“无菌操作技术实践与发酵技术实践”专题复习指导

“无菌操作技术实践与发酵技术实践”专题复习指导
一、考情分析
“无菌发酵技术”考点有微生物的分离和培养、微生物数量的测定、选择培养基的利用、利用微生物发酵来生产人类需要的的产物以及微生物的其他方面的引用。微生物的培养、培养基对微生物的选择利用、利用微生物发酵来生产特定的产物是高考热门。近年来不少地方的试题都多有涉及。
倒置(盖在下面)，放在37℃恒温培养箱中培养12～24 h后，可看到划线的末端出现不连续的单个菌落
2．纯化大肠杆菌
（1）微生物接种的方法最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。
（2）平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作。
（3）稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。
二、复习策略
复习本部分知识一定要专注主干知识，不能一味追求知识的全面而深挖每一个知识点，本专题的主干知识主要集中在微生物的培养、传统发酵技术的应用即果酒和果醋的制作、酶技术，复习每个小专题时建议加强知识的比较,注重选修知识与必修课本的结合处,如酵母菌的代谢类型与生产生活的联系点,微生物的培养过程中代谢类型与培养基成分的关系等等。
3．与传统发酵有关的几类微生物比较
酵母菌
醋酸菌
毛霉
乳酸菌
生物学分类
真核生物
原核生物
真核生物
原核生物
生活方式
异养兼性
厌氧
异养需氧
异养需氧
异养厌氧
适宜温度
20℃左右
30℃～35℃
15℃～18℃
室温
主要生殖
方式
适宜条件下
出芽生殖
二分裂
生殖
孢子生殖
二分裂
生殖
主要用途
酿酒、发面
酿醋
制作腐乳
制作酸
奶、泡菜
特别提醒：
（3.3～3.5）
酸性环境
（5.4～6.3）
发酵时间
10～12 d
7～8 d
（二）注重知识的纵向延伸，深化考点
1.大肠杆菌的培养和分离
(1)特性：革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌。
(2)用途：是基因工程技术中被广泛采用的工具。
(3)实验中用LB液体培养基扩大培养大肠杆菌。
(4)分离(实验部分)
培养基灭菌
（1）二分裂不是无丝分裂。
（2）酵母菌酿酒时先通气，后隔绝空气，原理是：①在有氧条件下：C6H12O6+ 6O2+6H2O 6CO2+12H2O+能量，生活状态：大量繁殖② 无氧条件下：C6H12O6 2C2H5OH + 2CO2+能量，生活状态：进行发酵，产生大量酒精
（3）由于醋酸菌和乳酸菌属于原核生物，因此在利用这两类微生物时，其环境中一定不要加入青霉素等抗生素。
4．果酒和果醋的制作原理和发酵条件的比较
比较
果酒制作
果醋制作
制作
原理
酵母菌先在有氧条件下大量繁殖，再在无氧条件下进行酒精发酵
醋酸菌在氧气、糖源充足时，将糖分解成醋酸；当缺少糖源时，将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸
最适发
酵温度
18℃～25℃
30℃～35℃Hale Waihona Puke Baidu
对氧的
需求
前期：需氧
后期：不需氧
需充足氧
pH
酸性环境
“发酵技术实践”专题内容琐碎分散，细知识多，与必修教材有着紧密的联系，复习时侧重于实验的回顾与复习，要特别注意相关实验的设计流程、操作要求、结果分析和方法改进等方面的内容。
本专题是选修部分的重点，也是高考的热点。从命题角度看主要是以微生物的应用为背景材料进行实验设计或结合其他专题知识进行考查，考查的形式有选择、简答、实验设计等。
1．微生物培养中灭菌及划线方法等基本技术的方法。
2．微生物计数、分离与培养的实际问题。
3．植物组织培养实验中关于灭菌、消毒、培养基配制等问题的考查。
发酵技术实践
1．制作果酒、果醋、腐乳的基本原理和方法以及发酵条件。
2．了解果酒、果醋、腐乳过程中与微生物相关的知识。
3．果酒、果醋制作的实验装置安装及注意问题。
1．相关的实验装置、药品的作用。
2．实验原理、现象、结果和实验中应注意的问题。
3．探究相关微生物生活、繁殖的条件。
三、要点梳理，考点剖析
（一）列表比较，揭示知识间的异同
1．两种培养基的比较
种类
制备方法
原理
用途
举例
选择培养基
培养基中加入某些化学物质
依据某些微生物及某些物质的抗性而设计
从众多微生物中分离所需的微生物
↓
倒平板
↓
接种
↓
划线分离
↓
培养观察
50 mL LB液体培养基和50 mL LB固体培养基及培养皿高压蒸汽灭菌
将固体培养基倒入4个灭菌后的培养皿中，水平放置，使之形成平面
在装有液体培养基的三角瓶中接种大肠杆菌，培养12 h
用接种环在接种有大肠杆菌的三角瓶中蘸菌液一次，在固体培养基的平板上连续划线，盖好培养皿培养皿
加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌
鉴别培养基
培养基中加入某种试剂或化学药品
依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中的特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计
鉴别不同种类的微生物
伊红-美蓝培养基可以鉴别大肠肝菌
2．“消毒”与“灭菌”的比较
提醒：消毒仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子），而灭菌杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。酒精消毒时，75%的酒精效果最好，原因是：浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜，乙醇分子不能进入其中；浓度过低，杀菌力减弱。
（4）用平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的是：使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落，以便于纯化菌种。
（5）平板划线法操作步骤：
①将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红。
②在火焰旁冷却接种环，并打开棉塞。
③将试管口通过火焰。
④将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液。
⑤将试管通过火焰，并塞上棉塞。
“微生物的培养与利用”是江苏高考前几年没有作要求的，而被列为20XX年高考考查之列，因此在今后的高考试题中必然会有体现，复习时也应加以重视。
三、高频考点及实验要求列举
高频考点
实验要求
无菌操作技术实践
1．培养基的种类、制备原则和无菌操作技术。
2．分离纯化微生物的研究思路和方法。
3．微生物的计数方法。
4．植物组织培养的过程、原理和实践应用。
⑥左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养皿。
⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连。
⑧将平板倒置放入培养箱中培养。