl缓冲液中。
二、RNA的提取1. 将动物组织剪碎，加入适量Tris-HCl缓冲液、EDTA、NaCl和SDS，充分混匀。
2. 加入RNA酶和蛋白酶K，置于55℃水浴中消化1小时。
3. 加入等体积的酚/氯仿，充分混匀，静置10分钟。
4. 12,000 r/min离心15分钟，取上清液。
5. 加入等体积的氯仿，充分混匀，静置10分钟。
6. 12,000 r/min离心15分钟，取上清液。
7. 加入2倍体积的95%乙醇，混匀，静置2小时。
动物组织中核酸的提取及其组成成分的鉴定
加数滴使呈碱性
10
10
硝酸银
灰褐色沉淀
核糖鉴定
试剂(滴)
核酸水解液 5% H2SO4 3,5-二羟甲苯
管号
1#实验管
2#对照管
4
–
–
4
6
6
沸水加热5min,比较两管颜色.
核糖 浓酸 糖醛 + 3,5二羟甲苯
3H2O
绿色复合物
脱氧核糖鉴定
试剂(滴)
核酸水解液 5% H2SO4 二苯胺试剂
管号
1#实验管
RCF在离心管内不相同，靠转子外最大, 靠中心轴最小，有表可查。
离心机种类及用途
1、低速离心机 常规使用,台式,最大速度3 000~6 000r/min,
RCF可达6 000g。常用于收集细胞、细胞核或 叶绿体等较大的细胞器、抗原-抗体复合物等 粗颗粒沉淀。 2、高速离心机
较大立式，常有制冷系统。最高速率可达 25 000r/min、RCF达60 000g。用于分离微生 物细胞、线粒体、溶酶体等细胞器和蛋白质沉 淀物。
开 始 做 实 验 ！
亚细胞结构的分离
生物颗粒在离心场中所需离心加速度和时间
离心加速度 时间
沉降的组分
100g 4 000g 15 000g 30 000g 100 000g
5min 10min 20min 30min 3~10h
真核细胞 叶绿体 细胞碎片 细胞核 细菌、线粒体 溶酶体、细菌细胞碎片 核糖体
实验步骤
猪
3、超速离心机
一类速度非常高的离心机，最大转速 可超过30 000r/min，最大RCF可达600 000g ，用于沉淀核糖体、膜泡等小的细胞器和 生物大分子。具有精密的制冷、真空装置 4、微。量离心机
生化实验4动物肝脏DNA的提取和鉴定
▪ 1、核酸的理化性质
▪ RNA和核苷酸的纯品都呈白色粉末或结 晶，DNA则为白色类似石棉样的纤维状物。 除肌苷酸、鸟苷酸具有鲜味外，核酸和核 苷酸大都呈酸味。
▪ DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物， 一般都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机 溶剂，它们的钠盐比游离酸易溶于水， RNA钠盐在水中溶解度可达40g/L。DNA 在水中为10g/L，呈黏性胶体溶液。在酸 性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性或 弱碱性溶液中较稳定。
（4) 离心机 (5) 普通光学显微镜 (6) 冰箱 (7) 具塞离心管 (8) 弯头滴管
(9)小 烧杯
(10) 紫外分光光度计
(11)分析天平 (12)恒温水浴 (13)硬质玻璃试管 (14)新鲜猪肝脏 (15)冰块
2. 试剂 （1）匀浆液（ 0.1 mol/L NaCl ＋0.05 mol/L柠檬
实验五
动物肝脏DNA的提取和鉴定
(教材110页)
一．原理
DNA 、 RNA在细胞内多以核蛋白体形 式存在---DNP 、 RNP．
分离提取核酸时首先要破碎细胞去除蛋 白质和其他物资, 用0.14mol/L Nacl(含柠 檬酸钠)匀浆液溶解细胞中的RNA及其他物资, 离心，去上清,然后加入提取液（十二烷基硫 酸钠，SDS）溶液溶解DNA，然后加入氯仿 -辛醇，以去除其余核蛋白和杂蛋白．再离心 除去沉淀(杂蛋白)部分,收集上清部分(DNA).
▪ 鉴定:
▪
▪ 脱氧核糖的鉴定
▪
1.O ml DNA溶解液+二苯胺
化合物.
加热10分钟
生成蓝色
▪ 嘌呤碱的鉴定
▪
1.0ml DNA溶解液 + 生褐色的嘌呤银化合物。
肝脏组织提取实验报告
一、实验目的1. 学习并掌握肝脏组织提取的原理和步骤。
2. 熟悉肝脏组织提取过程中所需的仪器和试剂。
3. 掌握肝脏组织提取过程中注意事项，提高实验操作技能。
二、实验原理肝脏组织提取实验主要是通过一系列的物理和化学方法，将肝脏组织中的细胞、细胞器、蛋白质、核酸等生物大分子分离出来，以便于后续的生物学研究。
本实验采用匀浆法提取肝脏组织，通过裂解细胞、离心、洗涤等步骤，获得较为纯净的肝脏组织。
三、实验材料与仪器1. 材料：新鲜小鼠肝脏组织2. 试剂：TRIzol试剂、氯仿、异丙醇、75%乙醇、DEPC水、RPMI 1640培养基等3. 仪器：匀浆器、高速离心机、移液器、离心管、玻璃匀浆器、EP管等四、实验步骤1. 匀浆处理：将新鲜小鼠肝脏组织在玻璃匀浆器中磨碎，每50到100mg组织加入1ml TRIzol试剂，用匀浆器进行匀浆处理。
样品体积不应超过TRIzol试剂体积的10%。
2. 室温放置：将匀浆器样品在室温放置5分钟。
3. 振荡混合：每使用1ml TRIzol试剂加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。
4. 离心分离：2到8 10000Xg离心五分钟，样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。
RNA主要在水相中。
5. 转移水相：将水相转移到新管中。
6. 沉淀RNA：每使用1ml TRIzol试剂加入0.5ml异丙醇，室温放置1分钟。
7. 离心分离：2到8 10000Xg离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。
移去上清。
8. 洗涤RNA：用75%乙醇洗涤RNA沉淀，每使用1ml TRIzol试剂至少加入1ml 75%乙醇，2到8 8000转离心5分钟，弃上清。
9. 干燥RNA：室温放置干燥RNA沉淀，大约晾5到10分钟即可。
10. 溶解RNA：加入25微升无RNase的DEPC水，用枪头吸打几次，放置10分钟使RNA溶解。
11. 保存RNA：-20℃保存。
实验四 肝组织中核酸的提取和鉴定
实验四肝组织中核酸的提取和鉴定一、实验目的：1.了解核酸提取的主要原理和方法。
2.掌握核酸提取实验操作技能。
3.掌握核酸鉴定实验操作技能。
二、实验原理：核酸提取是生物学中的常用操作，其中DNA 和 RNA 分别用于分子生物学和生物信息学研究中。
肝作为重要的代谢器官，其中含有大量的核酸。
肝组织中核酸的提取主要步骤包括细胞破碎、蛋白质去除、核酸溶解和纯化等。
随着生物技术的不断发展，目前常用的核酸提取方法主要包括酚-氯仿法、CTAB 法、盐法等。
本实验将采用CTAB 法提取肝组织中的总核酸。
酚-氯仿法：酚和氯仿在一般情况下是不混溶的，但当二者混合时，由于酚的分子大小和分子内极性变化，使酚分子具有两种不同的极性，可以在解理体系中表现出较强的亲和性，因此酚能沉淀核酸和蛋白质复合物，而使DNA、RNA清洗得更纯。
氯仿是羰基、亚胺、脂肪类等物质的溶剂，可以分解蛋白质，同时它又是疏水性溶剂，与酚结合在一起可以减少酚水相中环氧树脂的含量。
CTAB法：CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）是一种阳离子型的表面活性剂，由于其可与核酸形成稳定的复合物，在NaCl的介质中能选择性分离出核酸。
CTAB 的选择性可以用于除去单细胞内存在的大量DNA。
(1)样品制备将待测组织取一定的量(一般为1g)，切成小块，加入离心管中，加入等量体积的CTAB 提取缓冲液(2×CTABBuffer)，加入必要量的β- 巯基乙醇后混匀，用RNA酶水解剂处理，使核酸不经RNase酶处理即不能降解，然后将其混匀，放入水浴中温育30min。
温育完后，加入一定量的氯仿和异戊醇，混匀后离心。
在上层水相与下层有机相之间，出现一层白色的粘稠界面，界面中夹杂有蛋白质和DNA。
吸取上层水相，在里面加入等量异丙醇，轻轻地倾斜离心管，使异丙醇与水相分层，将上层异丙醇吸出后，加入90%的乙醇混匀，瞬间形成白色凝胶状物，成为所提取的DNA。
将其用75%酒精洗涤数次，直至酒精中没有崩解压缩改变形状的物质，使其干燥。
动物组织中核酸的提取与鉴定
动物组织中核酸的提取与鉴定
一、生物大分子制备方法基本设计思路
流程：选材→破碎→抽提→浓缩→分离纯化 破碎方法：机械、物理、化学、生物 浓缩方法：沉淀（盐析，可逆变性，有机溶剂等） 生化实验三大分离技术： 离心技术 层析技术 电泳技术
二、实验方法及设计流程
1、提取（3课时） 猪肝 → 匀浆→ 三氯醋酸沉淀核蛋白→ 离心（3200-3500 rpm，5min）
复习与计思路， 写出核酸提取制备的设计原理。
2、样品如何判断是DNA、还是RNA,反应条 件如何？
3、造成产量偏低的原因，从提取过程分析。
动物组织中核酸的提取与鉴定实验方案
实验原理
本实验运用盐溶液法用动物肝脏分离制备DNA 核酸在细胞内都与蛋白质结合成核蛋白，要分离核 酸必须使核酸与蛋白质分离并除去蛋白质。 已知在0.14mol/LNaCl溶液中核糖核蛋白溶解度最 大，而脱氧核糖核蛋白溶解度最小，在1mol/LNaCl 溶液中脱氧核糖核蛋白溶解度增大，核糖核蛋白的 溶解度则明显下降，根据这种特异性即可把这两种 核蛋白分开
动物猪肝猪羊兔组织捣碎机离心机量筒烧杯锥形瓶玻璃棒离心管称量瓶滴管等实验步骤取动物肝脏浸入预先在冷水浴中冷却的014mollnacl001molledta溶液反复洗涤几次直至组织无血为止将洗净的组织剪成碎块称取10g加入20ml014mollnacl001molledta溶液在组织捣碎机中匀浆44000rmin离心15分钟后弃上清液在沉淀中加入4倍体积的低温014mollnacl001molledta溶液搅匀后离心弃上清液如此反复23次保留沉淀实验步骤将沉淀物悬于5倍体积的014mollnacl001molledta溶液中搅匀边搅拌边滴加sds溶液直至sds的最终浓度达10gl为止然后加入固体nacl使nacl最终浓度达1moll继续搅拌3045min以确保nacl全部溶解将上述混合液倒入一个具有塞的锥形瓶中加入等体积的氯仿异戊醇振荡10min在室温3000rmin离心10min此时可见3层小心吸取上层水相记录体积放入锥形瓶中再加入氯仿异戊醇混合物振荡离心如此反复抽提数次直至界面处不出现蛋白凝胶为止最后一次离心后小心吸取上层溶液计量体积放入干燥小烧杯加入2倍体积的预冷95乙醇产生沉淀后4000rmin离心10min弃去上清液沉淀即为dna实验步骤加2倍体积预冷乙醇如用滴管滴加边加边慢慢顺一个方向在烧杯中搅动有粘稠维丝物缠在玻璃棒上直至再无丝状物缠上为止将玻璃棒上的dna取下依次用75乙醇95无水乙醇洗一次放入干净量瓶中至于干燥器中抽干十二烷基硫酸钠sds组织捣碎机离心机宝山壁画宝山壁画是引人注目的昂贵文物
肝的实验报告
一、实验目的1. 学习核酸的分离与鉴定技术。
2. 掌握肝组织中核酸的提取方法。
3. 鉴定肝组织中的DNA和RNA。
二、实验原理核酸是生物体内重要的生物大分子，包括DNA和RNA两种。
DNA主要存在于细胞核中，而RNA主要存在于细胞质中。
本实验通过肝匀浆的制备，分离肝组织中的核酸，并对其进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 材料：小鼠肝组织、无水乙醇、异丙醇、0.14mol/L氯化钠溶液、0.01mol/L柠檬酸钠溶液、盐酸、硫酸、二苯胺、3，5-二羟甲苯、核糖、脱氧核糖、酶抑制剂等。
2. 仪器：高速离心机、电子天平、研钵、离心管、烧杯、试管、酒精灯、显微镜等。
四、实验步骤1. 样品制备（1）称取新鲜小鼠肝组织1g，置于研钵中。
（2）加入适量的0.14mol/L氯化钠溶液和0.01mol/L柠檬酸钠溶液，研磨至匀浆。
2. 核酸提取（1）将肝匀浆转移至离心管中，4℃下8000r/min离心10min。
（2）取上清液，加入等体积的无水乙醇，混匀，4℃下静置30min。
（3）将混合液转移至离心管中，8000r/min离心10min。
（4）弃去上清液，加入适量的75%乙醇洗涤沉淀，8000r/min离心5min。
（5）弃去上清液，将沉淀晾干，加入适量的去离子水溶解。
3. 核酸鉴定（1）DNA鉴定：取适量DNA溶液，加入2mol/L盐酸和2%二苯胺，沸水浴5min。
观察溶液颜色变化，若呈蓝色，则证明存在DNA。
（2）RNA鉴定：取适量RNA溶液，加入2mol/L盐酸和2%3，5-二羟甲苯，沸水浴5min。
观察溶液颜色变化，若呈绿色，则证明存在RNA。
五、实验结果与分析1. 核酸提取通过肝匀浆的制备和离心分离，成功提取了小鼠肝组织中的核酸。
2. 核酸鉴定通过沸水浴和显色反应，成功鉴定了小鼠肝组织中的DNA和RNA。
六、实验结论1. 成功提取了小鼠肝组织中的核酸。
2. 成功鉴定了小鼠肝组织中的DNA和RNA。
七、注意事项1. 肝匀浆研磨过程中，注意研磨充分，确保细胞彻底破碎。
肝脏核酸提取实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 学习并掌握肝脏中DNA和RNA的提取方法。
2. 了解核酸的生物学特性及其在生物科学中的应用。
3. 掌握核酸纯化、鉴定和定量分析的基本技术。
二、实验原理核酸是生物体内的重要生物大分子，包括脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）。
DNA主要存在于细胞核中，负责遗传信息的存储和传递；RNA则主要存在于细胞质中，参与蛋白质的合成。
肝脏作为生物体内的重要器官，含有丰富的核酸资源。
本实验采用酚-氯仿法提取肝脏中的DNA和RNA，并通过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度法进行鉴定和定量分析。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：新鲜小鼠肝脏组织。
2. 试剂：酚-氯仿、氯仿、异丙醇、75%乙醇、TE缓冲液、SDS、NaCl、NaOH、EDTA、琼脂糖、DNA marker、TAE缓冲液、溴化乙锭（EB）等。
四、实验方法1. 肝脏组织处理：将新鲜小鼠肝脏组织剪碎，加入适量的TE缓冲液，研磨成匀浆。
2. 核酸提取：将匀浆液加入等体积的酚-氯仿，充分振荡，静置分层。
吸取上清液，加入等体积的氯仿，充分振荡，静置分层。
吸取上清液，加入等体积的异丙醇，充分混匀，室温静置30分钟。
将沉淀用75%乙醇洗涤，室温晾干。
3. 核酸溶解：将沉淀溶于适量的TE缓冲液，加入适量的SDS和EDTA，充分混匀。
4. DNA和RNA分离：将上述溶液加入适量的NaOH和NaCl，充分混匀，室温静置15分钟。
加入等体积的氯仿，充分振荡，静置分层。
吸取上清液，加入等体积的异丙醇，充分混匀，室温静置30分钟。
将沉淀用75%乙醇洗涤，室温晾干。
5. DNA和RNA溶解：将沉淀溶于适量的TE缓冲液，加入适量的EDTA，充分混匀。
6. 琼脂糖凝胶电泳：将DNA和RNA样品加入适量的上样缓冲液，点样于琼脂糖凝胶电泳槽中，以DNA marker为标准，进行电泳。
7. 紫外分光光度法：将DNA和RNA样品分别加入适量的TE缓冲液，用紫外分光光度计测定其OD值，计算DNA和RNA的浓度。
试验四肝组织中核酸的提取和鉴定
实验四 肝组织中核酸的提取和鉴定【目的】验证核酸的三大组成成分。
熟悉组织中核酸的提取与鉴定的基本操作方法。
【原理】动物组织细胞中的核糖核酸（RNA ）与脱氧核糖核酸（DNA ）大部分与蛋白质结合而形成核蛋白。
被三氯醋酸沉淀的核蛋白，先用95%的乙醇加热去除附着在沉淀上的脂类杂质，再用1.7mol/L NaCl 溶液提取出核酸的钠盐，然后加入乙醇即可使核酸钠盐沉淀析出。
RNA 与DNA 均可被硫酸水解产生磷酸、含氮碱基(嘌呤与嘧啶)及戊糖（RNA 为核糖，DNA 为脱氧核糖）。
此三类物质分别可按照下述原理鉴定。
1.磷酸 磷酸与钼酸铵试剂作用生成黄色磷钼酸，磷钼酸中的钼在有还原剂（硫酸亚铁）存在时可被还原成蓝色的钼蓝。
根据此呈色反应即可鉴定磷酸的存在。
2.嘌呤碱 根据嘌呤碱能与硝酸银产生灰褐色的絮状嘌呤银化合物而鉴定。
3.戊糖 根据核糖经浓盐酸或浓硫酸作用则生成糠醛，后者能与3，5二羟甲苯缩合而形成绿色化合物而鉴定。
CHOC H C H C H CH 2OHOH OH OH OCHOOH CH 3COCH 3OCH 3OH-H 2O核糖3，5-二羟甲苯糠醛绿色化合物脱氧核糖在浓酸中生成ω-羟基-γ-酮基戊醛，它和二苯胺作用生成蓝色化合物。
CHO C H C H C 2OHH H O -H 2O浓酸脱氧核糖蓝色化合物CHO C H C H C H CH 2OHH OH OH ω-羟基-γ-酮基戊醛二苯胺【器材】剪刀、镊子、玻棒、滤纸、试管、试管架、蒸发皿、匀浆器、离心机、沸水浴箱。
【试剂 1.生理盐水。
2. 0.12 mol/L三氯醋酸溶液。
3. 95% 乙醇。
4. 10% NaCl溶液NaCl 10g溶于蒸馏水中，加至100ml。
5. 0.92 mol/L H2SO4取浓H2SO4（比重1.84，含量98%）5ml加入蒸馏水中，加水至100ml 。
6. 钼酸铵试剂钼酸铵3g，溶于70ml蒸馏水中，逐渐加入浓 H2SO4 14ml ，冷却后再加至100ml，混匀备用。
实验四植物组织中核酸的提取和测定
实验四植物组织中核酸的提取和测定一、实验目的1.掌握从植物组织中提取核酸的方法。
2.掌握RNA、DNA 的定性鉴定方法。
二、实验原理用冰冷的稀三氯乙酸或稀高氯乙酸溶液在低温下抽提植物组织匀浆，以除去酸溶性小分子物质，再用有机溶剂，如乙醇、乙醚等抽提，去掉脂溶性的磷脂等物质。
最后用浓盐溶液(10％氯化钠溶液)和／L 高氯酸(70℃)分别提取DNA 和RNA，再进行定性鉴定。
由于核糖和脱氧核糖有特殊的颜色反应，经显色后所呈现的颜色深浅在一定范围内和样品中所含的核糖和脱氧核糖的量成正比，因此可用此法来定性、定量测定核酸。
1.核糖的测定糠醛，后者再与3，5－二羟甲苯作用产生绿色物质。
测定核糖的常用方法是苔黑酚(即3，5－二羟甲苯法(Orcinol 反应))。
当含有核糖的RNA 与浓盐酸及3，5－二羟甲苯在沸水浴中加热10～20分钟后，有绿色物产生，这是因为RNA 脱嘌呤后的核糖与酸作用后生成2.氧核糖的测定物质。
测定脱氧核糖的常用方法是二苯胺法。
含有脱氧核糖的DNA 和二苯胺在沸水浴中共沸10分钟后，产生蓝色。
这是因为DNA 嘌呤核苷酸上的脱氧核糖与酸生成ω－羟基－6－酮基戊醛，它再和二苯胺作用产生蓝色此法易受多种糖类及其衍生物和蛋白质的干扰。
上述两种定糖的方法准确性较差，但快速、简便，能鉴别DNA 与RNA，是鉴定核酸、核苷酸的常用方法。
三、仪器、原料与试剂仪器：恒温水浴锅、离心机、吸管、量筒、电炉、布氏漏斗装置、烧杯、剪刀。
原料：新鲜菜花(花椰菜)试剂：1. 95％乙醇：600mL2. 丙酮：400mL3. 5％高氯酸溶液：200 mL4. L 高氯酸溶液：200mL5. 10％氯化钠溶液：400mL6. 标准RNA 溶液(5mg/100mL)：50mL7. 标准DNA 溶液(15mg/100mL)：50mL8. 粗氯化钠：250g9. 海砂：5g10. 二苯胺试剂60mL将1g 二苯胺溶于100 mL 冰醋酸中，再加入mL 浓硫酸(置冰箱中可保存6个月。
生化实验4动物肝脏DNA的提取和鉴定
▪ 1、核酸的理化性质
▪ RNA和核苷酸的纯品都呈白色粉末或结 晶，DNA则为白色类似石棉样的纤维状物。 除肌苷酸、鸟苷酸具有鲜味外，核酸和核 苷酸大都呈酸味。
▪ DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物， 一般都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机 溶剂，它们的钠盐比游离酸易溶于水， RNA钠盐在水中溶解度可达40g/L。DNA 在水中为10g/L，呈黏性胶体溶液。在酸 性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性或 弱碱性溶液中较稳定。
酸钠混合盐）
（2） 提取液（ SDS 2mMOL/L溶液） （3）氯仿：辛醇溶液 （4）无水乙醇（置冰箱中冷却） （5）H2SO4溶液 （6）二苯胺溶液溶液 （7）NAOH溶液 （8）AgNO3溶液 (9)钼酸胺－溶液 （10）Vc---氯化亚锡溶液
三．操作步骤
取鸡肝2.5克，用剪刀剪碎，置乳钵（或 匀浆器）中研磨5分钟，加匀浆液5ml，进一 步研碎，倾入离心管离心（3500r.p.m ╳10 ),弃上清（RNP部分），
实验五
动物肝脏DNA的提取和鉴定
(教材1A在细胞内多以核蛋白体形 式存在---DNP 、 RNP．
分离提取核酸时首先要破碎细胞去除蛋 白质和其他物资, 用0.14mol/L Nacl(含柠 檬酸钠)匀浆液溶解细胞中的RNA及其他物资, 离心，去上清,然后加入提取液（十二烷基硫 酸钠，SDS）溶液溶解DNA，然后加入氯仿 -辛醇，以去除其余核蛋白和杂蛋白．再离心 除去沉淀(杂蛋白)部分,收集上清部分(DNA).
▪ RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响较小，在 0.14mol/L氯化钠中溶解度较大。因此，在提取时，
▪ 常用此法分离这两种核蛋白。
将提取得到的DNA放在滤纸上,将液体吸干,将 其置于试管内,加入3毫升硫酸进行酸水解，进而分 三份，分别对其脱氧核糖、嘌呤碱、及磷酸进行 鉴定。
肝组织生化实验报告
一、实验目的1. 学习肝组织匀浆的制备方法。
2. 掌握核酸分离与组分鉴定的技术。
3. 了解DNA和RNA的组成区别及其鉴定方法。
4. 探讨防止核酸酶降解的方法。
二、实验原理肝组织是人体内重要的代谢器官，含有丰富的核酸。
核酸是生物体内携带遗传信息的物质，包括DNA和RNA。
DNA主要存在于细胞核中，而RNA主要存在于细胞质中。
本实验通过肝组织匀浆的制备，分离和鉴定DNA和RNA，并探讨防止核酸酶降解的方法。
三、实验材料与仪器1. 材料：新鲜小鼠肝组织、小牛胸腺细胞、柠檬酸钠、氯化钠、盐酸、硫酸、3，5-二羟甲苯、二苯胺等。
2. 仪器：研钵、剪刀、匀浆机、离心机、移液器、离心管、烧杯、酒精灯、显微镜等。
四、实验方法1. 肝组织匀浆的制备（1）取新鲜小鼠肝组织，用剪刀剪成小块。
（2）将肝组织块放入研钵中，加入适量生理盐水，研磨至匀浆状。
（3）将匀浆转移至离心管中，离心（4000r/min，10min）。
2. 核酸分离与组分鉴定（1）取上清液，加入等体积的95%乙醇，混匀，静置2h。
（2）沉淀用70%乙醇洗涤2次，晾干。
（3）将沉淀溶解于适量的水中，加入二苯胺试剂，观察颜色变化，鉴定DNA。
（4）取上清液，加入等体积的2mol/L盐酸，混匀，静置2h。
（5）沉淀用95%乙醇洗涤2次，晾干。
（6）将沉淀溶解于适量的水中，加入3，5-二羟甲苯试剂，观察颜色变化，鉴定RNA。
3. 防止核酸酶降解（1）选取核酸酶含量较低的材料，如小牛胸腺细胞等。
（2）在制备肝匀浆时，应尽量在冰冷条件下进行。
（3）加入含0.01mol/L柠檬酸钠的0.14mol/L氯化钠溶液，以抑制脱氧核糖核酸酶，防止DNA的分解。
五、实验结果与分析1. 肝组织匀浆制备成功，上清液中含有DNA和RNA。
2. 通过二苯胺试剂和3，5-二羟甲苯试剂，成功鉴定出DNA和RNA。
3. 在实验过程中，通过选取核酸酶含量较低的材料、在冰冷条件下进行实验以及加入抑制脱氧核糖核酸酶的溶液，有效防止了核酸酶降解。
实验四 肝脏DNA的提取 PPT课件
线粒体和叶绿体与其它细胞器分离出来，一般
采取在适当介质中的差速离心法分离。
d) DNA的提取 去除蛋白质：酚、氯仿 去除多糖、脂类：高盐 抑制DNase活性：去污剂，如SDS、CTAB DNA的沉淀：乙醇或异丙醇
e) DNA的纯化 有机溶剂抽提 柱层析法 梯度离心法 酶温和消化杂质等
4）溶液D 3 mol/L乙酸钠-0.001 mol/L EDTA-Na2。
5）5mol/L NaCl。 6）250g/L SDS。 7）氯仿：异丙醇=24：1（V/V）。 8）乙醇（70%、80%、95%、无水）。
2.器材 匀浆器或研钵研杆 移液枪 离心机 天平 恒温水浴箱 玻璃棒 解剖剪及镊子 50ml离心管等
DNA提取的几种方法：
a) 浓盐法 利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同， 将二者分离。 b) 阴离子去污剂法
由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引 力或配位键相结合，SDS或二甲苯酸钠等阴离 子去污剂能使蛋白质发生变性,从而破坏这种 价键，因此可以采用阴离子去污剂提取DNA。 此法可以直接从生物材料中提取DNA 。
从各种材料中提取DNA方法不同，分离提取的难易程度也不同。 对于低等生物。由于DNA 分子量较小，提取时易保持其结构完整
性。 细菌及高等动植物中，DNA 分子量较大，易被机械张力剪断。
b) 细胞的破碎 机械法 物理法 化学破碎方法 酶学破碎方法
c) 细胞器的分离 在提取细胞线粒体和叶绿体DNA时，必须首先把
c) 苯酚抽提法
苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降 解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联 结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯 酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。 离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含 DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇 沉淀DNA。 此法的特点是使提取的DNA保持天然状态。
猪肝中核酸的提取与鉴定[1]
![猪肝中核酸的提取与鉴定[1]](https://img.taocdn.com/s3/m/d261b6e8856a561252d36f42.png)
氨基奈酚磺酸溶液配制：取195ml的15%亚硫酸氢钠溶液(溶液必须透 明)加入0.5g提纯的氨基奈酚磺酸及20%亚硫酸钠溶液5ml。并在热水 浴中搅拌使固体溶解(如不能全部溶解，可再加20%亚硫酸钠溶液，每 次数滴，但加入量以lml为限度)。此为浓溶液。置冰箱可保存2-3周， 如颜色变黄时，须重新配制。临用前，将上述浓溶液以蒸馏水稀释10 倍。 3、3，5-二羟甲苯溶液取密度1.19的盐酸100ml，加入六水氯化铁 100mg及二羟甲苯100mg，混匀溶解后，置于棕色瓶中。此试剂宜 在临用前新配制。市售的3，5-二羟甲苯若不纯必须用苯重结晶一、 二次，并用活性碳脱色方可使用。 4．二苯胺试剂：取1g纯的二苯胺溶于100m1重蒸馏的冰乙酸中(或分析 纯冰乙酸)，加入2.75ml浓硫酸，摇匀。放在棕色瓶中保 存。此试剂需临用时配制。 5． 0.9%Nacl。 6． 20%三氯醋酸。 7． 95%乙醇。
（三）DNA与RNA成分的鉴定 1．磷酸的鉴定 取试管2支，按表操作
管试剂
氨基奈酚磺 酸
测定 对照
10滴 —
— 10滴
5滴 5滴
20滴 20滴
2．嘌呤碱的鉴定:取试管2艾，按表操作
管号
水解液
5%硫酸
浓氨水 数滴使呈碱性 数滴使呈碱性
5%AgNO3 10滴 10滴
测定 对照
20滴 —
猪肝中核酸的提取与鉴定
实验原理 实验试剂 实验步骤
实验原理
动物组织细胞中的核糖核酸(RNA)与脱氧核糖核酸 (DNA)大部分与蛋白质结合形成核蛋白。可用三氯醋酸沉淀 出核蛋白，并用95%乙醇加热除去附着在沉淀上的脂类 杂质。然后用10%氯化钠从核蛋白中分离出核酸(钠盐形 式)，此核酸钠盐，加入乙醇可以被沉淀析出。 析出的核酸(DNA与RNA)均由单核苷酸组成，在单核苷 酸中含有磷酸、有机碱(嘌呤与嘧啶)或戊糖(核糖、脱氧核 糖)。核酸用硫酸水解后，即可游离出这三类物质。用下述 方法可分别鉴定出这三类物质：
肝组织中核酸的分离和核酸组分的鉴定
肝组织中核酸的分离和核酸组分的鉴定[原理]动物肝组织中的核蛋白可用水提取，用酚破坏核酸与蛋白质之间的结合键，再用乙醚抽提除去蛋白质及其杂质，最后用乙醇沉淀核酸。
核酸（DNA 和RNA ）可被酸水解成磷酸、有机碱（嘌呤碱和嘧啶碱）以及戊糖（核糖和脱氧核糖）。
它们分别可用下列方法鉴定：1． 磷酸的鉴定： 磷酸能与钼酸试剂作用生成磷钼酸，后者在还原剂氨基萘酚磺酸钠的作用下还原成蓝色的钼蓝。
H 3PO 4+12H 2MoO 4 H3PO 4·12MoO 3·12H 2O磷酸钼酸 磷钼酸6H+H 3PO 4·12MoO 3·12H 2OH 3PO 4·6MoO 3·3MoO 5·12H 2O+3H 2O磷钼酸 钼蓝2．嘌呤碱的鉴定： 嘌呤碱能与苦味酸作用形成针状结晶。
3．核糖的鉴定： 核糖与强酸共热生成糠醛，后者与苔黑酚（3,5,-二羟甲苯，orcinol ）反应，缩合成绿色化合物。
4． 脱氧核糖的鉴定 脱氧核糖在强酸中加热可生成ω-羟基-γ-酮基戊醛，后者与二苯胺作用生成蓝色化合物。
还原剂 H 3糠醛 3,5-二羟甲苯 绿色化合物 + H HHO —C C —OH H —C —H C —C H 核糖 O +3H 2O 糠醛 H[试剂]（一）90%苯酚溶液。
（二）乙醚。
（三）95%乙醇。
（四）5%硫酸（五）钼酸试剂钼酸铵5g溶于100ml蒸馏水中，再加入浓硫酸15ml，冷却后加蒸馏水至1000ml。
冷处保存（一个月内稳定）。
（六）氨基萘酚磺酸钠溶液1,2,4-氨基萘酚磺酸钠0.5g溶于195ml 15%亚硫酸氢钠与5ml 20%亚硫酸钠溶液中，加塞振摇助溶。
贮存于棕色瓶中，冰箱保存（可用4周）用时取上清液。
（七）饱和苦味酸溶液苦味酸约1.3g溶于100ml蒸馏水中，静置过夜。
临用前取上清液。
（八）Bial试剂苔黑酚1.5g加入浓盐酸500ml中，再加10%氯化高铁20~30滴。
生化提取核酸实验报告
一、实验目的1. 学习并掌握动物组织中DNA和RNA的提取方法。
2. 了解核酸提取过程中的注意事项，提高实验操作的准确性和安全性。
3. 掌握核酸鉴定方法，分析实验结果。
二、实验原理核酸是生物体内重要的生物大分子，包括脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）。
DNA主要存在于细胞核中，负责遗传信息的存储和传递；RNA则参与蛋白质合成等生命活动。
本实验通过提取动物组织中的DNA和RNA，并对提取的核酸进行鉴定，以了解核酸的提取方法及其在生物学研究中的应用。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：动物组织（如肝组织、肌肉组织等）。
2. 试剂：SDS、蛋白酶K、RNA酶、氯仿、异戊醇、乙醇、DEPC、TE缓冲液、NaCl、NaOH、HCl、琼脂糖、电泳缓冲液、DNA marker、DNA/RNA电泳试剂盒等。
四、实验方法1. DNA提取（1）将动物组织样品加入适量的TE缓冲液，用匀浆器充分匀浆。
（2）加入10%的SDS和蛋白酶K，混匀，置于60℃水浴中孵育1小时，以降解蛋白质。
（3）加入氯仿和异戊醇，混匀，静置5分钟，使蛋白质变性并分层。
（4）取上层水相，加入等体积的95%乙醇，混匀，静置10分钟，使DNA沉淀。
（5）弃去乙醇，用DEPC处理的水溶解DNA沉淀，即为提取的DNA。
2. RNA提取（1）将动物组织样品加入适量的DEPC处理的水，用匀浆器充分匀浆。
（2）加入RNA酶和蛋白酶K，混匀，置于60℃水浴中孵育1小时，以降解蛋白质和RNA。
（3）加入氯仿和异戊醇，混匀，静置5分钟，使蛋白质变性并分层。
（4）取上层水相，加入等体积的95%乙醇，混匀，静置10分钟，使RNA沉淀。
（5）弃去乙醇，用DEPC处理的水溶解RNA沉淀，即为提取的RNA。
3. 核酸鉴定（1）DNA鉴定：将提取的DNA与DNA marker在同一琼脂糖凝胶上电泳，观察DNA 条带与marker条带的大小关系，判断DNA提取是否成功。
（2）RNA鉴定：将提取的RNA与RNA ladder在同一琼脂糖凝胶上电泳，观察RNA 条带与ladder条带的大小关系，判断RNA提取是否成功。
核酸提取鉴定实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的和要求1. 学习并掌握肝组织中DNA的提取原理和方法。
2. 熟悉DNA分离纯化的原理和技术。
3. 掌握DNA定量技术，评估提取DNA的浓度和纯度。
4. 通过实验验证DNA提取和鉴定方法的可行性。
二、实验基本原理肝组织中的DNA主要以核蛋白的形式存在，通过特定的化学和物理方法可以将其从细胞中分离出来。
实验中，我们采用氯化钠溶液和SDS等试剂来溶解和分离核蛋白，随后利用氯仿和异戊醇将蛋白质沉淀，最终通过冷乙醇沉淀DNA。
DNA的纯度可以通过紫外分光光度法进行检测，通过测定260nm和280nm处的吸光度比值（A260/A280）来评估DNA的纯度。
三、实验材料与试剂1. 新鲜肝组织样本2. 0.14mol/L氯化钠溶液3. 柠檬酸钠4. SDS5. 氯仿6. 异戊醇7. 冷乙醇8. 100%乙醇9. 无水乙醇10. 硫酸11. 紫外分光光度计12. 1.5mL离心管13. 离心机14. 移液器15. 研钵16. 玻璃棒四、实验器材与仪器1. 研钵2. 玻璃棒3. 移液器4. 离心机5. 紫外分光光度计6. 电子天平7. 恒温水浴锅五、操作方法和实验步骤1. 肝组织匀浆制备：将新鲜肝组织样本剪碎，用研钵和玻璃棒研磨成匀浆。
2. DNA提取：- 将肝匀浆加入0.14mol/L氯化钠溶液和柠檬酸钠，混匀后加入SDS，室温下放置10分钟。
- 加入氯仿和异戊醇，剧烈振荡，室温下放置10分钟。
- 12,000g离心10分钟，小心吸取上层水相。
- 向水相中加入2倍体积的无水乙醇，混匀后室温下放置10分钟。
- 12,000g离心10分钟，弃去上清液，用100%乙醇洗涤DNA沉淀。
- 12,000g离心5分钟，弃去上清液，空气干燥DNA沉淀。
- 将DNA沉淀溶解于适量TE缓冲液中。
3. DNA定量：- 使用紫外分光光度计测定DNA溶液在260nm和280nm处的吸光度。
- 计算A260/A280比值，评估DNA纯度。
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实验四 肝组织中核酸的提取与鉴定
【目的】
验证核酸的三大组成成分。
熟悉组织中核酸的提取与鉴定的基本操作方法。
【原理】
动物组织细胞中的核糖核酸(RNA)与脱氧核糖核酸(DNA)大部分与蛋白质结合而形成核蛋白。
被三氯醋酸沉淀的核蛋白,先用95%的乙醇加热去除附着在沉淀上的脂类杂质,再用1、7mol/L NaCl 溶液提取出核酸的钠盐,然后加入乙醇即可使核酸钠盐沉淀析出。
RNA 与DNA 均可被硫酸水解产生磷酸、含氮碱基(嘌呤与嘧啶)及戊糖(RNA 为核糖,DNA 为脱氧核糖)。
此三类物质分别可按照下述原理鉴定。
1、磷酸 磷酸与钼酸铵试剂作用生成黄色磷钼酸,磷钼酸中的钼在有还原剂(硫酸亚铁)存在时可被还原成蓝色的钼蓝。
根据此呈色反应即可鉴定磷酸的存在。
2、嘌呤碱 根据嘌呤碱能与硝酸银产生灰褐色的絮状嘌呤银化合物而鉴定。
3、戊糖 根据核糖经浓盐酸或浓硫酸作用则生成糠醛,后者能与3,5二羟甲苯缩合而形成绿色化合物而鉴定。
CHO C H C H C H 2OH
OH OH OH O
CHO
O
H CH 3
C
O
CH 3
O
C
H 3OH
-H 2O
核糖
3，5-二羟甲苯
糠醛
绿色化合物
脱氧核糖在浓酸中生成ω-羟基-γ-酮基戊醛,它与二苯胺作用生成蓝色化合物。
CHO C H C H C 2OH
H H O -H 2O
脱氧核糖
蓝色化合物
CHO C H C H C H CH 2OH
H OH OH ω-羟基-γ-酮基戊醛
【器材】
剪刀、镊子、玻棒、滤纸、试管、试管架、蒸发皿、匀浆器、离心机、沸水浴箱。
【试剂 1、生理盐水。
2、 0、12 mol/L三氯醋酸溶液。
3、 95% 乙醇。
4、 10% NaCl溶液
NaCl 10g溶于蒸馏水中,加至100ml。
5、 0、92 mol/L H2SO4
取浓H2SO4(比重1、84,含量98%)5ml加入蒸馏水中,加水至100ml 。
6、钼酸铵试剂
钼酸铵3g,溶于70ml蒸馏水中,逐渐加入浓 H2SO4 14ml ,冷却后再加至100ml,混匀备用。
7、硫酸亚铁试剂
硫酸亚铁10、6g,硫脲5g,加蒸馏水溶解并加水至500ml,冰箱内保存备用。
8、浓氨水。
9、 0、29mol/L AgNO3
取AgNO3 5g加蒸馏水溶解并稀释至100ml,于棕色瓶避光保存。
10、 3,5二羟甲苯试剂
取浓盐酸100ml,加入FeCl3·6H2O 100mg 及二羟甲苯100mg混匀溶解后,置于棕色瓶中。
临用前配制,冰箱保存。
(市售3,5二羟甲苯不能直接使用,必须用苯重结晶1～2次,并用活性碳脱色后方可使用)。
11、二苯胺试剂
取1g纯的二苯胺溶于100ml冰乙酸中,加入2、75ml浓硫酸,盛于棕色瓶中,临用前配制。
【操作】
1、核酸的提取与分离:
(1)将新鲜猪肝剪碎置于匀浆器中,加入等量的生理盐水,制成匀浆。
(2)将5ml肝匀浆置于离心管内,立即加入0、12mol/L三氯醋酸5ml,用玻棒搅匀,静置8分钟后离心。
(3)倾去上清液,加95% 乙醇5ml,用玻棒搅匀,再用带有长玻管的木塞塞紧离心管口,在水浴中煮沸2分钟,冷却后离心。
(4)将离心管倒置于滤纸上,使滤纸吸干乙醇。
沉淀中再加入10% NaCl溶液4ml,置于沸水浴中加热8分钟,并用玻棒不断搅拌,取出冷却后再离心。
(5)将上清液倾入另一离心管内,再离心一次,去除可能存在的微量残渣。
将上清液倒
入烧杯内。
(6)取等量的在水浴中冷却过的95% 乙醇逐滴加入小烧杯内,即可见白色沉淀逐渐析出。
静置10分钟后,将小烧杯中沉淀物移入离心管内离心,弃去上清液即得到核酸钠的白色沉淀。
2、核酸的水解
在含有核酸钠的离心管内加入0、92mol/L的H2SO4 4ml,用玻棒搅匀,再用带有长玻管的软木塞塞紧管口,在沸水浴中加热15分钟。
3、核酸组成成分的鉴定
(1)磷酸的鉴定:按下表操作。
表3-3 核酸中磷的鉴定
加入物(滴) 测定管对照管
核酸水解液5滴－
0、92mol/L H2SO4溶液－5滴
钼酸铵试剂3滴3滴
硫酸亚铁试剂10滴10滴
(2)嘌呤碱的鉴定:按下表操作。
表3-4 嘌呤碱的鉴定
加入物(滴) 测定管对照管
核酸水解液10滴－
0、92mol/L H2SO4溶液－10滴
浓氨水数滴(使呈碱性) 数滴(使呈碱性)
0、29mol/L AgNO35滴5滴
观察加入AgNO3后有何变化。
静置15分钟后,再比较两管的沉淀、
(3)核糖的鉴定:按下表操作。
表3-5 核糖的鉴定
加入物(滴) 测定管对照管
核酸水解液4滴－
0、92mol/L H2SO4溶液－4滴
3,5-二羟甲基试剂6滴6滴
混匀,放沸水浴中加热10分钟,观察两管颜色有何不同。
(4)脱氧核糖的鉴定:按下表操作。
表3-6 脱氧核糖的鉴定
加入物(滴) 测定管对照管
核酸水解液10滴－
0、92mol/L H2SO4溶液－10滴
二苯胺试剂15滴15滴
混匀,放沸水浴中加热10分钟,观察两管有何不同。
【结果及分析】
观察各测定管颜色及沉淀的生成情况,并与对照管相比有何不同,并解释其原理。
【思考题】
1.RNA与DNA的组成成分有何异同？
2.DNA二级结构有何特点？。