实验5 细菌的芽孢染色法

❖制片 ❖染色 ❖脱色 ❖复染 ❖镜检
改良的Schaeffer-Fulton氏染色法
❖制备菌悬液 ❖染色 ❖涂片固定 ❖脱色 ❖复染 ❖镜检
1、滴生理盐水 生理盐水
滴半滴生理 盐水在载玻 片中央
制片
2、涂片 挑取少量菌苔
3、干燥 室温自然晾干
与生理盐水混匀 均匀涂布
或电吹风吹干
染色
1、滴孔雀绿染液 5%孔雀绿染液
实验五、细菌的芽孢染色法
实验的目的要求
❖学习并掌握芽孢染色法 ❖进一步了解芽孢杆菌的形态特征
细菌芽孢的基本构造
孢外壁 芽孢衣 皮层 芽孢壁 芽孢质膜 芽孢质 芽孢核区
芽胞具有多层厚而 致密的胞膜，由内向 外依次为核心、内膜、 芽胞壁、皮质、外膜、 芽胞壳和芽胞外衣 .
细菌芽孢的基本特性
❖形成芽孢需要一定的外界条件，这些条件 因菌种而异。炭疽芽孢杆菌在有氧(O2)条 件下才能形成芽孢，而破伤风芽孢杆菌则 在无氧条件下形成芽孢。通常细菌在营养 不足时形成芽胞，但苏云金芽孢杆菌是例 外。
2min
不要直接冲菌膜
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
1、干燥 室温自然晾干
或电吹风吹干
镜检
2、镜检 显微镜操作
油镜使用
或吸水纸吸干
制备菌悬液
1、滴生理盐水 生理盐水
2、制备菌悬液 挑取2-3环菌苔
在EP管中滴2 滴生理盐水
与生理盐水混匀 均匀
1、滴加孔雀绿染液 5%孔雀绿染液
染色
2、加热染色
在EP管中滴2-3 滴孔雀绿染液
❖细菌能否形成芽孢以及芽孢的形状、芽 孢在芽孢囊内的位置、芽孢囊是否膨大 等特征是鉴定细菌的依据之一。
细菌芽孢染色原理
❖细菌的芽孢具有厚而致密的壁不易着色， 若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不 着色(芽孢呈无色透明状)。
❖芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色而一 旦染上后又难以脱色这一特点而设计的。
滴加数滴孔 雀绿染液在 菌膜上
2、加热染色
用木夹夹住载 玻片一端，在 微火上加热
沸腾：菌体或芽孢囊破裂； 加热不够：芽孢难以着色。
至冒蒸汽开始计 时，维持5min
注意补充染液， 以免涂片干涸
脱色
待玻片冷却后，水洗脱色
不要直接冲菌膜
复染
1、滴番红水溶液 0.5%番红水溶液
2、水洗
滴加数滴 番红染液 在菌膜上， 染色
沸水浴加热 15-20min
1、滴菌悬液 经孔雀绿染 色细菌悬液
滴半滴菌悬液 在载玻片中央
涂片固定
2、涂片
用接种环 均匀涂布
3、干燥
4、固定
室温自然晾干 或电吹风吹干
通过酒精灯 火焰3次固定
❖ 染色剂：
➢ 5%孔雀绿水溶液 ➢ 0.5%番红水溶液
❖ 仪器或其他用具：
➢ Eppendorf管 ➢ Eppendorf管架 ➢ 载玻片 ➢ 显微镜 ➢ 电磁炉 ➢ 搪瓷烧杯
方法
❖Schaeffer-Fulton氏染色法(P78) ❖改良的Schaeffer-Fulton氏染色法
Schaeffer-Fulton氏染色法
细菌芽孢的基本特性
❖芽孢对恶劣环境条件有很强的抵抗能力， 尤其耐高温。有的芽胞可耐100℃沸水煮 沸数小时。在一定条件下，芽孢保持活力 数年至数十年之久。高温灭菌的判断标准 就是细菌的芽孢是否被杀灭。
细菌芽孢的基本特性
❖芽孢在适宜条件下，营养物如葡萄糖、 乳酸和水分，会发芽形成菌体，但细菌 的数量并未增加，所以芽胞不是一种繁 殖方式。
细菌芽孢染色原理
❖所有的芽孢染色法都基于同一个原则：除 了用着色力强的染料外，还需要加热，以 促进芽孢着色，再使菌体脱色，而芽孢上 的染料则难以渗出，故仍保留原有的颜色， 然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌 体和芽孢呈现出不同的颜色，因而能更明 显地衬托出芽孢，便于观察。
材料
❖ 菌种:
➢ 苏云金芽孢杆菌 ➢ 蜡样芽孢杆菌
芽胞抵抗力强的原因
❖1.芽胞含水量少，蛋白质受热后不易变性； ❖2.芽胞具有多层致密的厚膜，理化因素不
易透入； ❖3.芽胞中含有一种特有的化学组分吡啶二
羧酸（DPA），DPA与钙结合生成的钙盐 能提高芽胞中各种酶的热稳定性。
细菌芽孢染色的意义
❖芽孢又称内生孢子，是某些细菌生长到 一定阶段在菌体内形成的休眠体，通常 呈圆形或椭圆形。