抗人球蛋白试验Coomb

抗人球蛋白试验Coomb`s

1.原理：温抗体溶血的自身抗体为IgG在AIHA的患者中，此抗体能与表面附有相应抗原的红细胞结合，使红细胞致敏而不发生凝集，待加入抗人球蛋白血清（AHGS）后，则与红细胞上粘附的IgG相结合，使红细胞串并在一起而发生凝集，此即为直接抗人球蛋白试验（ＤＡＴ）。患者血清中存在游离的自身抗体，则可用Rno(D)阳性的Ｏ型红细胞加以吸附，再用已吸附有自身抗体的红细胞与AHGS 作用而发生凝集反应，此即为间接抗人球蛋白试验（ＩＡＴ）。

2.试剂：抗人球蛋白（IgG;IgM;IgA;C3,IgG1;IgG2;IgG3;IgG4美国产）。

3.操作：

3.1在80×60mm平板玻片，用油漆均分成12个小格。

3.2将各种抗人球和C3分别作倍比稀释（2；4；8-----）后；依次吸取10ul于格内，做好标记。

3.3每孔加入洗涤后5％被检RBC悬液10ul。

3.4混匀放密闭保湿盒内，37度保温30分钟；（每隔10秒混匀一次）于镜下作效价和分值测定。

4.结果：

（＋－）：2分反应液中有3－5个小凝块（4个RBC以上紧密聚集）。

（＋）：4分反应液中有6－10个小凝块游离RBC约3／4。

（＋＋）：6分反应液中有11－30个中等大小凝块游离RBC约1／2。

（＋＋＋）：8分反应液中有充满凝块游离RBC约1／4。

（＋＋＋＋）：10分反应液RBC呈结实而大的凝块游离RBC极少。

5.正常参考值：阴性。

6.注意事项：

6.1患者血标本必须新鲜，血球洗涤要干净不带有血浆蛋白，一般生理盐水理为血清量的４０００倍以上。

6.2每次试验应作阴阳对照。

6.3对研究温抗体型AIHA而言，应选择单抗特异类（抗IgG、IgC、3d、C3c等）的ＡＨＧＳ，不仅诊断所需，且可将温型抗体ＡＩＨＡ进一步分型。

6.4血液用ＥＤＴＡ抗凝为佳且应立即试验，以防标本放置过程中有非特异性的补体结合，致出现假阳性。

7.临床意义：

7.1温抗体型导致的AIHA,DAT,强阳性，IAT多为阴性，但亦可阳性。

7.2药物诱发的ＩHA，根据类型不同：多巴类ＤＡＴ与ＩＡＴ均为阳性；青霉素类ＤＡＴ阳性，ＩＡＴ阴性；奎宁类因其抗体多为IgM型，ＤＡＴ多为阴性；如改用抗人全血球蛋白则ＤＡＴ可为阳性。

7.3冷凝集素综合征：用抗人全血清的抗人球与３７度洗涤过的患者红细胞用试验，ＤＡＴ亦可阳性，如用单抗IgG或IgM的特异抗血清用试验，ＤＡＴ则为阴性。３７度作ＩＡＴ结果阴性，温度下降则ＩＡＴ阳性。

7.4ＰＮＨ：患者在溶血发作时，ＤＡＴ强阳性，发作后转阴性；ＩＡＴ常为阴性。

7.5新生儿同种免溶贫：本病是孕妇的血型抗体通过胎盘进入胎作的血液，对胎儿红细胞的抗原起破坏作用而致的溶血病。故母亲与胎儿的Rh血型、ＡＢＯ型或其它血型不合时均可发生。因Rh抗体引起溶血的病例，全抗或单抗IgG或IgM呈阳性，且持续数周，经换血与输后阴性转。因ＡＢＯ血型不合引起溶血的病例，ＤＡＴ多为阴性或弱阳性。