穿心莲提取总黄酮

实验：穿心莲提取总黄酮

1.实验目的：

通过提取实验，熟悉基本实验操作技巧，了解相关实验室仪器使用方法，并且学会运用标准曲线计算含量。

国内外对穿心莲的黄酮类物质的研究还相当的缺乏。黄酮类有效成分在治疗冠心病、老痴呆、脑血栓、神经系统疾病和消除自由基、抑菌、抗癌等方面有显著效果, 无副作用, 并以此开发出多种药品和保健食品。近年来, 超声技术应用于提取植物中的生物碱、苷类、生物活性物质、动物组织浆的毒质等研究已有报道, 表明具有能耗低、效率高、不破坏有效成分的特点。研究表明, 利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等, 可加速植物材料中的有效成分进入溶剂,

从而增加有效成分的提取率, 缩短提取时间, 同时还可避免高温对提取成分的影响。

2.实验原理：

（1）.总黄酮可以溶于乙醇之中，利用减压蒸馏将乙醇沸点降低，而后得到总黄酮提取物质。

（2）.利用超声技术可将总黄酮更加高效的提取出来，不仅节约了时间成本，而且还避免了高温对提取成分的影响。

3.实验仪器：

布氏漏斗，KQ-300DE型数控超声波清洗器，紫外分光光度仪，旋转蒸发仪，分析天平（万分之一），5%乙醇，60%乙醇，5%亚硝酸钠溶液，10%硝酸铝溶液，4%氢氧化钠溶液，穿心莲粉末。

4.实验步骤：

（1）取穿心莲粉末，精密称量3g，放于锥形瓶中。

（2）配置95%乙醇：量取100ml无水乙醇导入250ml烧杯中，再想烧杯中加入蒸馏水5ml。量取配制乙醇95ml倒入100ml的容量瓶中，并且加水定容至100ml。

（3）量取40ml95%乙醇倒入装有样品的锥形瓶中。

（4）将锥形瓶放于超声清洗器中，并且用铁架台固定好，控制功率在70W，温度15摄氏度，提取30min。

（5）用布氏漏斗抽滤，收集滤液。

（6）将滤渣转移到锥形瓶中，加入40ml 95%乙醇，摇匀后放入超声清洗器中提取30min 后再次用布氏漏斗抽滤。

（7）合并两次滤液，将滤液转移至100ml 圆底烧瓶中，与旋转蒸发仪连接安装。

旋转蒸发仪使用方法：安装好旋转蒸发仪的各部件，使得仪器稳固，装上接受瓶，

用卡口卡牢，打开冷凝水。

1．在烧瓶中加入待蒸液体，体积不能超过2/3。装好烧瓶，用卡口卡牢。

2．打开水泵电源，抽真空，待烧瓶吸住后，用升降控制开关将烧瓶置于水浴内。

3．打开旋转蒸发仪的电源，慢慢往右旋，调整至稳定的转速。

4．加热水浴，根据烧瓶内液体的沸点设定加热温度。

5．在设定温度下旋转蒸发。

6．蒸完后用升降控制开关使烧瓶离开水浴，关闭转速旋钮，停止旋转。打开真空活塞，使体系通大气，取下烧瓶，关闭水泵。

（8）减压蒸馏并回收乙醇，蒸发最后剩2-3ml 滤液左右，停止减压蒸馏，将滤液转移至100ml 容量瓶中。用60%乙醇稀释至刻度，得到样品液。

60%乙醇配制方法：

量取60ml无水乙醇，倒入100ml容量瓶中，再加40ml蒸馏水，最后用蒸馏水定容至100ml。

由于用此种方法提取总黄酮后空白试验所加试剂量未知，所以又采用了另一种方法提取总黄酮。

1.精密称量穿心莲粉末0.6g，加60ml60%乙醇于100ml烧瓶中。

2.将烧瓶放于水浴锅中，70摄氏度回流60min

3.用布氏漏斗抽滤，收集滤液。溶液显淡绿色。

4.配制5%亚硝酸钠溶液：精密量取0.5g亚硝酸钠，加水定容至10ml。

5.配制10%硝酸铝溶液，精密量取1g硝酸铝，加水定容至10ml。

6.配制4%氢氧化钠溶液，精密量取4g氢氧化钠，加水定容至100ml。溶液此时现淡红

色

7.精密量取1ml样品倒入10ml容量瓶中，加60%乙醇定容至两毫升，精密量取5%亚硝

酸钠0.5ml，并静置6min，精密量取10%硝酸铝0.5ml并同样静置6min，然后精密量取4%q氢氧化钠4.0ml，再用60%乙醇定容15min。

8.制作空白实验。

9.用紫外分光光度仪测量样品的吸光度值。

10 标准曲线绘制：准确吸取0， 0.4， 0.8， 1.2， 1.6，2.0 ml芦丁标准溶液，放

入10毫升容量瓶内（写明标记），分别加入2.0、1.6、1.2、0.8、0.4、0 ml的60%乙醇溶液；再加入5%亚硝酸钠溶液0.5ml摇匀，放置6min；加入10%硝酸铝溶液0.5ml，放置6min后；加入4%氢氧化钠溶液4.0ml，加60%乙醇定容，摇匀后，放置15min；

（扫描找到最大吸收）在510nm处测定吸光度。用0.0ml作为空白，用芦丁含量的浓度作为横坐标，纵坐标作为一定浓度下所对应的吸光度，作标准曲线。

5 .实验结论：

经过测量，样品的吸光度为0.036，标准曲线方程为A=-0.0311+13.5184C ,经过计算得出总黄酮的含量为0.00496mg/ml。

6. 实验总结：

1.做实验之前要对论文相关的资料进行复查，一个项目往往要查阅多个论文，通

过比较分析找到比较合适的方案，然后在开始做实验，此次实验，第一次找的

论文里关于总黄酮提取实验吸光度测定的空白实验试剂添加量没有给出，自己

把样品制备好后，才发现了问题，只好又找了一篇论文，但是这样着实浪费了

不少的时间。

2.使用布氏漏斗的时候要注意先拔下真空管，再断电源，防止倒吸现象的发生。

3.配制溶液的时候，要注意不要浪费，配制的量要略大于实验用量即可，不要配

的过多，导致最后没用完浪费。

4.在称量固体试剂的时候，尽量使用硫酸纸，而不是用烧杯，分析天平量程一般

在0-100g，经常超过量程会使天平的精准度下降。

5.做定吸光度实验，样品一定要是做之前新配的。

6.旋转蒸发仪使用的时候要注意，在结束蒸发的时候，先开真空阀，然后再关闭

布氏漏斗。

7.水浴锅在使用的时候，要注意应该先调试好恒定温度，然后再开始加热。

2012.7.17

工大