油脂中磷脂的测定(精)

油脂中磷脂的测定。

GB 5537—85
本标准适用于商品植物油脂中磷脂的测定。

油脂中磷脂即由甘油、脂肪酸、磷酸和氨基醇等所组成的复杂的化合物。

1钼蓝比色法
1.1仪器和用具
1.1.1瓷坩埚或石英坩埚；
1.1.2分光光度计或带塞的50 ml比色管；
1.1.3移液管：5、10 ml；
1.1.4电炉、高温炉；
1.1.5容量瓶：100、500、1000 ml；
1.1.6表面皿、烧杯、量筒；
1.1.7恒温水浴锅；
1.1.8漏斗、坩埚钳、试剂瓶等。

1.2试剂
1.2.150％氢氧化钾溶液；
1.2.2盐酸、硫酸、氧化锌、滤纸；
1.2.30.015％硫酸联氨溶液；
1.2.4 2.5％钼酸钠稀硫酸溶液：量取140 ml硫酸注入300 ml水中，摇匀，冷却至室温，加入12.5 g钼酸钠，溶解后加水至500 ml，摇匀，静置24 h备用。

1.2.5磷标准溶液：称取无水的磷酸二氢钾0.4391 g溶于1000 ml水中，作为1
号液，含磷0.1 mg/ml，吸取1号液10 ml，加水稀释至100 ml，含磷0.01 mg/ml，作为2号液，比色用。

1.3操作方法
1.3.1绘制标准曲线：取5只50 ml比色管，编成1，2，4，6，8五个号码，按号码顺序分别注入磷标准2号液1，2，4，6，8 ml，再按顺序分别加水9，8，6，
4，2 ml。

接着向5只管内各加0.015％硫酸联氨溶液8.0ml；各加钼酸钠稀硫酸溶液2.0 ml，加塞、摇匀。

去塞，将5只管置于正在沸腾的水浴中加热10 min，取出冷却至室温，用水稀释至50 ml，充分摇匀，经10 min后，用分光光度计在波长650 nm 下，用3 cm液槽，用水调整零点，分别测定消化值。

以消化值为纵坐标，以磷量（0.01、0.02、0.04、0.06、0.08 mg）为横坐标绘制标准曲线。

1.3.2制备被测液：用坩埚称取试样约10 g（准确至0.001 g），加氧化锌0.5 g，先在电炉上加热炭化，然后送入550～600℃的高温炉中灼烧至灰化（白色），灼烧时间约2 h，取出坩埚冷却至室温，用热盐酸
（1∶1）10 ml溶解灰分，并加热微沸5 min，将溶解液过滤注入100 ml容量瓶中，用热水冲洗坩埚和滤纸，待滤液冷却至室温后，用50％氢氧化钾溶液中和至出现混浊，缓慢滴加盐酸使氧化锌沉淀全部溶解后，再滴2滴，最后用水稀释至刻度，摇匀。

1.3.3比色：用移液管吸取被测液10 ml注入50 ml比色管中，加入0.015％硫酸联氨8.0 ml，加
2.0 ml钼酸钠稀硫酸溶液，加塞，摇匀。

去塞，将比色管置于正在沸腾的水浴中加热10 min，取出冷却至室温，用水稀释至50 ml，充分摇匀，经10 min后，用分光光度计在波长650 nm下，用3 cm液槽，用水调整零点，测定消光值。

1.4结果计算
根据被测液的消光值，从标准曲线查得磷量（P），按公式（1）计算磷脂含量：
…………………………………………
（1）
式中：
标准曲线查得的磷量，mg；
P──
V2──样品灰化后稀释的体积，ml；
V1──比色时所取的被测液体积，ml；
26.31──每毫克磷相当于磷脂的毫克数；
W──试样重量，g。

双试验结果允许差不超过0.04％，求其平均数，即为测定结果。

测定结果取小数点后第二位。

2重量法
2.1仪器和用具
2.1.1玻璃漏斗、漏斗架；
2.1.2烧杯：100 ml；
2.1.3锥形瓶、滤纸等。

2.2试剂
丙酮。

2.3操作方法
取混匀的样品约100 ml，加热约90℃时进行过滤。

用烧杯称取试样25 g，加热至80℃，加水2～2.5ml，充分搅拌使之水化，在室温下静置过夜，或进行离心沉淀，倾出上层清液，用已知恒重的滤纸（或用抽气装置抽滤）进行过滤，待滤液全部滤出后，用冷的丙酮把杯内残留的沉淀冲洗入滤纸中，继续用丙酮洗涤滤纸和沉淀，洗至无油迹为止。

待滤纸和沉淀上的丙酮挥尽后，送入105℃烘箱中烘至恒重。

2.4结果计算
重量法测定磷脂含量按公式（2）计算：
…………………………………………
（2）
式中：
W1──
沉淀物重量，g；
W──试样重量，g。

双试验结果允许差不超过0.04％，求其平均数，即为测定结果。

测定结果取小数点后第二位。