白血病免疫分型讲课最终版本

• 单参数免疫标志测定易将正常细胞包括在内。因此，近年
来主张用设门（gating）方法。即用CD45与侧向角 （side scatter,SSC），对数取样后可将骨髓细胞清晰地 分出淋巴细胞，单核细胞，成熟粒细胞，幼稚细胞和红细 胞群，其理论依据是CD45是所有白细胞的抗原。其表达量 在淋巴细胞最高，单核细胞，成熟粒细胞，早期造血细胞 （blasts）依次减弱。红细胞（中，晚幼红细胞，成熟红 细胞）不表达CD45。SSC反映细胞的颗粒性，成熟粒细胞 SSC最高，依次为单核细胞，淋巴细胞，blasts，红细胞。 以CD45/SSC双参数，对数取样时即可把各细胞群区分出来。 若同时加上一个，二个甚或三个荧光标记的单抗，则很容 易识别非正常细胞群所表达的抗原。这样可以排除正常细 胞的干扰。在幼稚细胞％低的情况下或检测残存白血病时 尤为必要
指血细胞在分化成熟为不同谱系（lineage） 、分化的不 同阶段及细胞活化过程中，出现或消失的细胞表面标记。
• 它们大都为跨膜分子，由胞外区、跨膜区和胞浆区组成；
有些以糖基磷脂酰肌醇（GPI）“锚”在细胞膜上；
• 它们大都是蛋白或糖蛋白，少数为碳水化合物
二 CD的概念、CD分子的分 类、功能及应用
•
• 早年曾用过的荧光显微镜或APAAP方法基本被废弃。国际
上公认的通用的方法是流式细胞术（FCM）。流式细胞术 （FCM）白血病免疫分型是利用荧光素标记的单克隆抗体 （McAb）作分子探针，多参数分析白血病细胞的细胞膜和 细胞浆或细胞核的免疫表型，由此了解被测白血病细胞所 属细胞系列及其分化程度。因为FCM能快速，多参数，客 观的定性又定量测定细胞膜，浆，核的抗原表达。
白血病分化阶段抗原
• T细胞抗原：CD4、CD8。
• B细胞抗原：CD10、Cyμ（胞浆μ链）、SmIg（表面膜免
疫球蛋白）、CD38和CyIg （胞浆免疫球蛋白）、CD11C。
白细胞共同抗原
• CD45为白细胞共同抗原，但原幼细胞表达量比成熟淋巴
细胞低，幼红细胞不表达。用SSC/CD45 PerCP双参数分 析可十分容易鉴别骨髓和血液中的原始或成熟细胞。用两 个系列或阶段特异性McAb加CD45进行三色免疫荧光染色， 经FSC、SSC、McAbl-FITC、McAb2-PE、CD45 PerCP五参 数分析，可特异地分析原幼白血病细胞的免疫表型而不受 成熟细胞的干扰。
致划分为14个组。
• CD分子的功能：
（1）免疫应答过程中参与免疫细胞的相互识别；免疫细胞 识别抗原、活化、增殖和分化；免疫效应功能的发挥； （2）参与造血细胞的分化和造血过程的调控； （3）参与炎症的发生；
（4）参与细胞的迁移如肿瘤细胞的转移等。
• CD分子的临床应用
CD单克隆抗体可用于 （1）阐明某些疾病的发病机制； （2）广泛应用于多种疾病的免疫诊断； （3）治疗移植排斥反应和肿瘤等疾病；
四
白血病免疫分型
急性髓系细胞白血病
• MO Mo blasts 有低的SSC和FSC。在CD45－SSC
但仍能表达正常血细胞所具有的抗原，因而仍可依据其抗 原的表达谱对白血病进行免疫分型。由于白血病细胞具有 肿瘤细胞的特征，其抗原表达又不完全同于正常血细胞， 常可出现某些抗原缺乏、过度表达、系列交叉表达某一系 列或阶段不应有的抗原，这又增加了白血病免疫分型的复 杂性。白血病/淋巴瘤的免疫分型已成为诊断血液恶性肿 瘤不可缺少的重要标准之一。
CD20分子
• 结构与分布：单链跨膜蛋白，仅表达于B细胞， 早期即表
达，分化为浆细胞后消失 • 功能： （1）参与和调节B细胞信号转导、生长和分化。 （2）直接参与调节跨膜Ca2+的流动。
三 免疫分型常用的免疫标志及 其意义
白血病系列分化抗原
• T淋巴细胞白血病：CD3、CD5、CD7。 • B淋巴细胞白血病：CD10、CD19、CD22。 • NK淋巴细胞白血病：CD16、CD56、CD57。 • 髓系白血病：CD13、CD14、CD33、MPO（髓过氧化物 •
• 正常血细胞从多能干细胞分化、发育、成熟为功能细胞的
过程中，细胞膜、细胞浆或胞核抗原的出现、表达增多与 减少甚至消失与血细胞的分化发育阶段密切相关，而且表 现出与细胞系列及其分化程度相关的特异性。因此，这些 抗原的表达与否可作为鉴别和分类血细胞的基础。
• 白血病是造血系统的恶性肿瘤，在形态上变化虽相当大，
酶）。 红白血病：GlyA（血型糖蛋白A）。
• 巨核细胞白血病：CD41、CD42、CD61。
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白血病系列非特异性抗原
• CD34、HLA－DR为早期细胞抗原，无系列特异性，可与
CD38联合运用于免疫分型。一般而言，干/祖细胞CD34＋、 HLA－DR＋、CD38－，原始细胞CD34＋、HLA－DR＋、 CD38＋，而幼稚细胞（如早幼粒细胞）CD34－、HLA－ DR－、CD38＋。
• CD：用以单克隆抗体鉴定为主的聚类分析法，将来自不
同实验室的单克隆抗体所识别的同一分化抗原归为一个分 化群（Cluster of differentiation，CD）。并以此代替分化 抗原以往的命名。
• 在许多情况下，单克隆抗体及其识别的相应抗原都用同一
个CD序号。
• 迄今为止，人CD分子的序号已从CD1命名至CD371，可大
• FCM分析白血病免疫表型时，测量细胞数量一般在10000～
50000细胞之间，而且快速、特异、准确，重复性好，能 区分细胞起源、划分其分化发育阶段等，对白血病的诊断 与分型、治疗方案选择与预后判断、发病机理研究等有重 要价值。
一
白细胞分化抗原
• 白细胞分化抗原（leukocyte differentiation antigen，LDA）
• 另一个重要理由是至今尚未发现白血病/淋巴瘤的特异抗
原。所以能用正常血细胞的单抗来进行免疫分型是基于白 血病形成的分化阻断学说即白血病细胞基因异常，分化受 阻于某阶段形成不同亚型的白血病。这群细胞充盈于骨髓。 抗原表达与其相应系列/阶段的血细胞无明显差异。与形 态学检查相似仅能根据数量的差异来判断病变细胞的属性。