谷胱甘肽 S-转移酶(glutathione S-transferase ,GST)活性测定试剂盒使用说明
谷胱甘肽s转移酶分类
谷胱甘肽s转移酶分类
谷胱甘肽S转移酶（glutathione S-transferase，GST）是一类广泛存在于生物体内的酶，它在细胞内起着重要的生物学作用。
GST根据氨基酸序列的相似性和功能特点，可被分为多个类别，主要包括以下几类：
1. α-类GST，包括GSTA1、GSTA2、GSTA3和GSTA4等亚型，主要在肝脏、肾脏和肠道中表达，参与对抗毒素和药物代谢。
2. μ-类GST，包括GSTM1、GSTM2、GSTM3和GSTM4等亚型，主要在肝脏中表达，参与对抗癌症药物和致癌物质的代谢。
3. π-类GST，包括GSTP1和GSTP2等亚型，广泛分布在多种组织中，参与对抗毒素和药物的代谢，对抗氧化应激和细胞凋亡等生物学过程。
4. θ-类GST，包括GSTT1和GSTT2等亚型，主要在肝脏和肾脏中表达，参与对抗毒素和药物的代谢。
5. ω-类GST，包括GSTO1和GSTO2等亚型，主要在肝脏、肠
道和肾脏中表达，参与对抗氧化应激和神经退行性疾病的发生。
除了上述主要的GST类别外，还有一些其他类别的GST，它们在细胞内扮演着重要的角色，如参与对抗氧化应激、解毒和药物代谢等生物学过程。
总的来说，GST的分类是根据其氨基酸序列的相似性和功能特点进行的，不同类别的GST在细胞内具有不同的生物学功能和代谢途径。
谷胱甘肽转移酶作用机制
谷胱甘肽转移酶（Glutathione S-transferase, GST）是一类重要的酶，在细胞代谢和解毒过程中发挥着重要的作用。
本文将从GST的定义、结构、分类、作用机制和应用等方面进行介绍。
一、GST的定义和结构GST是一种广泛存在于生物体内的酶，它可以将谷胱甘肽（Glutathione,GSH）与各种亲电性物质进行结合，从而发挥解毒作用。
GST的分子量约为25-30kDa，通常由两个不同的亚基组成。
其中一个亚基是催化亚基（catalyticsubunit），主要负责催化底物与GSH的结合反应；另一个亚基是结构亚基（structural subunit），主要负责保持酶的稳定性和催化亚基的活性。
GST的结构与功能密切相关。
它包含一个N端的信号肽序列、一个N端的结构域、一个C端的催化域和一个C端的结构域。
其中，催化域是GST最为重要的结构域，它包含了一个催化三肽（catalytic triad），包括谷氨酸（Glu）、半胱氨酸（Cys）和天冬氨酸（Asp），这些氨基酸残基在催化反应中发挥着关键的作用。
二、GST的分类GST是一类广泛存在于生物体内的酶，它在不同的物种和组织中具有不同的表达模式和功能。
根据氨基酸序列和催化机制的不同，GST可以分为多个家族和亚家族，如下表所示：家族 亚家族 物种Alpha GSTA1-GSTA5 人、鼠、猪、牛等Mu GSTM1-GSTM5 人、鼠、猪、牛等Pi GSTP1-GSTP4 人、鼠、猪、牛等Theta GSTT1-GSTT3 人、鼠、猪、牛等Sigma GSTS1-GSTS4 人、鼠、猪、牛等Omega GSTO1-GSTO2 人、鼠、猪、牛等Zeta GSTZ1-GSTZ3 人、鼠、猪、牛等Kappa GSTK1-GSTK3 人、鼠、猪、牛等三、GST的作用机制GST的主要作用是将亲电性物质与GSH结合，从而形成无毒的代谢产物，以保护细胞免受有害物质的损害。
gst蛋白纯化
GST蛋白纯化简介谷胱甘肽S-转移酶（glutathione S-transferase，GST）是一种常用的亲和标签，用于在分子生物学研究中用于蛋白质纯化和蛋白质亲和结合实验。
GST蛋白被广泛应用于蛋白质结构和功能研究、酶学研究、蛋白质互作研究等领域。
本文将介绍一种常见的方法来纯化GST蛋白，该方法主要包括以下步骤：细胞裂解、亲和层析、洗脱和纯化。
方法细胞裂解首先需要将GST蛋白表达在适当的宿主中，例如大肠杆菌。
在细胞达到适当的生长阶段后，使用合适的方法将细胞裂解，使得目标蛋白释放到溶液中。
一种常用的裂解方法是超声波裂解，通过超声波震荡将细胞破碎。
亲和层析经过细胞裂解后，将得到的细胞裂解液通过亲和层析柱。
亲和层析柱通常使用含有还原型谷胱甘肽（glutathione，GSH）结合物质的树脂，例如glutathione agarose beads。
这种树脂与GST标签结合，使得GST标签的融合蛋白能够特异性地结合于柱子上。
通过洗脱液去除非特异结合蛋白，将目标蛋白纯化。
洗脱洗脱过程是将结合于柱子上的目标蛋白从固定相洗净。
一般采用含有高浓度还原型谷胱甘肽的洗脱液，例如50 mM GSH。
洗脱液中的还原型谷胱甘肽与柱子上的结合物质竞争与GST标签结合，以此达到将GST蛋白洗脱下来。
纯化经过洗脱后，蛋白溶液中的GST蛋白含量较高。
为了进一步提高纯度，可以通过对溶液进行浓缩、去除低分子量杂质、调整溶液pH值等方法进行纯化。
常用的纯化方法包括丙酮沉淀法、离子交换柱层析法等。
注意事项•在实验过程中应严格操作，避免任何可能导致目标蛋白污染的情况发生。
•选择合适的表达宿主，不同的宿主可能会对GST蛋白的表达量和可溶性产生影响。
•在细胞裂解过程中，避免样品受到温度、剧烈振荡等因素的影响。
•注意亲和层析柱的操作方法，避免破损或污染。
•洗脱过程中注意还原型谷胱甘肽浓度和洗脱液的pH 值。
结论GST蛋白纯化是一种常见的蛋白质纯化方法，通过亲和层析技术可以实现对GST蛋白的高效纯化。
gst蛋白纯化原理
gst蛋白纯化原理GST蛋白纯化是一种常用的蛋白质纯化技术，其原理是利用谷胱甘肽-S-转移酶（Glutathione-S-transferase，GST）标签与谷胱甘肽的特异性结合来进行纯化。
GST标签可与谷胱甘肽通过二硫键共价亲和，然后通过GSH交换洗脱的原理进行蛋白纯化。
具体步骤如下：1.构建GST标签融合表达载体：将GST基因的编码序列与目标蛋白的编码序列融合，构建GST-目标蛋白融合表达载体。
这样，在细胞中表达该融合蛋白时，GST标签会紧密结合在目标蛋白的C端或N 端。
2.转染和蛋白表达：将构建好的GST-目标蛋白融合表达载体转染到合适的宿主细胞（如大肠杆菌），使其产生大量的融合蛋白。
3.细胞裂解和融合蛋白的亲和层析：收获融合蛋白的细胞，通过细胞裂解等方法破坏细胞膜，释放融合蛋白。
然后，将溶解的细胞提取物加载到含有谷胱甘肽固定在琼脂糖（或其他载体）上的亲和层析柱中。
GST标签可以特异性地与琼脂糖上的谷胱甘肽结合。
4.洗脱：通过洗脱缓冲液来去除非特异性结合的蛋白质，保留GST-目标蛋白复合物。
洗脱通常使用还原剂（如谷胱甘肽）、低pH 或其他方式进行。
5.目标蛋白的解离：将GST标签从目标蛋白上解离，得到纯化的目标蛋白。
这可以通过特定的酶切位点（如蛋白酶TEV切割位点）和相应的酶进行酶切，使GST和目标蛋白分别释放。
6.纯化分析：对纯化的目标蛋白进行分析，如SDS-PAGE凝胶电泳、Western blot等方法，确认目标蛋白的纯度和完整性。
在进行GST蛋白纯化时，对于融合表达载体的设计和构建、宿主细胞的选择、裂解条件和亲和层析条件的优化等方面都需要合理考虑，以获得高质量的纯化目标蛋白。
mgst3基因
mgst3基因MGST3基因是一种编码谷胱甘肽S-转移酶（glutathione S-transferase）的基因。
谷胱甘肽S-转移酶是一类重要的酶，参与细胞内氧化还原过程，具有清除细胞内自由基和有害物质的功能。
本文将从MGST3基因的结构与功能、表达调控以及与疾病的关联等方面进行讨论。
MGST3基因位于人类基因组的染色体1p13.3区域，由4个外显子和3个内含子组成。
该基因编码的谷胱甘肽S-转移酶主要存在于细胞的内质网和线粒体膜上。
该酶通过转移谷胱甘肽（glutathione）等底物上的亲电性化合物的电荷，起到解毒和抗氧化的作用。
谷胱甘肽S-转移酶家族中的成员具有不同的底物特异性，MGST3基因编码的酶主要参与对环境毒物的解毒，如有机磷农药、致癌物和氧化应激物等。
MGST3基因的表达受到多种因素的调控。
研究发现，MGST3基因的表达受到细胞外信号分子的调控，例如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素-1β（IL-1β）等可显著上调MGST3的表达水平。
此外，转录因子也参与对MGST3基因的调控，如核转录因子NF-E2相关因子2（Nrf2）能够结合MGST3基因的启动子区域，促进其转录活性。
此外，DNA甲基化修饰也可能影响MGST3基因的表达水平。
这些调控因素的变化可能与MGST3基因在疾病中的作用有关。
MGST3基因与一些疾病的关联也得到了研究的关注。
研究发现，MGST3基因的多态性与肺癌、结直肠癌和乳腺癌等多种肿瘤的发生风险相关。
例如，某些MGST3基因多态性突变型与肺癌的易感性相关，可能与其对环境致癌物的解毒能力下降有关。
此外，MGST3基因的表达水平在某些疾病中也发生改变，如哮喘、阿尔茨海默病和帕金森病等。
这些研究结果表明MGST3基因可能在疾病的发生和发展中发挥重要作用。
MGST3基因编码的谷胱甘肽S-转移酶在细胞内起到重要的解毒和抗氧化作用，参与细胞内氧化还原过程。
该基因的结构与功能、表达调控以及与疾病的关联等方面的研究为我们深入了解该基因的生物学功能和潜在的临床应用奠定了基础。
gst标签蛋白诱导温度
gst标签蛋白诱导温度GST标签蛋白诱导温度引言：GST标签蛋白是一种常用的蛋白质标签，用于在分子生物学研究中标记和纯化目标蛋白。
在GST标签蛋白的表达和纯化过程中，温度是一个重要的因素。
本文将探讨GST标签蛋白诱导温度的选择和影响。
一、GST标签蛋白的基本原理GST标签蛋白是由谷胱甘肽S转移酶（glutathione S-transferase, GST）与目标蛋白之间的多肽序列连接而成。
GST标签蛋白具有一定的亲和力，可以与谷胱甘肽结合，并通过谷胱甘肽琥珀酸盐琼脂糖（glutathione agarose）亲和层析柱进行纯化。
二、GST标签蛋白的诱导温度选择GST标签蛋白的表达和纯化通常在大肠杆菌中进行。
在选择GST标签蛋白的诱导温度时，需要考虑到多个因素，包括目标蛋白的稳定性、溶解度、转化效率和纯化效果等。
1. 目标蛋白的稳定性：目标蛋白的稳定性是选择GST标签蛋白诱导温度的重要参考因素之一。
如果目标蛋白在高温下易于变性失活，那么应选择较低的温度进行诱导，以保持目标蛋白的活性。
2. 目标蛋白的溶解度：目标蛋白的溶解度也是选择GST标签蛋白诱导温度的考虑因素之一。
一些目标蛋白在高温下溶解度较低，可能会出现不溶性聚集体的形成。
因此，应根据目标蛋白的溶解度特性选择适当的诱导温度。
3. 转化效率和纯化效果：GST标签蛋白的转化效率和纯化效果也受到诱导温度的影响。
一般来说，较高的温度可以促进蛋白的表达，但也可能导致蛋白的部分变性和聚集。
因此，需要在转化效率和纯化效果之间进行权衡，选择适当的诱导温度。
三、GST标签蛋白诱导温度的影响GST标签蛋白诱导温度的选择直接影响到蛋白的表达水平和纯化效果。
适当的诱导温度可以提高目标蛋白的表达量，但过高的温度可能导致蛋白失活或变性。
此外，在高温下，GST标签蛋白容易发生聚集，从而影响纯化效果。
1. 表达水平：适当的诱导温度可以提高GST标签蛋白的表达水平。
一般来说，较高的温度可以促进蛋白的合成和折叠，从而增加表达水平。
gst谷胱甘肽转移酶蛋白质结构
gst谷胱甘肽转移酶蛋白质结构下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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谷胱甘肽转移酶在植物抵抗非生物胁迫方面的角色
谷胱甘肽转移酶在植物抵抗非生物胁迫方面的角色谷胱甘肽转移酶（glutathione S-transferase，GST）是一类广泛存在于植物、动物和微生物中的酶，其具有催化谷胱甘肽（glutathione，GSH）与各种亲电性物质结合的能力。
因此，GST可参与植物的许多生理和代谢过程，例如调节氧化还原状态、解毒代谢产物、维持免疫稳态等。
在植物抵御非生物胁迫方面，GST显现出重要的作用。
一方面，GST参与了植物对多种化学物质的解毒作用。
许多农药、重金属等环境污染物对植物的生长和发育具有严重的危害，而GST可以通过将这些有害物质与谷胱甘肽还原成无毒物质进行解毒。
例如，在植物受到除草剂禾草灵（2,4-dichlorophenoxyacetic acid，2,4-D）的胁迫时，GST的活性会显著增强，进而降低禾草灵的毒性，保护植物免受其伤害。
另一方面，GST也介导了植物的抗氧化应答。
氧化胁迫是影响植物生长和发育的一个重要因素，它会导致许多有害氧自由基的释放和累积，对细胞膜、蛋白质和核酸等生物大分子造成损伤。
然而，GST可以与氧自由基结合，形成稳定的产物，并且能通过调节各种氧化还原酶的活性，减轻氧化胁迫带来的不良影响。
例如，在盐胁迫的情况下，GST可以与过氧化氢进行结合，减轻ROS的毒性，维持细胞内氧化还原平衡。
除此之外，GST也参与了植物的信号转导和细胞壁合成等过程，总体上显现出了对植物逆境适应的重要作用。
值得注意的是，不同的植物在不同的环境中所表现出的GST特异性和功能也存在差异，这对植物抵御非生物胁迫的策略选择和调整具有一定的指导意义。
总之，谷胱甘肽转移酶在植物抵御非生物胁迫方面发挥了重要的调节作用，它可以通过解毒作用和抗氧化应答等机制，降低环境污染物和氧化自由基对植物的损伤，保护植物的生长和发育。
在今后的研究中，我们可以进一步探究GST在植物逆境生存中的作用机制和生物学意义。
谷胱甘肽s-转移酶的功能
谷胱甘肽s-转移酶的功能
谷胱甘肽s-转移酶（glutathione S-transferase，GST）是一类重要的酶，在生物体内起着多种重要的功能。
该酶主要作用在细胞内，参与细胞代谢过程中的许多关键反应，具有显著的生物学意义。
在生物体内发挥着重要的作用，包括抗氧化、解毒、细胞保护等多种作用。
首先，在抗氧化方面，谷胱甘肽s-转移酶可以通过转移底物中的谷胱甘肽，帮助清除自由基和有害代谢产物，从而减少氧化应激对细胞的伤害。
自由基是细胞内的危险分子，会导致细胞损伤和生物体老化，而谷胱甘肽
s-转移酶的存在能够有效地减少氧化损伤，维护细胞健康。
其次，在解毒方面，谷胱甘肽s-转移酶可以通过结合有毒底物，将其转化为水溶性代谢产物，从而使其更容易被排泄。
这种解毒作用对维持生物体内环境的稳定性至关重要，有助于预防毒素对生物体的损害。
此外，谷胱甘肽s-转移酶还参与了多种重要的生物化学反应，如脂质代谢、氨基酸代谢等。
在脂质代谢中，谷胱甘肽s-转移酶可以通过调节脂
质代谢途径，维持细胞内脂质平衡，有助于维持细胞健康。
在氨基酸代谢中，谷胱甘肽s-转移酶参与氨基酸的代谢和转运，有助于碱基的合成和蛋白质
的合成，是维持细胞正常功能的关键酶类。
让我们总结一下本文的重点，我们可以发现，谷胱甘肽s-转移酶在生物体内的功能多样且重要，与细胞代谢和生物体内环境的平衡密切相关。
通
过对其功能的深入研究，可以更好地了解细胞内代谢的调控机制，为预防和治疗多种疾病提供理论基础。
未来的研究还需深入探讨谷胱甘肽s-转移酶在细胞信号转导、疾病发生发展等方面的作用机制，以期揭示其更多的生物学功能及临床应用潜力。
家蚕谷胱甘肽s-转移酶（gsts）的组织分布、变化规律及酶学性质研究与应用
江苏科技大学硕士学位论文家蚕谷胱甘肽S-转移酶（GSTs）的组织分布、变化规律及酶学性质研究姓名：***申请学位级别：硕士专业：特种经济动物饲养指导教师：***20080501摘要谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferases,GSTs)是生物体内一类催化还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH) 与各种亲电子化合物结合的代谢酶。
这类酶广泛存在于动物、植物、昆虫、酵母、霉菌和各种细菌中,是一类在内、外源化合物的生物转化、药物代谢及保护生物体免受过氧化作用损害极为重要的多功能蛋白质。
该酶能使有害的亲电子物质与体内还原型谷胱甘肽(GSH)结合形成可溶性的物质，从肾脏或皮肤中排出，从而起到排毒的功效；同时该酶参与转运体内重要的脂类化合物，为谷胱甘肽的硫原子提供电子的亲核反应。
因此关于GSTs的研究一直受到关注。
随着科技与医学的不断发展，人们发现GSTs可解除化学诱变剂、促癌剂、脂质及过氧化物等内、外源性化合物的毒性，保护正常细胞免受致癌物和促癌因素的影响，在抗诱变和抗肿瘤中起到重要作用；另外，GSTs的同工酶还含有谷胱甘肽过氧化物酶的活性，能清除脂类自由基，在抗脂质过氧化反应中起着重要作用。
在植物中，GSTs也有类似的功能，可作为植物化学物质的结合与转运蛋白，也可催化体内GSH与各种内、外源性化合物结合：如可催化GSH与异源性物质如除草剂的结合反应而达到解除异源物质对植物体的毒害作用。
在昆虫中，GSTs是一类与昆虫抗性相关的代谢酶。
家蚕是一种重要的经济昆虫，一直被作为生产生丝及遗传研究的模式生物；同时，又是通过原核表达系统生产重组蛋白的生物反应器。
世界上约70％的农业害虫属于鳞翅目昆虫，通过对鳞翅目昆虫的模式生物——家蚕的研究获得解毒方面的数据也可运用到农业害虫上。
尽管家蚕在经济上有重要的应用价值，但关于家蚕GSTs的性质、功能等方面的研究却鲜有报道。
本文研究了家蚕体内GSTs的组织分布、发育期变化规律；对家蚕GSTs进行了分离纯化，并对纯化后家蚕GSTs的性质与功能进行了研究与探讨。
gstm3蛋白 -回复
gstm3蛋白-回复GSTM3（谷胱甘肽S转移酶M3）是一种重要的酶类蛋白质，它在细胞内起着保护细胞免受氧化应激损伤的关键作用。
本文将一步一步回答关于GSTM3蛋白的相关问题，从其结构和功能，到其在疾病治疗中的应用，以及对社会的重要意义。
一、GSTM3的结构与功能GSTM3是一种谷胱甘肽S转移酶家族（glutathione S-transferases, GSTs）的成员。
这个家族是一类广泛存在于真核生物中的蛋白质，其共享的特征是能够将谷胱甘肽（glutathione, GSH）与合成物或应激损伤产生的代谢产物进行偶联反应，从而促进它们的排出。
GSTM3是GSTM家族中的一种亚型，其在人体中被广泛表达，特别是在肝脏、肾脏和肺部等器官中表达量较高。
该蛋白质具有双官能作用，既能催化Glutathione转移反应，也能催化肯定或否定的反应，例如肯定的反应，将芳香性化合物的活性代谢产物（如多环芳香类化合物）与GSH结合，保护细胞免受这些有害物质的毒性影响；而在否定的反应中，将合成物转移到GSH上，参与细胞内的生物合成过程。
二、GSTM3在疾病治疗中的应用由于GSTM3在细胞中的重要作用，近年来研究人员开始探索其在疾病治疗中的应用潜力。
以下是几个领域的例子：1.癌症治疗：癌细胞往往具有更高的氧化应激程度，因此利用GSTM3的保护作用可以增强癌细胞对化疗药物的耐受性。
研究表明，通过增强GSTM3在肿瘤细胞中的表达水平，可以减少化疗药物对正常细胞的毒性作用，从而提高癌症治疗的效果。
2.神经退行性疾病治疗：GSTM3在中枢神经系统具有重要的保护作用，它可以清除氧化应激产生的自由基，减轻神经细胞的损伤。
一些研究发现，通过提高GSTM3的表达水平，可以减轻神经退行性疾病如阿尔茨海默病和帕金森病的发展。
3.毒性物质解毒：GSTM3参与多种有害物质的代谢，包括一些环境污染物和药物。
因此，通过增强或调节GSTM3的表达，可以加速这些物质的排出，减轻其对生物体的毒性作用。
植物谷胱甘肽巯基转移酶
植物谷胱甘肽巯基转移酶英文回答：Glutathione S-transferase (GST) is an important enzyme found in plants. Its main function is to detoxify harmful compounds by transferring the glutathione molecule to these compounds, making them more water-soluble and easier to eliminate from the plant's system. This process is known as conjugation.GSTs play a crucial role in plant defense against various stresses, such as oxidative stress caused by reactive oxygen species (ROS), heavy metal toxicity, and exposure to herbicides and insecticides. By conjugating glutathione to these harmful compounds, GSTs help in their neutralization and removal from the plant cells.For example, when a plant is exposed to oxidative stress due to high levels of ROS, GSTs are upregulated to protect the plant from damage. They bind to the ROSmolecules and transfer a glutathione molecule to them, converting them into less harmful substances. This helps in maintaining the redox balance within the plant cells and prevents oxidative damage.GSTs also play a role in the metabolism of secondary metabolites in plants. These secondary metabolites, such as flavonoids and anthocyanins, have various functions in plants, including UV protection, attraction of pollinators, and defense against herbivores and pathogens. GSTs can conjugate glutathione to these secondary metabolites, modifying their chemical structure and enhancing their stability and biological activity.Furthermore, GSTs are involved in the detoxification of herbicides and insecticides in plants. When these chemicals enter the plant system, GSTs catalyze their conjugation with glutathione, making them less toxic and facilitating their elimination from the plant cells. This detoxification mechanism helps in reducing the harmful effects of these chemicals on plant growth and development.In summary, plant GSTs are essential enzymes involved in detoxification processes and defense against various stresses. They play a vital role in maintaining plant health and survival. By conjugating glutathione to harmful compounds, GSTs help in their neutralization and elimination from the plant system. They also contribute to the metabolism of secondary metabolites and the detoxification of herbicides and insecticides.中文回答：植物谷胱甘肽巯基转移酶（GST）是植物中的一种重要酶。
谷胱甘肽S-转移酶(GST)检测
谷胱甘肽S-转移酶（GST）检测
谷胱甘肽S-转移酶（Glutathione S-transferase, GST）是一类广泛分布于生物体的多功能解毒酶系，也是昆虫及螨类对有机磷类杀虫剂产生抗生的重要因素，主要存在于细胞质内，参与许多内外源有毒物质的代谢，并可转运一些重要的亲脂性化合物，具有修复氧化破坏的大分子如DNA、蛋白质等的功能。
GSTs催化各种化学物质及其代谢产物与谷胱甘肽S-转移酶的巯基共价结合，使亲电化合物变为亲水物质，易于从胆汁或尿液中排泄，达到将体内各种潜在或具备毒性的物质降解并排出体外的目的。
因此，谷胱甘肽S-转移酶在保护细胞以抵御氧化侵害及氧化压力中起重要的作用。
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1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
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项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）
2. 相关参数（中英文）
3. 图片
4. 原始数据
5. 谷胱甘肽S-转移酶活性信息。
谷胱甘肽S转移酶(GSTP1)在前列腺癌中的表达及其临床意义
谷胱甘肽S转移酶（GSTP1）在前列腺癌中的表达及其临床意义摘要】目的：探讨谷胱甘肽S转移酶（GSTP1）在前列腺癌组织中的表达及其临床意义。
方法：采用免疫组织化学方法检测40例前列腺癌组织及42例前列腺增生组织中GSTP1的表达，分析GSTP1的表达与 Gleason分级之间的关系。
结果：GSTP1在前列腺增生组织中为高表达，40例前列腺癌组织中GSTP1表达率在高、中、低分化癌中分别为58.3%、20.0%、16.7%，呈下降趋势，2组GSTP1表达差异有统计学意义（P＜0.01）。
结论： GSTP1表达缺失和4-HNE的高表达，可能在前列腺癌的进展中起重要作用。
【关键词】前列腺肿瘤；谷胱甘肽S转移酶；四羟基壬烯；免疫组织化学【中图分类号】R737.25 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2017）08-0218-02前列腺癌在我国的发病率呈显著上升趋势，其中部分前列腺癌患者逐渐产生激素耐受而转为去势抵抗型前列腺癌。
对于去势抵抗型前列腺癌的发生机制目前尚未明了。
谷胱甘肽S转移酶（glutathione S -transferases，GSTs）为还原4-HNE、调控其细胞内水平的主要酶[1]。
本研究通过比较前列腺癌患者、前列腺增生患者前列腺癌组织中GSTP1的表达情况，来初步评价其在前列腺癌发生机制中的作用及临床意义。
1.资料与方法1.1 一般资料取自我院2013年10月至2016年2月收治的前列腺癌患者40例，其中前列腺癌切除标本15例，经尿道电切标本6例，穿刺活检组织标本19例。
年龄61～86岁，平均年龄72岁。
病理分级：根据Gleason评分标准分为高分化腺癌12例（Gleason评分2～4分），中分化腺癌10例（Gleason评分5-7分），低分化腺癌18例（Gleason评分8～10分）；42例同期手术切除的前列腺增生患者标本作为对照，年龄63～81岁，平均年龄69岁。
谷胱甘肽转硫酶 作业
谷胱甘肽转硫酶的制备及动力学研究摘要：谷胱甘肽转硫酶(Glutathione S-transferases)简称GSTs，广泛存在于动物和人体的各种组织，哺乳动物肝脏中含量最高约占肝可溶性蛋白的10%。
GST 是机体内一组具有重要解毒作用的同工酶家族，均为由两个亚基组成的二聚体相对分子质量为45 000—49 000各同工酶的等电点不同多为碱性同工酶。
GST 参与芳香环氧化物、过氧化物和卤化物的解毒作用，GST催化这些带有亲电中心的疏水化合物与还原型谷胱甘肽GSH的亲核基团。
本实验采用亲和层析法制备谷胱甘肽转硫酶，并测定该酶活力,米氏常数和最大反应速度并用考马斯亮蓝法测定蛋白质含量，计算比活力。
关键词：GSTs，亲和层析，酶活力，米氏常数，最大反应速度，比活力一、前言1.1 谷胱甘肽转硫酶简介谷胱甘肽转硫酶（Glutathione S-transferases）简称GSTs，广泛存在于动物和人体的各种组织，哺乳动物肝脏中含量约占肝可溶性蛋白的10%。
GST是机体内一组具有重要解毒作用的同工酶家族，多为碱性同工酶，其解毒功能主要有两方面，第一，GST参与芳香环氧化物、过氧化物和卤化物的解毒作用，GST催化这些带有亲电中心的疏水化合物与还原型谷胱甘肽GSH的亲核基团GS反应中和它们的亲电部位使产物水溶性增加，经过一系列代谢过程，最后产物为巯基尿酸，被排出体外，从而达到解毒目的。
第二，GST还能共价或非共价地与非底物配基以及多种疏水化合物结合，具有结合蛋白的解毒功能。
1.2 亲和层析原理亲和层析的方法是根据具有亲和力的生物分子间可逆地结合和解离的原理建立和发展起来的。
将一对能可逆结合和解离生物分子的一方作为配基，与具有大孔径、亲水性的固相载体相偶联，制成专一的亲和吸附剂，当被分离物随着流动相经过亲和吸附剂时，亲和吸附剂上的配基就有选择地吸附待分离物质，通过解吸附使待分离物质得以纯化。
亲和层析法分离生物大分子示意图：1.3 测定Km 和V的原理Km和最大反应速度V是酶的特征常数，不同酶的Km和V不同，受底物、pH、温度、离子强度等因素的影响。
医学检验·检查项目：谷胱甘肽S转移酶_课件模板
医学检验·各论：谷胱甘肽S转移酶 >>>
相关症状： 胃纳差症状、下肢肿胀和乏力、乏力、纳 差、消化不良。
医学检验·各论：谷胱甘肽S转移酶 >>>
相关疾病： 丁型病毒性肝炎、乙肝、丙型病毒性肝炎、 戊型病毒性肝炎、新生儿肝炎、甲型肝炎、 病毒性肝炎、妊娠合并病毒性肝炎。
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临床意义： 显升高，多数为正常人的5～8倍。急性重 症肝炎病人的GST有时升高至正常值的数 十倍，具有预测严重肝坏死发生的价值。
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正常值： 酶活性法，血清GST＜21U/L。
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相关检查：
医学检验·各论 谷胱甘肽S转移酶
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简介：
谷胱甘肽S移换酶(glutathione Stransferase，GST)：GST是一组与肝脏解 毒功能有关的酶。该酶主要存在于肝脏内， 微量存在于肾、小肠、睾丸、卵巢等组织 中。由于肝细胞质内富含GST，当肝细胞 损害时，酶迅速释放入血，导致血清GST 活性升高。
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重症肝炎和慢性肝炎时，GST升高者显著 多于ALT升高者，提示GST具有较好的特异 性与灵敏性，诊断急性肝损害的灵敏性与 ALT相近，诊断慢性肝损害的灵敏性优于 ALT，同时检测GST与ALT能明显提高肝损 害的诊断率。重症肝炎病人，血清CST明
谷胱甘肽S_转移酶综述
谷胱甘肽 S-转移酶综述
张 飚 1，李 永清 2*，高 轩 1 （1．河北农业大学动物科技学院，河北 保定 071000；2．北京市农林科学院畜牧兽医研究所， 北京 100089）
【摘 要】谷胱甘肽 S-转移酶(glutathioneS-transferases，GSTs)是由多个基因编码、具有多种功能的超基因家族酶，
通常，GSTs 催化 GSH 与亲电子物质结合形成 硫醇尿 酸，经肾脏排出 体外。其亦 可作为转 运 蛋 白 转运亲脂化合物，如胆红素、胆酸、类固醇激素和不 同的外 源性化合物。其通过酶促和 非酶促反 应 ，解 除化学诱变剂、促癌剂以及脂质和 DNA 氢过氧化 物的毒性，保护正常细胞免受致癌和促癌因素的影 响，在抗诱变及抗肿瘤中起重要作用[6] 。
6 GSTs 与寄生虫的关系
血吸虫生活史各期中以虫卵所致的损害最为 严重，虫卵沉着于肝、肺等组织，并释放可溶性虫卵 抗原(SEA)，刺激各种淋巴因子的大量产生，引起机 体Ⅳ型 变态反应。形成虫卵肉芽肿 、门静脉 高 压 等 一系列病理反应，对机体造成损害。血吸虫 GSTs 蛋白作为疫苗除可诱导较强的免疫保护外，还可有 效减少成虫数量和产卵数，一些复合型的疫苗蛋白 如 Sm14-3-3 或 Sj14-3-3 与 GST 组成融合蛋白可激 发机体 23%～ 32%的补 体介导的细胞毒作用 ， ［14，15］ 调节细胞因子的分泌，使致炎因子的分泌减少而使 IL-10 和 IgG1 升高，从而减轻Ⅳ型变态反应 [16] ，使 得虫卵肉芽肿的病理损害程度有所减轻。
ZHANG Biao,LI Yong-qing,GAO Xuan (1.College of Animal Science and Technology Hebei Agricrltural University. Baoding Hebei 071000;2.Animal Science and veterinary research institute Agriculture and forestry academy of science. Beijing 100089)
GST的种属来源、分子量及氨基酸序列
GST的种属来源、分⼦量及氨基酸序列GST全称：Glutathione S-transferase（⾕胱⽢肽S-转移酶）来源物种：Schistosoma japonicum （⽇本吸⾎⾍）分⼦量： 26 000（单体） 58 500（⼆体）Km (glutathione)： 0.43±0.07 mM等电点（pI）： 5.0以上信息请参考：GE GST HandbookGST的氨基酸序列MSPILGYWKIKGLVQPTRLLLEYLEEKYEEHLYERDEGDKWRNKKFELGLEFPNLPYYIDGDVKLTQSMAIIRYIADKHNMLGGCPKERAEISMLEGAVLDIRYGVSRIAYSKDFETLKVDFLSKLPEMLKMFEDRLCHK TYLNGDHVTHPDFMLYDALDVVLYMDPMCLDAFPKLVCFKKRIEAIPQIDKYLKSSKYIAWPLQGWQATFGGGDHPPKSDLEVLFQGPLGSPEFPGRLERPH附：GST的三维结构（pdb ID：1M99）单体双体以下是来⾃维基百科的介绍：Genetic engineers have used glutathione S-transferase to create the so-called 'GST gene fusion system'. Here, GST is used to purify and detect proteins of interest. In a GST gene fusion system, the GST sequence is incorporated into an expression vector alongside the gene sequence encoding the protein of interest. Induction of protein expression from the vector's promoter results in expression of a fusion protein - the protein of interest fused to the GST protein. This GST-fusion protein can then be purified from cells via its high affinity for glutathione.Fusion proteins offer an important biological assay for direct protein-to-protein interactions. For instance, to demonstrate that caveolin (a membrane protein) binds to eNOS (a catalytic protein) a 'GST-caveolin' fusion protein would be generated. Assay beads, coated with the tripeptide glutathione, strongly bind the GST fusion protein (GST-caveolin, in this example). It is noted that, if cavelin binds eNOS, then GST-caveolin will also bind eNOS, and this eNOS will therefore be present on assay beads.GST is commonly used to create fusion proteins. The tag has the size of 220 amino acids, which, compared to other tags like the myc- or the FLAG-tag, is quite big. It is fused to the N-terminus of a protein. However, many commercially-available sources of GST-tagged plasmids include a thrombin domain for cleavage of the GST tag during protein purification.A GST-tag is often used to separate and purify proteins that contain the GST-fusion. GST-fusion proteins can be produced in Escherichia coli, as recombinant proteins. The GST part binds its substrate, glutathione. Agarose beads can be coated with glutathione, and such glutathione-Agarose beads bind GST-proteins. These beads are then washed, to remove contaminating bacterial proteins. Adding free glutathione to beads that bind purified GST-proteins will release the GST-protein in solution.GST系列⽇志：GST的种属来源、分⼦量等性质GST柱材料的处理⽅法（重⽣）冷泉港 protocol——GST pull-downGE GST融合蛋⽩的纯化protocolGST柱材料的参数（GE Glutathione-Sepharose beads性质介绍）。
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谷胱甘肽S-转移酶（glutathione S-transferase，GST）活性测定试剂盒使用说明货号：SN101
规格：50管/48样
产品简介：
谷胱甘肽S-转硫酶（GST）是一种具有多种生理功能的蛋白质家族，主要存在于细胞质内。
GST是体内解毒酶系统的重要组成部分，主要催化各种化学物质及其代谢产物与谷胱甘肽巯基的共价结合，使亲电化合物变为亲水物质，易于从胆汁或尿液中排泄，达到将体内各种潜在或具备毒性的物质降解并排出体外的目的。
因此，GST在保护细胞免受亲电子化合物的损伤中发挥着重要的生物学功能。
此外，因为GST具有GSH-Px活性，亦称为non-SeGSH-Px，具有修复氧化破坏的大分子如DNA、蛋白质等的功能。
GST催化GSH与CDNB结合，其结合产物的光吸收峰波长为340nm，通过测定340nm波长处吸光度上升速率，即可计算出GST活性。
试验中所需的仪器和试剂：
紫外-可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1ml石英比色皿、双蒸水
产品内容：
试剂一：试剂一×1支，用前充分溶解于100ml双蒸水中，4℃保存3个月
试剂二：粉剂二×1支；稀释液二×1管，用前将稀释液二加入粉剂二中充分溶解后加双蒸水至 5.0ml，4℃保存3个月
试剂三：粉剂三×1支，4℃保存3个月，临用前加试剂一 5.0ml充分溶解，临用前配制。
操作步骤：
一、样品测定的准备：
称约0.1g组织，加入1ml试剂一，冰上充分研磨，10000rpm4℃离心10min，取上清(如上清不清澈，再离心3min)。
二、GST测定操作
1、混合试剂配制：将试剂二与试剂一按1：8混合
2、试剂三放在25℃预温
3、分光光度计调到340nm处，设定时间为5min，用双蒸水调零
4、取0.1ml样品与0.9ml混合液混合，于25℃预温5min，再加入试剂三0.1ml，迅速混匀，于340nm处测定5min内吸光值的变化,第0s的吸光值记为A1，第300s的吸光值记为A2
5、空白管测定为操作4中以0.1ml试剂一代替0.1ml样品液
酶活计算：
一、血液GST活性计算
1、GST活力单位定义：在25℃下，每ml血液每分钟催化1μmol/L CDNB与GSH结合的GST酶量为U。
2、计算公式：
GST（U/ml）=ΔA340/min×〔106/(ε·d)〕×（V总/V样）=ΔA/min×106/(9.6×103×1)〕×1.1/0.1=ΔA340/min×1145.83
△A340=△A测定管-△A空白管，△A测定管与△A空白管均等于（A2-A1）/5，即每分钟吸光值变化3mol/L•cm
ε：产物在340nm处摩尔吸光系数为9.6×103mol/L•cm
106：摩尔分子换算成微摩尔分子
d：比色杯光径（cm）
V总：反应总体积（ml）
V样：所用样品体积（ml）
二、组织GST活性计算
1、GST活力单位定义：在25℃下，每毫克蛋白每分钟催化1μmol/L CDNB与GSH结合的GST酶量为1U。
2、计算公式：
GST（U/mg）=△A340/min×[106/(ε•d)]×(V总/V样)÷Cpr=△A340/min×106/(9.6×103×1)×1.1/0.1÷Cpr=△A340/min×1145.83÷Cpr
△A340=△A测定管-△A空白管，△A测定管与△A空白管均等于（A2-A1）/5，即每分钟吸光值变化
ε：产物在340nm处摩尔吸光系数为9.6×103mol/L•cm
106：摩尔分子换算成微摩尔分子
d：比色杯光径（cm）
V总：反应总体积（ml）
V样：所用样品体积（ml）
Cpr：蛋白浓度（mg/ml）
注意事项：
a)样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力
b)本法测定GST活性的线性范围可达76U/L，测定前先用1～2个样做预实验，如5min 内反应不成线性，须对样品做相应稀释，稀释时用样品提取液稀释，计算结果乘以稀释倍数。
c)测定反映的温度对测定结果有影响，请控制在25℃
不同测定材料中GST酶液提取的注意事项
哺乳动物溶血液的配制：
①取肝素抗凝全血(人)20μL，以蒸馏水稀释至1mL，配成1：49的溶血液；取肝素抗凝全血(鼠)10μL加蒸馏水至1mL，配成1：99的溶血液。
②充分混匀，放置5分钟直至使玻璃管中的溶血液对光呈完全透明状，方可进行检测。
③已配好的溶血液中酶活力只能保持45-60分钟，天冷时可延迟至120分钟。
如果当天来不及测定则以抗凝全血冰箱（4-8℃）保存，2-3天内酶活力变化不大。
哺乳动物组织中GST的提取：由于哺乳动物组织中酶活力较大，为保证灵敏度，要注意用试剂一将酶提取液进行稀释，肝脏稀释50倍左右，肾脏稀释20倍左右。
计算酶活力时乘以相应稀释倍数。
细胞处理：收集约2×104个细胞，冷冻干燥后，加入1mL试剂一。
超声破壁细胞(950 W，30%，15min，工作1s间隔2s)，再经1,0000r4℃高速离心10min，上清待测。
其它步骤按照试剂盒说明书操作即可。