梅毒螺旋体抗体测定SOP

梅毒螺旋体抗体测定标准操作程序（SOP）
【目的】
指导免疫项目梅毒螺旋体抗体的测定。

【适用仪器】
酶标仪ST-36O、洗板机ST-36W等。

【该SOP变动程序】
本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【方法原理】
ELISA法：用HTP特异性抗原包被酶联板，待检血清中的抗TP抗体与包被抗原反应，再与酶标IgG结合，形成抗原-抗体-酶标抗体复合物，加底物（TMB）显色，在酶标仪上测定后根据OD值判定有无TP抗体的存在。

【标本要求】
种类：血清、血浆。

【试剂】
试剂盒：样品稀释液、阴性和阳性对照、浓缩洗液、酶标抗体、底物液A、底物液B、终止液。

保存条件及有效期：2--8℃储存。

自生产日期起，有效期半年。

【质控品】
试剂盒中的阴性和阳性对照、省临检中心下发的，依说明书4–8℃冷藏。

【操作步骤】
1.加样：每次试验设空白对照1孔；阴性对照3孔，阳性对照2孔，分别加
入HCV阴、阳性对照10微升。

除空白孔外，其余孔加入50微升样本。

2.温育：振荡混匀，盖上封板膜，置37±1℃温育60分钟。

3.洗涤：用洗板机洗板，重复洗5次后拍干。

4.加酶:空白对照孔不加酶标记物，其余孔加入酶标记物100微升。

5.温育：振荡混匀，盖上封板膜，置37±1℃温育30分钟。

6洗涤：用洗板机洗板，重复洗5次后拍干。

7.显色：每孔加入底物缓冲液50微升，再加入底物液50微升，振荡混匀，
盖上封板膜，置37±1℃温育30分钟。

8.终止：每孔加入终止液50微升，混匀。

9.用酶标仪读值，零置酶标仪450nm或双波长450nm/630nm下测定OD 值。

结果判定
1.阴、阳性对照和被检样品的OD值减去空白对照OD值即为计算值。

2.试剂空白需<0.08，阴性对照孔值≤0.120，阳性对照孔值≥0.300。

3．临界值（cut off值）的设定：cut off值=0.100+阴性对照OD均值
4．被检样品的OD值>=临界值应判为HCV抗体阳性反应，<临界值为阴性反应。

注意事项
1．各步加液均应使用加液器并经常校对其准确性，以避免实验误差。

2．封口胶只限一次性使用，以避免交叉污染。

3．洗涤时各孔均需加满洗液，防止因洗涤不充分造成非特异性反应。

4．HCV抗体试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。

5．微孔条从冷藏环境中取出应在室温平衡后再打开密封袋，未用完者须放入有干燥剂的密封袋中保存。

6．不同批试剂不能混用。

7．所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按传染物处理。

8．请严格按说明书操作。

详见《珠海丽珠试剂有限公司的试剂盒说明书》。