(完整版)公共场所空气微生物检测方法——细菌总数测定
第十五章 公共场所微生物
平皿暴露沉降法（自然沉降法）
空气采样器法
– 参见第九章《空气微生物》
二、公共卫生用具微生物检测
• 采样 • 采样数量 • 采样部位 • 送检 • 监测项目和检验方法 • 现场采样操作的质量控制 • 监测数据整理
（一）采样
• 公共场所内公共用品种类很多，需按照不同的采 样和检验方法进行微生物检测。 – 无菌操作。采样用具，如采样器、试管、广口 瓶、剪子等，必须经灭菌； – 常用方法有涂抹法、戳印法、无菌滤纸斑贴法。
• 现场采样前，必须详细阅读仪器的使用说明，熟 悉仪器性能及适用范围，能正确使用监测仪器。
• 采样器的流量于每次采样之前进行流量校正。 • 微生物采样必须在无菌条件下操作 。
（七）监测数据整理
• 数据的表达：测定的数据与监测仪器灵敏度和分 辨度有关。测定结果低于检出限数据，应记录为 低于该检出限，并同时记录方法阶检出限。
Public Places
《公共场所卫生管理条例》 1987年
• 公共场所分类：7类28种
– 宾馆、饭馆、旅店、招待所、咖啡馆、酒吧、茶座； – 公共浴室、理发店、美容店； – 影剧院、录像厅(室)、游艺厅(室)、舞厅、音乐厅； – 体育馆（场）、游泳场（馆）、公园； – 展览馆、博物馆、美术馆、图书馆； – 商场(店)、书店； – 医院候诊室、候车(机、船)室； – 公共交通工具。
公共场所的生境特征有利于病原传播
公共场所的病原传播特点
• 人群密集，人员流动性大，病原微生物的传播容 易实现，甚至造成疾病的爆发与流行；
• 公共设施及物品供公众重复使用，易造成污染， 并通过这些公用设施和物品传播病原体；
• 人群中健康与非健康个体混杂，易通过病人或病 原携带者与健康人的密切接触造成疾病特别是传 染病在人群中的传播；
空气中细菌含量的检测
空气中细菌含量的检测
空气中细菌含量的检测有两种方法即：空气采样器法和平板暴露法。
（一）空气采样器法
用空气微生物采样器，在鸡舍内四周和中央采样，采样1或2分钟，然后将琼脂平板置于37℃温箱中培养24小时，观察并计数平板的菌落，求出5个采样点的平均菌落数。
计算公式为：
（二）平板暴露法
将普通琼脂平板或血液琼脂平板，水平地放在鸡舍内四角和中央各1个，将平皿盖打开，扣放在平皿底的底边，根据鸡舍内的污染程度，暴露10~20分钟，然后盖好平皿，将平皿放在37℃温箱中培养24小时，观察并计数平板上的菌落数，求出5个平板中的平均菌落数，据测试，5分钟内在100平方厘米面积上降落的细菌数，相当于10升空气中所含的细菌数，因此，可按下列公式计算：
A=平板面积（平方厘米）
T=平板暴露于空气中的时间（分）
N=平均菌落数
（三）鸡舍空气中细菌允许量
一般认为：在有鸡的情况下，鸡舍每立方米空气中微生物（细菌和霉菌）不应高于25~30万个，笼养雏鸡每立方米空气中微生物总数不应超过13万个，其中大肠杆菌群不应超过1900个。
否则，可引起临床大肠杆菌病，必须采取预防措施。
公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定
公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定公共场所的空气质量对人们的健康和舒适度有着重要影响。
其中，微生物的存在是一个重要的指标，尤其是细菌的总数测定。
本文将介绍公共场所空气微生物检验的方法，重点关注细菌总数的测定。
公共场所的空气中存在大量的微生物，包括细菌、真菌和病毒等。
这些微生物可以通过空气传播，并对人们的健康造成潜在威胁。
因此，对公共场所的空气质量进行监测和检验是非常重要的。
细菌是一类常见的微生物，广泛存在于自然界和人类生活环境中。
测定公共场所空气中细菌总数的方法有多种，下面将介绍其中两种常用的方法。
一种常用的方法是采用空气采样器进行采样，然后将采样得到的样品进行培养和计数。
空气采样器可以根据不同的需求选择不同的类型，如空气质量检测仪、空气质量监测仪等。
采样时应注意避免污染和交叉污染，选择合适的采样时间和采样位置。
采样得到的样品需要进行培养和计数。
培养方法可以选择常规的液体培养基或固体培养基，也可以选择特定的培养基，如选择含有某种抗生素的培养基来筛选特定的细菌。
培养时间和培养温度也是影响结果的重要因素，一般情况下，培养24-48小时后进行计数。
另一种常用的方法是采用表面采样法进行采样，然后将采样得到的样品进行培养和计数。
表面采样法可以使用不同的方法，如擦拭法、刮取法、涂抹法等。
采样时应注意选择合适的采样器具和采样面积，避免污染和交叉污染。
采样得到的样品需要进行培养和计数。
培养方法和计数方法与空气采样相似，可以选择常规的液体培养基或固体培养基，也可以选择特定的培养基来筛选特定的细菌。
培养时间和培养温度也是影响结果的重要因素，一般情况下，培养24-48小时后进行计数。
细菌总数的测定结果可以通过计算得到，一般以CFU/m3（每立方米的菌落形成单位）为单位。
根据不同的场所和要求，对细菌总数的限制标准也有所不同，一般情况下，室内空气的细菌总数应控制在一定范围内，以保证公共场所的空气质量。
公共场所的空气微生物检验方法中，细菌总数的测定是一个重要的指标。
空气中微生物数量的检测
五、结果评价
• 空气微生物卫生标准，是以细菌作为标准 • 细菌选用的指标是菌落总数，表示方法为cfu/皿或
者cfu/m3
我国现行标准是根据空气中实测细菌数和流行病学 观察结果为主要依据。
• 室内空气质量标准 （GB/T18883-2002） • 2500cfu/m3
公共场所空气卫生标准
• 图书馆、阅览室的空气卫生标准：空气细菌总数 ≤2500cfu/m3（撞击式），或≤30个/皿（沉降式）
空气中微生物数量的检测
内容
• 一、实验目的 • 二、实验原理 • 三、实验步骤 • 四、结果计算 • 五、结果评价
一、实验目的和意义
• 掌握检测和计数空气中微生物的基本方法
• 掌握无菌操作技术和微生物实验的基本操 作
• 学习对室内空气进行初步的微生物学评价
实验意义
• 空气中细菌总数常作为室内空气质量和空 气受到微生物性污染程度的指标。
注意事项： 整个过程注意无菌操作。
四、结果计算
• 1.自然沉降法
• 根据奥梅梁斯基建议，面积为100cm2的平板培养基，暴露 于空气中5min，于37℃温箱培养24h后所生长的菌落数相 当于10L空气中的细菌数
• 空气中细菌数（cfu/m 3） =1000×[(100/A) ×(5/t) ×(1/10)] ×N
Anderson采样器（FA-1型）
各级撞击盘捕获粒子范围及孔径大小
• Ⅰ：＞7μm • Ⅱ：4.7~7μm • Ⅲ：3.3~4.7μm • Ⅳ：2.1~3.3μm • Ⅴ：1.1~2.1μm • Ⅵ：0.65~1.1μm
孔径1.18㎜ 孔径0.91㎜ 孔径0.71㎜ 孔径0.53㎜ 孔径0.34㎜ 孔径0.25㎜
• 2.撞击法 调整采样器高度为呼吸带高度于1.2～1.5m
空气细菌数量的检测
空气细菌数量的检测引言：与外界相通的各个空间的空气中均有大量的细菌存在，且种类繁多，而这些微生物中绝大多数对我们人体来讲都是有益的，但其中也有一部分微生物往往是实验室各种实验材料、实验菌种污染的祸根，也是引起人类各种传染性疾病的祸根。
因此，对空气进行细菌学检验，目的在于调查气溶胶扩散的范围、滞留时间及浓度；确定空气中病原体种类；研究呼吸道传染病传播机制及气雾免疫的应用；考核空气卫生学及消毒效果，树立“处处有菌”和严格的消毒与灭菌观念。
而处于学院的我们来说，学院空气质量的好坏与师生们的生活与学习息息相关，通过沉降法检测细菌总数来判断空气中的卫生状况与污染程度并了解空气质量显得至关重要。
材料与方法：（一）仪器与材料1、普通营养琼脂平板（由中山大学新华学院医学实验室提供）2、恒温培养箱（中山大学新华学院医学实验室提供）（二）采样地点按照《室内空气质量标准》的要求进行采样布点，选取新华学院的图书馆、西门口、校道、教学楼以及微生物实验室。
（三）采样时间及方法采样时间为2014年9月1日下午两到四点，采样天气为晴朗无雨，采样方法为自然沉降法。
沉降法是以微生物在空气中能随尘粒下降的原理，将平板平放在空气中暴露一定时间，使空气中的细菌直接沉降至培养基表面，然后置37摄氏度孵育24小时，计算菌落数。
实验方法：a.取用普通营养琼脂平板5个（直径7cm），在皿底做上标记；b.采用自然沉降法收集细菌，采用地点为新华学院的各个指定地方。
将平板打开，平板盖朝下放置在平板旁，分别暴露于空气中20分钟，然后盖好。
并注明采样的地点和暴露的时间；c.平板放置于37℃的恒温培养箱培养24小时后取出后观察，计算出所生长的菌落数和数量。
（四）菌落数计算按下列公式可得出空气中细菌总数。
每立方米细菌数=50,000N/ATA:所用平板面积（平方厘米）；T:平板暴露于空气中的时间（分钟为单位；N：平板上的菌落数实验结果使用实验室提供的营养琼脂平板，在学校各个地方收集空气中的细菌，培养空气中的细菌，并经过实验室的空气细菌培养24h后，得出以下数据：样本号12345678 采样地点图书馆西门口校道微生物实验室厕所微生物实验室楼梯教学楼微生物实验室微生物实验室办公室采样时间/min2020202515202015平板上菌落数2515123471、由上述数据可知校园内的空气质量较好；2、各采样点的空气菌落对比：校道>微生物实验室厕所>微生物实验室>西门口>教学楼>微生物实验室楼梯>图书馆>微生物实验室办公室。
空气中微生物的检测(共24张PPT)
一、实验目的 二、实验原理 三、实验步骤 四、结果计算 五、结果评价
一、实验目的和意义
41μ个m同学一孔组径，0.分别采用自然沉降法和Anderson采样器，采样时间设为5min和10min，比较两种采样方法的结果。
掌握检测和计数空气中微生物的基本方法 室特内点空 ：气此质法量简标单准方便（，G但B/稳T1定88性83差-2，00直2）径1～5μm的粒子在5min中内沉降距离有限，使小粒子采集率较低。
由An6d个er带so有n采微样细器针（孔F的A-金1型属）撞击盘构成，盘下放置有培养基的平皿，每个圆盘上有400个环形排列小孔，由上到下孔径逐渐减小。
空图气书中 馆微、生阅物览数室量的的空检气测卫生标准：空气细菌总数≤2500cfu/m3（撞击式），或≤30个/皿（沉降式）
学习对室内空气进行初步的微生物学评价 根细据菌空 选气用中的携指有标微是生菌物落气总溶数胶，粒表子示在方地法心为引cfu力/皿的或作者用c下fu/，m以3 垂直的自然方式沉降到琼脂培养基上，经过24h，37℃温箱培养计算出菌落
各采级集撞 粒击谱盘范捕围获广粒，子一范般围在及0. 孔径大小 日5m光,采，样波时长关为闭25门4窗纳，米减的少紫人外员线走光动具有杀菌作用
气学流习， 对不室仅内可空以气把进室行外初的步细的菌微带生入物室学内评，价也会将地面、墙壁的含菌粒子扬起。
特将点平： 皿此依法次简放单入方圆便盘，但固稳定定并性做差好，标直记径1～5μm的粒子在5min中内沉降距离有限，使小粒子采集率较低。
各沉种降粒 法径测大定小的的菌菌落落总易数沉要降多的，部在位实及验意条义件下比撞击法多24. 沉特降点法 ：测此定法的简菌单落方总便数，要但多稳，定在性实差验，条直件径下1～比5撞μm击的法粒多子2在4. 5min中内沉降距离有限，使小粒子采集率较低。
试验 公共场所空气微生物细菌总数测定
3 开 2min 80L
4 开 4min 160L
1~4 关 8min 320L
实验注意事项
空气微生物采样应尽量避开空调、门窗气 流量变化较大的区域
采样前与相关公共场管理部门有效的协调 平皿中营养琼脂厚度和制备水平，避免出
现气泡 沉降平板法平皿盖的放置 撞击式空气采样时要注意消毒和无菌操作 采样高度的选择：中心空调出风口
风速 采样者
Ⅵ
0.25
0.65-1.1
FA-1型六级筛板固体撞击式空气微生物采样器
筛板孔径范围 I 1.18um II 0.25um
捕获粒子范围 I >7.0um II 0.65um~1.0um
JWL-2 二级筛板固体撞击式空气微生物采样器
FA-1型撞击式空气微生物采样器采样
采样方法 地点 采样点：布点数量、位置、高度 采样方法和步骤 １平板制备：每平皿约8ml营养琼脂 ２采样器的消毒和安装 ３采样时间和流量： 时间根据空气状况，流量28.3L/min ４ 37℃培养48h (24h)
5 取出采样平皿，平皿加盖。依次编号。
6 细菌培养 采样平皿带回实验室，37℃ 48h
Andersen 采样器 各级喷嘴孔径及捕获粒子大小范围
级别 Ⅰ Ⅱ
喷嘴孔径 mm 1.80 0.91
捕获粒子 um ≥7.0 4.7-7.0
Ⅲ
0.71
3.3-4.7
Ⅳ
0.53
2.1-3.3
Ⅴ
0.34
1.1-2.1
5 样品培养 采样平皿带回实 验室，37℃ 48h
JWL－1A型 单级固体撞击式空气微生物采样器
JWL－1A型空气微生物采样器
采样方法 地点 采样点：布点数量、位置、高度 采样方法和步骤 １平板制备：每平皿5ml营养琼脂 ２调整采样器的采样时间和流量：20L/min，1~3min ３采样头的消毒和平皿的安装 ４现场采样，信息记录 ５ 37℃培养48h (24h)
室内空气中细菌的测定
（二）试剂与材料：
营养琼脂培养基：
（1）成份： 蛋白胨
10克
牛肉浸膏
3克
氯化钠
5克
磷酸二氢钠
1克
琼脂
15～20克
蒸馏水
1000毫升
（二）试剂与材料：
营养琼脂培养基： （2）制法：将上述成分混合后，加热溶解。调节PH 值7.8～8.0。过滤除去沉渣，分装于三角烧瓶中，经 121℃（103kPa）高压蒸气灭菌20分钟，然后倾注适 量（15～20毫升）于已灭菌处理的平皿内，制成营养 琼脂平板备用。若当天不用，应置冰箱内保存。
五、操作步骤：
（一）制作营养琼脂平板（无菌操作）
操作者面前点燃酒精灯 打开已灭菌处理的平皿 倾注适量营养琼脂培养基（15～20毫升） 冷凝（大约15分钟）
（二）选择采样点的要求：
1．采样点的数量 根据监测室内面积大小和现场情况而确定，以
期能正确反映室内空气污染物的水平。原则上小于 50㎡的房间应设（1～3）个点；50㎡～100㎡设 （3～5）个点；100㎡以上至少设5个点。在对角线 上或梅花式均匀分布。 2．采样点应避开通风口，离墙壁距离应大于0.5m。 3．采样点的高度：原则上与人的呼吸带高度相一 致。相对高度0.5m～1.5m之间。
化较大处。整个采样过程中，应动作轻缓，避 免扬起灰尘，并要注意无菌操作。 4.采样中打开皿盖时，可将皿盖向下，切忌血盖向 上而暴露于空气中，影响采样结果。暴露5分钟 后，应按打开皿盖的顺序，盖上皿盖，带回实 验室置培养箱，37℃、24小时培养后计数菌落。
补充：
1.撞击式空气采样法：用空气动力泵抽气进入狭缝， 使气流速度加快，撞击于正在转动的平皿上。并粘 附其上，培养。CFU/m3 2.吸收法：气流经过一定的吸收液，培养。 3.暴露法：CFU/皿。缺点：颗粒物质运动符合 stokes定律，由于人流、季节、白天细菌数>晚上， 且技术定量不同等可造成误差。
空气中微生物总数的检测方法
空气中微生物总数的检测方法
空气中的微生物总数对于环境卫生和健康具有重要意义。
因此，开发出快速、准确的方法来检测空气中微生物总数至关重要。
目前，有几种常见的方法可以用来检测空气中微生物总数。
一种常见的方法是通过空气采样器来捕集空气中的微生物。
这
些采样器通常使用生物气溶胶采样器或空气生物采样器，可以捕集
空气中的微生物颗粒。
一旦收集到样本，就可以使用培养基来培养
微生物，并通过计数形成菌落来确定微生物总数。
这种方法虽然准确，但需要较长的培养时间，通常需要几天到一周的时间才能得出
结果。
另一种常见的方法是通过聚合酶链式反应（PCR）来检测微生物
总数。
PCR是一种快速、高效的技术，可以在几个小时内检测出微
生物的DNA或RNA。
这种方法不需要培养微生物，因此可以更快地
得出结果。
但是，PCR方法需要特定的设备和技能，因此在实际应
用中可能存在一定的限制。
近年来，基于光学技术的方法也被广泛应用于空气中微生物总
数的检测。
这些方法利用光学原理来测量微生物颗粒的数量和大小，
可以实现实时监测和快速检测。
此外，一些新兴的技术，如流式细胞术和基于质谱的方法，也正在被研究和开发，以提高空气中微生物总数的检测效率和准确性。
总的来说，空气中微生物总数的检测方法多种多样，每种方法都有其优缺点。
随着科学技术的不断进步，相信未来会有更多更快速、更准确的方法被开发出来，为空气质量监测和环境卫生提供更有效的手段。
空气细菌总数的测定
空气细菌总数的测定一、实验原理培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。
由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。
另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。
任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。
一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。
高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。
在0.1MPa的压力下，锅内温度达121℃。
在此蒸汽温度下，可以彻底高效杀死各种细菌及其高度耐热的原理。
空气是人类赖以生存的必须环境，也是微生物借以扩散的媒介。
空气中存在着细菌、真菌、病毒、放线菌等多种微生物粒子，这些微生物粒子是空气污染物的重要组成部分。
空气微生物主要来自于地面及实施、人和动物的蹑手呼吸道、皮肤和毛发等，它附着在空气气溶胶细小颗粒物表面，可较长时间停留在空气中。
某些微生物还可以随着空气中细小颗粒穿过人体肺癌存留在肺的深处，给身体健康带来严重危害，也可以随着空气中细小颗粒物被输送到较远地区，给人体带来许多传染性的疾病和上呼吸道疾病。
因此，空气微生物含量多少可以反映所在区域的空气质量，是空气环境污染的一个重要参数评价空气的清洁程度，需要测定空气中的微生物数量和空气污染微生物。
----测定方法--平皿沉降法二、测定原理空气中飘浮着各种微生物，将盛有无菌培养基的平皿放于监测点上，暴露5min，空气中的细菌便会落到培养基上，然后在37°C恒温箱中培养24h，计数每个平皿表面的菌落数，由于一个菌落由一个细菌繁殖而来，菌落总数便可认为是细菌总数。
三、试剂营养琼脂1、成分A蛋白胨 1gB牛肉膏 0.3gC氯化钠 0.5gD琼脂 1.5gE蒸馏水1000mL2、制法：将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4～7.6，分装于玻璃容器中（如用国产含杂质较多的琼脂时，应先过滤），经121℃灭菌20min，储存于冷暗处备用。
公共场所卫生检验方法 空气微生物细菌总数的测定方法证实
公共场所空气细菌总数的测定一、项目概述依据GBT 18204.3-2013 公共场所卫生检验方法空气微生物细菌总数的测定撞击法。
公共场所空气中采集的样品，计数在营养琼脂培养基上经35℃～37℃、48 h培养所生长发育的嗜中温性需氧和兼性厌氧菌落的总数。
本部分适用于公共场所空气中细菌总数的测定。
二、仪器2.1六级筛孔撞击式微生物采样器。
2.2高压蒸汽灭菌器。
2.3恒温培养箱。
2.4平皿：90 mm。
三、培养基与试剂3.1. 平板计数营养琼脂成分：A 牛肉膏 3gB 蛋白胨 10gC 氯化钠 5gD 琼脂 10～20gE 蒸馏水 1L将上述成分加于蒸馏水中，加热溶解，调节pH值为7.4～7.6，分装于玻璃容器中，121℃高压灭菌20分钟，储藏于冷暗处备用。
3.2. 无菌生理盐水的配制称取8.5g氯化钠溶解于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌30分钟。
四、采样4.1 采样点：4.1.1室内面积不足50m2的设置3个采样点，50m2以上的设置5个采样点。
4.1.2采样点按均匀布点原则布置，室内3个采样点的设置在室内对角线四等分的3个等分点上，5个采样点的按梅花布点。
4.1.3采样点距离地面高度1.2 m～1.5 m，距离墙壁不小于1m。
4.1.4采样点应避开通风口、通风道等。
4.2 采样环境条件：采样时关闭门窗15 min～30 min，记录室内人员数量、温湿度与天气状况等4.3 采样方法：采样方法：以无菌操作，使用撞击式微生物采样器以28.3 L/min流量采集5min～15 min。
采样器使用按照说明书要求进行。
五、检验步骤将采集细菌后的营养琼脂平皿置35℃～37℃培养48 h，菌落计数。
六、菌落计数及报告方法6.1采样点细菌总数结果计算：菌落计数，记录结果并按稀释比与采气体积换算成CFU/m3（每立方米空气中菌落形成单位）。
6.2一个区域细菌总数测定结杲：一个区域空气中细菌总数的测定结果按该区域全部采样点中细菌总数测定值中的最大值给出。
(完整版)公共场所空气微生物检测方法——细菌总数测定
空缺中微生物检验方法
菌落总数测定
自然沉降法
1 原理：指直径9cm的营养琼脂平板在采样点暴露5min，经37℃、48h培养后,计数生长的细菌菌落数的采样检测方法。
2 仪器：
2。
1 高压蒸汽灭菌器
2。
2 恒温培养箱
2.3 冰箱
2。
4 平皿（直径9cm）
2.5 制备培养基用一般设备
3 培养基
3.1 成分：
蛋白胨 10g
牛肉浸膏 3g
氯化钠 5g
琼脂 15～20g
蒸馏水 1000mL
3.2 制法：将上述各成分混合，加热溶解,校正pH至7.4，过滤分装，121℃20min高压灭菌，用自然沉降法时倾注约15mL于灭菌平皿内，制成营养琼脂平板。
4 操作步骤：
4。
1 设置采样点时，应根据现场大小，选择有代表性的位置作为空气细菌检测的采样点。
通常设置5个采样点，即室内墙角对角线交点为一采样点,该点与四墙角对角线的中点为另4个采样
点。
采样高度为1。
2～1。
5m。
采样点应远离墙壁1m以上,应避开空调、门窗等空气流通处。
4。
2 将营养琼脂平板置于采样点处，打开皿盖,暴露5min，盖上皿盖，翻转平板，置36℃±1℃恒温培养箱中,培养48h.
4.3 计数每块平板上生长的菌落数，球场全部采样点的平均菌落数。
以每平皿菌落数（cfu/皿)报告结果。
公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定
公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定随着人们对公共场所环境质量要求的提高，对公共场所空气中微生物的检测也越来越重视。
其中，细菌总数是衡量空气中微生物含量的一项主要指标。
下面将详细介绍公共场所空气微生物检验方法中的细菌总数测定步骤。
1.样品采集首先，确定采样位置。
根据公共场所的具体情况，如是否有空调、通风设备等信息，选择具有代表性的采样点位。
一般来说，可选择通风良好、人员流动频繁的位置进行采样。
然后，采用采样器具进行空气采样。
空气采样器具常用的有空气生物分析仪、洒雾器等。
根据采样器具的具体操作手册，按照规定的操作步骤进行采样，同时注意采样时间和采样量的控制。
2.样品处理采样完成后，将采样器具中的采样物转移到适当的载体（如培养基、液体培养基）中。
根据具体情况，选择合适的载体。
对于空气样品，一般选择液体培养基，如生理盐水。
将采样管中的液体转移到含有生理盐水的试管中。
3.稀释操作将采样物进行稀释，以便于接种和计数。
稀释液的选择可依据之前的实验经验，一般选用营养琼脂或平板培养基。
将采样物中的适量细菌悬浮液取出，用移液管分别转移到不同稀释管中，依次进行系列二次稀释。
每次稀释后，需充分摇匀。
根据之前的实验经验，每一次稀释可选用10倍、100倍、1000倍等稀释倍数。
4.接种和培养将稀释液分别接种到含有固体培养基的平板上，均匀涂布。
然后将接种后的平板培养基放置于恒温培养箱中，选择适宜的培养温度和时间。
一般来说，菌落计数应在培养48小时后进行。
5.计数和结果分析计数时，将培养出的菌落进行清点，并将数量记录下来。
根据菌落的大小、颜色和形态等特征，可初步判断不同菌种的存在情况。
最后，将不同菌种的菌落数量进行统计和分析，并将细菌总数计算出来。
需要注意的是，在细菌总数测定过程中，应严格控制实验条件，如温度、湿度等，以确保结果的准确性。
另外，细菌总数的测定结果应与相关标准进行比较，以评估空气中微生物的含量是否符合要求。
总结：公共场所空气微生物检验方法中的细菌总数测定步骤包括样品采集、样品处理、稀释操作、接种和培养、计数和结果分析等。
微生物菌落总数的测定—菌落总数的计数方法
混合均匀。
•
6、 待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温
箱内培养48±2h，水产品30±1℃温箱内培养72±3h。
•
如样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生
长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼
脂培养基（约4毫升），凝固后培养。
• （二） 菌落记录方法 做平板菌落数记录时，可用肉眼观察，必要
菌落总数的测定
三 、 材料
1、 食品检样 2、 培养基 平板计数培养基，无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液 3、 其它 无菌培养皿，无菌吸管，电炉、恒温培养箱等。
四、 流程
• 1、检样 • 2、做几个适当倍数的稀释液 • 3、选择2~3个适宜稀释度各1 mL,分别加入
灭菌平皿内 • 4、平皿内倾注15～20 mL琼脂培养基，混匀 • 5、36 ±1℃培养48±2小时或（24±2）小时 • 6、记录稀释倍数和相应的各平板菌落数量 • 7、 计算菌落总数 → 报告
10-4
3.1x106
• 2、若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜
计数范围内时，应以两者比值决定。若其比值小 于2，应报告两者的平均数；若大于等于2，则报 告稀释度较小的菌落数。
试样 稀释度
例次 10-2
10-3
1
380
52
平
2 均 526
205
菌
3 落 271
60
数
4
284
152
菌量
10-4 选定计数稀释度 /(个/g 或mL)
菌量
10-4 选定计数稀释度 /(个/g 或mL)
18
10-3
5.2x104
32
10-3，10-4
2.6x105
12
空气中菌落总数测定方法
空气中菌落总数测定方法空气中菌落总数测定方法是评估环境中微生物污染程度的一种方法。
空气中存在着大量的微生物，包括细菌、真菌和病毒等，它们对人类健康和生物环境都具有一定影响。
因此，了解空气中微生物的总数是非常重要的。
下面将介绍几种常用的空气中菌落总数测定方法。
1.培养法：培养法是目前最广泛使用的一种空气中菌落总数测定方法。
该方法依赖于菌落在富营养培养基上的繁殖，通过计数培养基上的菌落形成单位（CFU）来估计空气中的微生物总数。
常用的培养基有厌氧培养基和好气培养基。
测定步骤大致为：收集空气样本→灭菌并将空气样本传递到培养基上→培养一定时间→用显微镜或裸眼观察菌落的形成（需要进行稀释）→根据菌落数量进行计数。
2.分光光度法：分光光度法是另一种常用的测定空气中菌落总数的方法。
该方法通过测量菌落中主要的色素如叶绿素等的吸光度来估计菌落的数量。
测定步骤包括：将收集到的空气样本溶解在适当的溶液中→将溶液置于分光光度计中测量吸光度→根据标准曲线计算样本中菌落的数量。
3.过滤法：过滤法是通过将空气样本通过微孔过滤膜将其中的微生物捕获，在过滤膜上的菌落形成后进行计数。
该方法适用于空气中微生物浓度较低的情况。
测定步骤为：用特制的采样器收集过滤膜→将过滤膜放置在培养基上进行培养→菌落形成后计数。
4.PCR法：PCR法是一种利用聚合酶链反应（PCR）技术进行空气中菌落总数测定的方法。
该方法通过提取空气中微生物的DNA并进行PCR扩增，通过计数扩增产物的数量来估计菌落的总数。
PCR法具有快速、灵敏和高效等特点。
综上所述，根据不同的实验条件和需要，可以选择适当的方法来测定空气中菌落的总数。
这些方法各有特点，可以相互验证，以获得准确的结果。
同时，不同方法的选择还需要根据实验室设备和人力资源等因素来考虑，以确保实验的有效进行。
GBT 18204.4-2013公共场所卫生检验方法第3部分：空气微生物更改对照
6.1
6.2
6.2.1
6.2.2
6.2.3
6.2.4
平皿：Φ 90mm
6.2.5
CO2培养箱：35℃～～37℃。
6.2.6
紫外灯：波长360nm±2nm。
6.2.7
涡旋振荡器。
6.2.8
普通光学显微镜、荧光显微镜。
6.2.9
Hale Waihona Puke 水浴箱。6.3试剂和培养基
6.3.1
采样吸收液1——GVPC液体培养 基
6.3.1.1 GVPC添加剂成分
检验步骤 将采集真菌后的沙氏 琼脂培养基平皿置28℃培养，逐 日观察并于第5天记录结果。若 真菌数量过多可于第3天计数结 果，并记录培养时间。
4.2.5
结果报告
采样点真菌总数结果计算：菌落 计数，记录结果并按稀释比与采 4.2.5.1 样体积换算成CFU/m³（每立方米 空气中菌落形成单位）。 一个区域真菌总数测定结果：一 个区域空气中真菌总数的测定结 4.2.5.2 果按该区域全部采样点中真菌总 数测定值中的最大值给出。
删除
4.2
新增： 撞击法
4.2.1
新增： 仪器和设备 见3.2.1
4.2.2
新增：培养基
4.2.2.1 新增： 沙氏琼脂培养基成分
新增： 制法将蛋白胨、葡萄糖 溶于蒸馏水中，校正pH为5.5～ 4.2.2.2 6.0，加入琼脂，115℃，15min 灭菌备用。
4.2.3
采样 见3.2.3
4.2.4
4
真菌总数
4.1
营养琼脂培养基
4.1
原理 采用撞击法或自然沉降法 采样、沙氏琼脂培养基培养技术 的方法测定公共场所空气中的真 菌总数。
公共场所空气中细菌总数检验方法
公共场所空气中细菌总数检验方法1 定义撞击法（impacting method）是采用撞击式空气微生物采样器采样，通过抽气动力作用，使用空气通过狭颖或小孔而产生高整气流，使用悬浮在空气中的带菌粒子撞击到营养琼脂平板上，经37°、48h培养后，计算出每m3空气中所含的细菌菌落数的采样测定方法。
自然沉降法（natural sinking method）是指直径9cm的营养琼脂平板在采样点暴露15分钟，经37°、48h培养后计数生长的细菌菌落数的采样测定方法。
2 仪器和设备2.1高压蒸汽灭菌器。
2.2干热灭菌器。
2.3恒温培养箱。
2.4冰箱。
2.5平皿（直径9cm）。
2.6制备培养基用一般设备：量筒，三角烧瓶，pH计或精密pH试纸等。
2.7撞击式空气微生物采样器。
3培养基3.1营养琼脂培养基3.1.1成分；蛋白胨牛肉浸膏10g氯化钠3g琼脂15～20g蒸馏水1000ml3.1.2制法将上述各成分混合，加热溶解，校正pH至7.4，过滤分装，121℃20min高压灭菌。
用自然沉降法测定时，倾注约15ml于灭菌平皿内，制成营养琼脂平板。
撞击法参照采样器使用说明制备营养琼脂平板。
4操作步骤4.1撞击法4.1.1选择有代表性的位置设置采样点。
将采样器消毒，按仪器使用说明进行采样。
4.1.2样品采完后，将带核辐射营养琼脂平板置36±1℃恒温箱中，培养48h，计数菌落数，并根据采样器的流量和采样时间，换算成每m3空气中的菌落数，以CFU/m3报告结果。
4.1.3选择撞击式空气微生物采样器的基本要求。
（a）对空气中细菌捕获率达95%。
（b）操作简单，携带方便，性能稳定，便于消毒。
4.2自然沉降法4.2.1设置采样点时，应根据现场的大小，选择有代表性的位置作为空气细菌检测的采样点。
通常设置5个采样点，即室内墙角对角线交点为1采样点，该交点与四墙角连线的中点为另外4个采样点。
采样高度为1.2～1.5m。
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空缺中微生物检验方法
菌落总数测定
自然沉降法
1 原理：指直径9cm的营养琼脂平板在采样点暴露5min，经37℃、48h培养后，计数生长的细菌菌落数的采样检测方法。
2 仪器：
2.1 高压蒸汽灭菌器
2.2 恒温培养箱
2.3 冰箱
2.4 平皿（直径9cm）
2.5 制备培养基用一般设备
3 培养基
3.1 成分：
蛋白胨10g
牛肉浸膏3g
氯化钠5g
琼脂15～20g
蒸馏水1000mL
3.2 制法：将上述各成分混合，加热溶解，校正pH至7.4，过滤分装，121℃20min 高压灭菌，用自然沉降法时倾注约15mL于灭菌平皿内，制成营养琼脂平板。
4 操作步骤：
4.1 设置采样点时，应根据现场大小，选择有代表性的位置作为空气细菌检测的采样点。
通常设置5个采样点，即室内墙角对角线交点为一采样点，该点与四墙角对角线的中点为另4个采样点。
采样高度为1.2～1.5m。
采样点应远离墙壁1m 以上，应避开空调、门窗等空气流通处。
4.2 将营养琼脂平板置于采样点处，打开皿盖，暴露5min，盖上皿盖，翻转平板，置36℃±1℃恒温培养箱中，培养48h。
4.3 计数每块平板上生长的菌落数，球场全部采样点的平均菌落数。
以每平皿菌落数（cfu/皿）报告结果。