抗震颤麻痹(抗巴金森氏病)药

抗震颤麻痹(抗巴金森氏病)药

一、动物选择

动物要健康、成年，饲养环境安静、无干扰。

二、模型及方法

(一) 大白鼠单侧黑质纹状体通路毁损引起旋转的模型

选200克上下大鼠，腹腔注射去甲丙脒嗪(Desmethylimipramine，DMI)30mg ／kg，ip，后施全麻(戊巴比妥钠45mg／kg，ip，或乌拉坦1.1g／kg，ip，等)，固定于立体定位仪。按标准座标于单侧纹状体黑质部位注射新配、冷却保存的6—羟基多巴胺(6—OH—DA)生理盐水溶液(2mg／ml，内含抗坏血酸0.2mg／m1)进行定量、定容、定时微量注射(如8ug／4ul，2ul／min)，留针3分钟左右；对侧脑区进行无药的同溶质对照注射。术后封闭伤口。动物饲养二周左右可进行首次分组给药治疗实验，全部实验结束后，大鼠脑制成标本及组织切片，观察入针部位及黑质—纹状体神经元损毁情况。

(二) 药物性肌肉震颤实验

1．槟榔碱震颤成年小白鼠，槟榔碱25mg／kg，ip或SC。一般给药后3—5分钟出现震颤，持续约30分钟。

2．氧合震颤素震颤方法同上。腹腔给药，剂量0.15mg／kg，ip。震颤于给药后几分钟发生，持续约30分钟。(震颤素为本药同系物，给药剂量可为20mg ／kg，ip)，症状出现较晚，持续时间2—3小时)。

3．去氢骆驼蓬碱(Harmine)震颤腹腔给药10—40mg／kg，迅速发生肌震颤，持续20—30分钟。100mg／kg以上可引起痉挛死亡。(同系物骆驼蓬碱亦可用)。

(三) 豚鼠胆碱性左旋法模型

选300g左右豚鼠，局麻(如0.2％盐酸可卡因)下分离双侧颈总动脉。从头端结扎右颈总动脉，然后将金属插管取向心方向固定于右颈总动脉腔内(左侧安可调夹备用)，缝合切口。受试药可口服或用其它方法给药。一定时间间隔后由右颈总动脉插管给毒扁豆碱(约0.3mg／kg，1ml左右)，给药时间须严格控制，勿多于半分钟。给药时夹紧左颈总动脉以保证尽量多的药物经右椎动脉刺激右侧纹体黑质胆碱能神经元，豚鼠于药后半分钟内出现头左偏，体左旋等运动，持续约5

分钟。

三、观察指标

(一) 旋转行为模型大白鼠单侧纹状体黑质DOPA通路毁损模型

于术后2—3周，大鼠分组进行旋转运动比较观察(分对照组及不同剂量的药物组，每组10只左右动物)，观察时间尽可能集中或同时进行。旋转运动可在专用自动球形旋转仪中进行，亦可在单个普通笼中进行。旋转活动要定量或分级。优势旋转方向数目要减掉反向的运动数，然后按时间加和求均值及其标准误。诱发运动的药物要作用机制明确公认。合并给药时间合理，要有三个以上不同剂量组，以便观察量—效关系，对结果进行统计比较及回归分析。

(二) 震颤实验观察指标震颤活动是传统行为活动实验的一种，对进一步阐明治疗药物原理等有意义。可用各种类型震动笼对全身肌肉震颤进行定性及定量分析，可对局部肌肉进行烟鼓记纹或将肌肉震动经电磁换能而由多导记录仪记录，亦可用肌电图等作记录。总之，应尽量使用仪器定量记录比较，若确无条件，亦可对肌肉震颤进行肉眼分级的定量比较。以上述一种实验方法为基础，观察活动的大小变化，时间—效应，剂量—效应变化，并在统计基础上进行药理及药效学说明。

(三) 豚鼠胆碱性左旋模型观察指标通过不同剂量治疗组对照组动物间在给毒扁豆碱后一定时间内左旋运动等指标的差异，经统计分析解释药物的活性。

四、药效学评价

(一) 推荐大鼠旋转动物模型为主要必做的实验，大动物旋转模型仅供有条件时使用。

(二) 肌肉震颤治疗实验至少选用两种药物性肌肉震颤模型进行观察，以便对药理性质进行比较分析。豚鼠左旋与肌肉震颤治疗实验两者任选一种即可，不必都作。

(三) 治疗实验必须设对照组及不同剂量组，每组动物5—10只。同时或同日实验观察，观察指标定量或半定量，最后数据用统计学分析进行说明。治疗药物疗效剂量要与毒性剂量比较，并与已知有效药比较。

（四）使用诱发或抑制旋转运动的药物时，其药理作用机制需明确、公认(如苯丙胺—amphetamine约1—5mg／kg，去水吗啡apomorphine 0.1—5mg／kg，可

卡因cocaine 5—40mg／kg，ip等)；引起肌肉震颤或进行治疗比较的药物，其药理性质需明确、公认。

(五) 化学性DOPA神经元毁损程度评价对旋转模型所用大、小鼠的纹状体—黑质部位神经元、神经元递质损伤程度应进行组织学及生化学测定；损伤侧及健侧DOPA或其它有关活性物质的含量与活性要经统计学处理有显著差别。

五、注意事项

(一) 动物实验治疗药物的给药途径与临床用药主要途径符合。

(二) 实验药物溶解度要保证良好。若用助溶或赋形剂时，要与对照组保持一致。

(三) 旋转模型动物可重复给药，其给药间隔视所用药物性质而定。实验治疗药物可近期(如一天)重复给药，观察动物反应性有否改变。