实验八、大分子物质的水解和糖发酵试验

四、操作步骤
1、淀粉水解试验
溶化三角瓶内的淀粉培养基 → 趁热倒入无菌培养皿内约15ml → 冷凝后点植法接入大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球 菌 → 贴好标签 →平板倒置，370C培养24小时 → 滴加碘液鉴
别有无淀粉水解圈
2、明胶水解试验
取四支明胶试管培养基 →用接种针分别穿刺接入大肠杆菌、枯 草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌，另一支不接菌为空白对照管→ 贴好标签 → 200C培养3－5d （或370C培养2d ，取出置冰浴冷却）
二、基本原理
1、淀粉水解试验
微生物不能直接利用淀粉，必须靠自身产 生的胞外淀粉酶将大分子淀粉分解成糊精、双 糖和单糖才能进入细胞内，细菌是否能产生淀 粉酶可通过观察细菌菌落周围的淀粉物质是否
被水解来证实，淀粉遇碘液会产生蓝色，被细
菌水解淀粉的区域，用碘则呈褐色。
二、基本原理
2、明胶水解试验
微生物不能直接利用明胶这蛋白质，必须靠 自身产生的胞外明胶酶将大分子蛋白质水解成蛋 白胨或氨基酸才能进入细胞内，细菌能否产生明 胶酶可通过明胶穿刺培养来证实，在微生物的明
实验八 大分子物质的水解和糖发酵试验
主 讲:徐尔尼 生命科学学院生物技术系
一、目的与要求
从而说明不同微生物有着不同的酶系。
• 证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力不同，
• 掌握微生物大分子水解试验的原理和方法。
• 了解糖发酵的原理及在肠道细菌鉴定中的重要作用。 • 掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。 • 学习微生物接菌技术。
操作要点： • 注意无菌操作，勿染杂菌。 • 接好菌的平板一定要倒置放入培养箱中。
无菌操作技术
五、实验数据及处理结果
1、大分子物质水解试验
将结果填入下表。“+”表示阳性，“-”表示阴性
菌 名 枯草芽孢杆菌
淀粉水解试验
明胶水解试验
大肠杆菌 金黄色Fra Baidu bibliotek萄球菌 对照
2、糖发酵试验
将结果填入下表。“⊕ ”表示产酸产气，“+”表示产酸，“-”表示
→观察明胶液化情况
四、操作步骤
3、乳糖发酵试验
另一支不接菌为空白对照管→ 贴好标签 → 370C培养24小时→ 观
取三支乳糖蛋白胨培养基 → 分别接入大肠杆菌、普通变形杆菌，
察产酸、产气情况
4、葡萄糖发酵试验
取三支葡萄糖蛋白胨培养基 → 分别接入大肠杆菌、普通变形杆
菌，另一支不接菌为空白对照管→ 贴好标签 → 370C培养24小时 → 观察产酸、产气情况
图 糖类发酵试验
三、实验器材
1、菌种：枯草芽孢杆菌、普通变形杆菌、大肠杆菌、金黄色
葡萄球菌 2、培养基： 淀粉培养基 明胶半固体培养基 乳糖发酵培养液 葡萄糖发酵培养液 2块培养血/每组(3人） 4支试管/每组(3人） 3支试管/每组(3人） 3支试管/每组(3人）
2、试剂：碘液
3、仪器或其他用具：培养箱、水浴锅、接种环、接种针、酒 精灯、无菌培养血等。
胶酶作用下，明胶失去凝固性，呈液化状态。
二、基本原理
3、糖发酵试验
糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应， 在肠道细菌的鉴定中尤为重要。大肠菌群能在370C 培养下，利用乳糖产酸、产气。当产酸时，溴甲酚 紫指示剂可由紫色（pH6.8）变为黄色（pH5.2）。
当产气时，可通过倒置小倒管内的气泡来判断。
阴性
糖类发酵
大肠杆菌
普通变形杆菌
对照
葡萄糖发酵
乳糖发酵
六、思考与讨论
1、你怎么解释淀粉酶是胞外酶而非胞内酶？
2、接种后的明胶试管也可以在350C培养，在培养 后你必须做什么才能证明水解的存在？