黄曲霉毒素M1免疫亲和柱操作手册-1
黄曲霉毒素B1免疫亲和柱使用说明书
苏微黄曲霉毒素B1免疫亲和柱使用说明书【产品用途】黄曲霉毒素B1（AFB1）免疫亲和柱适合于和AFB1酶免分析试剂盒、HPLC或液质结合使用，定量检测AFB1。
用该免疫亲和柱净化样品，提高了样品的纯度。
纯化后的样品可用不同的分析方法测定。
【适应范围及产品性能】用于定性、定量检测谷物、粮油、饲料等样本中AFB1时的样本前处理。
柱吸附能力：≥50ng/支，≥100ng/支（可根据要求选择相应柱容量）；回收率：75%~90%。
柱内凝胶：Protein A琼脂糖凝胶特点：载量大，单抗定向偶联，易洗脱，回收率高。
【测定原理】本产品测定的基础是抗原抗体反应，黄曲霉毒素B1（AFB1）单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的AFB1经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过AFB1免疫亲和柱，在免疫亲和柱内，AFB1与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。
最后采用甲醇洗脱AFB1，然后进行相关分析。
【产品组成】标准品（选配）；25支/盒；1mL柱管/支；说明书1份；【所需材料】（不提供）（1）设备及器皿耗材：天平、粉碎机、离心机、高速均质器（18000r/min~22000 r/min）；量筒、50mL玻璃漏斗、微量移液器（100μL~1000μL）、定量滤纸、玻璃微纤维滤纸（直径11cm，孔径1.5μm）、20mL玻璃注射器等。
（2）试剂：甲醇（色谱级）、pH7.4磷酸盐缓冲液（PBS）、pH7.0磷酸盐缓冲液（PBS）、吐温-20、蒸馏水或去离子水。
【样品制备及净化】（1）谷物、花生及其制品----准确称取25.0g粉碎的样品，加入5.0g氯化钠，----与125.0mL甲醇-水溶液（7+3）混合，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min，----用定量滤纸过滤，----准确移取15mL滤液并加入30mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。
----准确移取15.0mL混合液进行过亲和柱。
M1免疫亲和柱使用说明书
2013版苏微黄曲霉毒素M1免疫亲和柱使用说明书【产品用途】免疫亲和柱可选择性吸附样品液中的黄曲霉毒素M1, 从而对黄曲霉毒素M1样品起到特异性的纯化作用, 过柱净化后的样品液可直接用于高效液相色谱进行黄曲霉毒素M1含量的检测。
亲和柱与HPLC配合使用可达到快速测定的目的, 以改善信噪比，可提高检测方法的准确度。
【产品性能】柱吸附能力：≥100ng/支；回收率：75%~90%。
【测定原理】本产品测定的基础是抗原抗体反应，黄曲霉毒素M1（AFM1）单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的AFM1经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过AFM1免疫亲和柱，在免疫亲和柱内，AFM1与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。
最后采用乙腈洗脱AFM1，然后进行相关分析。
【产品组成】标准品（选配）；20支/盒，3mL柱管/支说明书1份；【所需材料】（不提供）（1）设备及器皿耗材：天平、粉碎机、离心机、高速均质器（18000r/min~22000 r/min）；量筒、50mL 玻璃漏斗、微量移液器（100μL~1000μL）、定量滤纸、玻璃微纤维滤纸（whatman934-AH，直径11cm，孔径1.5μm）、20mL玻璃注射器等。
（2）试剂：乙腈（色谱级）、蒸馏水或去离子水。
【样品制备及净化】----乳：将试样在水浴中加热至35℃~37℃。
用中速定性滤纸过滤（根据情况，可使用多层滤纸进行过滤），或者在7000rpm离心15min。
至少收集20mL试样。
----乳粉：称取10g样品（精确至0.01g）,置于250mL 的烧杯中。
将50mL已预热到50℃的水加入乳粉中，搅拌溶解。
若乳粉不能完全溶解，将烧杯在50℃的水浴中放置至少30min，仔细混匀。
将溶解的乳粉冷却至20℃，移入100ml容量瓶中，用少量的水分次淋洗烧杯，淋洗液一并移入容量瓶中，再用水定容至刻度。
用中速定性滤纸过滤（根据情况，可使用多层滤纸进行过滤），或者在7000rpm离心15min。
乳和乳制品中黄曲霉毒素M1的测定—免疫亲和层析净化液相色谱串联质谱法(二)
乳和乳制品中黄曲霉毒素M1的测定—免疫亲和层析净化液相色谱串联质谱法（二）5.1 液相色谱—质谱联用仪，带电喷雾离子源。
5.2 色谱柱：ACQUITYUPLC HSS T31,柱长100mm,柱内径2.1mm；填料粒径1.8nm,或同等性能的色谱柱。
5.3天平：感量为0.001g和0.00001g。
5.4匀浆器。
5.5 超声波清洗器。
5.6 离心机：转速≥6000转/分钟。
5.7 50mL具塞PVC离心管。
5.8 水浴:温控30℃±2℃,50℃±2℃,温度范围25℃～60℃。
5.9 容量瓶:100mL。
5.10 玻璃烧杯:250mL,50mL。
5.11 刻度的磨口玻璃试管:5mL,10mL,20mL。
5.12 移液管：1.0mL,2.0mL和50.0mL。
5.13 玻璃棒。
5.14 10目圆孔筛。
5.15 250mL分液漏斗。
5.16 100mL圆底烧瓶。
5.17 旋转蒸发仪。
5.18 pH计:精度为0.01。
5.19 250mL具塞锥形瓶。
5.20 免疫亲和柱：针筒式3mL。
5.21 10mL和50mL一次性注射器。
5.22 固相萃取装置(带真空系统)。
5.23 一次性微孔滤头：带0.22um微孔滤膜(水相系)。
6 分析步骤 6.1 试液提取 6.1.1 乳：称取50g(精确至0.01g)混匀的试样，置于50mL具塞离心管(5.7)中，在水浴(5.8)中加热到35℃～37℃。
在6000转/分钟下离心15min。
收集所有上清液，供净化用。
6.1.2 发酵乳(包括固体状、半固体状和带果肉型)：称取50g(精确至0.01g)混匀的试样，用0.5mol/L的溶液(4.11)在酸度计(5.18)指示下调pH至7.4,在9500转/分钟下匀浆(5.4)5min,以下按6.1.1举行操作。
6.1.3 乳粉和粉状婴幼儿配方食品：称取10g(精确至0.01g)试样，置于250mL烧杯中。
MS-Clean黄曲霉毒素M1免疫亲和柱
MS-Clean黄曲霉毒素M1免疫亲和柱
MS-Clean黄曲霉毒素M1免疫亲和柱
概要：
黄曲霉毒素M1属于黄曲霉毒素的一种。
哺乳类动物摄入被黄曲霉毒素B1污染的饲料或食品后，通过羟基化作用转化成黄曲霉毒素M1。
黄曲霉毒素M1的危害主要表现为致癌性和致突变性，对人及动物肝脏组织有破坏作用，可导致肝癌甚至死亡。
由于黄曲霉毒素M1对人类的健康构成了很大威胁，世界各国对该物质在乳及乳制品中的存在均有严格的限量标准。
测定原理：
此免疫亲和柱以抗体-抗原特异性反应为基础，含有和黄曲霉毒素M1抗体结合在一起的凝胶。
上样时，经提取、过滤、稀释后的样品缓慢地通过黄曲霉毒素M1免疫亲和层析柱，在柱内黄曲霉毒素M1与抗体结合，其他物质不会结合而直接流出。
此后洗涤免疫亲和柱，完全除去未结合的其他物质。
最后加入甲醇-乙腈混合液，将黄曲霉毒素M1释放并洗脱，再注入到分析仪器中进行检测。
适用范围及用途：
黄曲霉毒素M1免疫亲和柱适用于基质复杂、限量要求低的样品中黄曲霉毒素M1检测的净化。
可以进行TLC、HPLC、GC、LC-MS/MS、EIA等定量分析，适合乳及乳制品等样品。
液相色谱测定条件：
流动相：乙腈：水 = 25:75
流速：1 mL/min
进样量：20-500 uL
色谱柱：C18，4.6x250mm
荧光检测波长：发射波长360nm;激发波长430nm
用进样器吸取黄曲霉毒素M1标准工作溶液注入高效液相色谱仪，在上述色谱条件下测定标准溶液的响应值（峰高或峰面积），得到黄曲霉毒素M1标准溶液的高效液相色谱图。
产品参数及规格：
如果需要购买免疫亲和柱，欢迎搜索摩尔科学。
黄曲霉素M1试剂盒说明书1
Bioxl Diagnostic Systems,Inc2814,Brigadoon Dr.#21 1、 概述 黄曲霉素是霉菌的产物，高毒性并致癌。
黄曲霉素M 1不是微生物而是在动物体中由黄曲霉素B 1转化形成的。
当奶牛食用有黄曲霉素B 1污染的饲料后，通过消化和分泌，黄曲霉素就会转化为羟基化的黄曲霉素M 1，绝大部分分泌到乳汁中。
因此，黄曲霉素M 1浓度反映了饲料中黄曲霉素B 1的含量。
欧盟对奶中的黄曲霉素M 1限量是0.05ppb （50ppt ）。
用竞争酶联免疫分析法检测生物样本中的黄曲霉素M 1。
所有酶联免疫分析的试剂包括标准品都由试剂盒提供。
检测数量：96孔（含标准品孔） 检测时间：20分钟 2、 原理 分析在包被有黄曲霉素M 1抗体的聚苯乙烯微孔中进行。
黄曲霉素M 1标准溶液和样品加入微孔，在温浴过程中，游离的黄曲霉素M 1分子与抗体结合，没有结合的物质在清洗步骤中被清洗，第二次温浴时已经加入HRP-黄曲霉素M 1酶标物，它将没有结合的抗体位点全部覆盖。
通过加入基底物质可以确定酶活性，第三次温浴时酶将无色的显色剂转变成一种蓝色，加入终止液使蓝色变成黄色，用酶标仪在450nm 测定吸光度，通过颜色深浅不同换算成黄曲霉素M 1的浓度值。
3、 应用范围 黄曲霉素M 1ELISA 试剂盒用于定量检测牛奶和奶酪中的黄曲霉素M 1。
4、 提供的试剂 1、微孔板：96孔（12×8，可拆卸） 2、酶标物：冻干粉一瓶 3、酶标物稀释液：13ml 一瓶 4、样品稀释液：一瓶（使用时加入40mL 双蒸水充分溶解后使用） 5、清洗液（10×）：50ml 一瓶 6、显色剂：13ml 一瓶 7、终止液：13ml 一瓶 8、黄曲霉素M 1标准品溶液：6×1ml/瓶（0ng/mL ，0.005ng/mL ，0.03ng/mL ，0.15ng/mL ，0.5ng/mL ， 2ng/mL ）5、 试剂盒未提供的材料 1、10-1000 ul 不同规格的微量移液器 2、50-300ul 多道移液器 3、酶标仪（有450nm 滤光片） 4、离心机（如果离心速度低最好使用低温离心机） 5、带盖试管6、涡旋振荡器7、正己烷8、二氯甲烷9、离心管 10、去离子蒸馏水 6、 试剂贮存 1、试剂盒贮存在2～8℃，切勿冰冻 2、未用完的微孔板反应该密封干燥2～8℃保存 7、 注意事项1、终止液具有刺激性，显色剂具有毒性，切勿接触皮肤2、试剂盒过期后不得使用3、请勿混用不同批号的试剂 8、 工作溶液准备 1、酶标物工作液：使用时精确加入12mL 酶标物溶解液充分溶解，使用前恢复至室温，并且摇匀，切勿涡旋振荡。
黄曲霉毒素净化柱使用手册最新
黄曲霉毒素B/G免疫亲和净化柱使用手册目录1、AflaCLEAN TM黄曲霉毒素免疫亲和柱说明书2、样品处理方法3、柱后衍生技术4、实验操作注意事项5、主要技术指标和参数6、黄曲霉毒素分析实验室配置7、参考文献8、欧盟相关规定中黄曲霉毒素的限量表9、附件AflaCLEAN TM黄曲霉毒素免疫亲和柱说明书LCTech 公司的AflaCLEAN TM免疫亲和净化柱采用单克隆抗体技术，预先在净化柱壁涂布了黄曲霉毒素B和G的抗体，当提取样品液过净化柱时，黄曲霉毒素就会被吸附保留在柱子上，而其他杂质则被排除，然后再用甲醇将黄曲霉毒素从净化柱上洗脱下来进行黄曲霉毒素检测分析的前处理，适用于食品，饲料以及相关原料中黄曲霉毒素检测时，样品的净化处理，特点是适用范围广，平行性好，回收率高，重新性好，操作简单，性价比高。
一、AflaCLEAN TM黄曲霉毒素免疫亲和柱产品组成1、AflaCLEAN TM净化柱25支/盒2、批次证书和使用说明书二、实验准备1、样品处理方法：详见：“样品处理方法”2、试剂配制（1）样品提取溶剂：甲醇/水（4/1，v/v）（2）5mmol磷酸盐缓冲溶液（PBS）（pH7.2）母液配制：1）称取50.14gNa2HPO4.12H2O溶解于700ml水中。
2）称取9.66gNaH2PO4.1H2O溶解于350ml水中。
3）将上述两种溶液进行混合并加入42.5gNaCl，配制成pH7.2 5mmol 磷酸盐缓冲溶液（3）1mmol磷酸盐缓冲溶液(PBS)（pH7.2）工作液配制：取200ml 的5mmol磷酸盐缓冲溶液（pH7.2）稀释于800ml水中。
（4）磷酸盐缓冲溶液（PBS）/吐温(Tween)配制：取8ml吐温-20稀释于92mlpH7.2磷酸盐缓冲溶液中（5）HPLC 流动相配制：水/甲醇/乙腈（60/30/15,v/v）三、实验步骤1、净化柱平衡：将净化柱于室温中放置15min以上，平衡至室温。
(整理)黄曲霉毒素B1免疫亲和柱使用说明书
苏微黄曲霉毒素B1免疫亲和柱使用说明书【产品用途】黄曲霉毒素B1（AFB1）免疫亲和柱适合于和AFB1酶免分析试剂盒、HPLC或液质结合使用，定量检测AFB1。
用该免疫亲和柱净化样品，提高了样品的纯度。
纯化后的样品可用不同的分析方法测定。
【适应范围及产品性能】用于定性、定量检测谷物、粮油、饲料等样本中AFB1时的样本前处理。
柱吸附能力：≥50ng/支，≥100ng/支（可根据要求选择相应柱容量）；回收率：75%~90%。
柱内凝胶：Protein A琼脂糖凝胶特点：载量大，单抗定向偶联，易洗脱，回收率高。
【测定原理】本产品测定的基础是抗原抗体反应，黄曲霉毒素B1（AFB1）单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的AFB1经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过AFB1免疫亲和柱，在免疫亲和柱内，AFB1与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。
最后采用甲醇洗脱AFB1，然后进行相关分析。
【产品组成】标准品（选配）；25支/盒；1mL柱管/支；说明书1份；【所需材料】（不提供）（1）设备及器皿耗材：天平、粉碎机、离心机、高速均质器（18000r/min~22000 r/min）；量筒、50mL玻璃漏斗、微量移液器（100μL~1000μL）、定量滤纸、玻璃微纤维滤纸（直径11cm，孔径1.5μm）、20mL玻璃注射器等。
（2）试剂：甲醇（色谱级）、pH7.4磷酸盐缓冲液（PBS）、pH7.0磷酸盐缓冲液（PBS）、吐温-20、蒸馏水或去离子水。
【样品制备及净化】（1）谷物、花生及其制品----准确称取25.0g粉碎的样品，加入5.0g氯化钠，----与125.0mL甲醇-水溶液（7+3）混合，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min，----用定量滤纸过滤，----准确移取15mL滤液并加入30mL水稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。
----准确移取15.0mL混合液进行过亲和柱。
黄曲霉毒素M1操作规程
黄曲霉毒素M1操作规程一、样品的前处理将适量的液态奶于12000r/min下离心10min,取下层奶样直接检测即可。
二、溶液的配制1、标品稀释液：用去离子水将AFM1浓缩标品稀释液按1：3体积比进行稀释，即1份AFM1浓缩标品稀释液加3份去离子水。
用于提取样本的稀释，标品稀释液在4℃环境可保存一个月。
2、洗涤工作液：用去离子水将浓缩洗涤液（10×）按1:9体积比进行稀释，即1份浓缩洗涤液（10×）加9份去离子水。
用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在4℃环境可保存一个月3、6个不同浓度的标准液：取6个1.5ml离心管，标为1到6号，分别加入995μl,400μl, 400μl,400μl, 400μl, 400μl标品稀释液,按照下表配制标准品。
如取5μl高浓度黄曲霉毒素M1标准品（810ppb）加入1号管，与995μl标品稀释液混匀，制备成4.05ppb黄曲霉毒素M1标准液。
取200μl配好的4.05ppb黄曲霉毒素M1标准液，加入2号管，与400μl标品稀释液混匀，制备成1.35ppb黄曲霉毒素M1标准液。
取200μl配好的1.35ppb黄曲霉毒素M1标准液，加入3号管，与400μl标品稀释液混匀，制备成0.45ppb黄曲霉毒素M1标准液。
依次稀释，制备成1.35ppb、0.45ppb、0.15ppb、0.05ppb、0ppb的标准液，（见下表）。
标准品现配现用。
配制好的标准液请在一周内用完（4℃存放）。
三、检测步骤1.、测前须知：（1）、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温（20~25℃）。
（2）、使用之后立即将所有试剂放回2~8℃。
（3）、黄曲霉毒素M1可致癌，应戴手套操作。
2、操作步骤：（1）、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20~25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均需摇匀。
（2）、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封，保存于2~8℃。
黄曲霉M1检测方案2
黄曲霉毒素M1检测方案方案一、免疫亲和层析净化高效液相色谱法（GB 5413.37-2010第二法）一、原理：亲和柱内含有的黄曲霉毒素M1特异性单克隆抗体交联在固体支持物上，当试样通过亲和柱时，抗体选择性的与黄曲霉毒素M1(抗原)键合，形成抗体—抗原复合体。
用水洗柱除去柱内杂质，然后用洗脱剂洗脱吸附在柱上的黄曲霉毒素M1，收集洗脱液。
用带有荧光检测器的高效液相色谱仪测定洗脱液中黄曲霉毒素M1含量。
二、所需仪器1、高效液相色谱仪（配荧光检测器—具有365 nm激发波长、435 nm发射波长，在适当的色谱条件下能够测定0.02 ng 的黄曲霉毒素M1(相当于5倍噪音)）2、离心机（转容50ml角转子，转速10000r/min）3、氮吹仪4、固相萃取装置（带真空系统）5、水浴锅（温控30℃±2℃，50℃±2℃；温范25℃~60℃）6、天平：感量为0.01 g7、PH计：精度0.018、旋转蒸发仪（奶油样品制备）9、紫外分光光度计（标液浓度的校正，波长范围为200nm~400nm）三、试剂及耗材1、黄曲霉毒素M1免疫亲和柱2、黄曲霉毒素M1标准品3、反相色谱柱C18 4.6*250 加有反相色谱材料的保护柱5、移液管：1ml, 2ml, 50ml6、烧杯：50ml, 250ml7、分液漏斗：250ml（干酪和奶油样品制备）8、容量瓶：100ml9、一次性注射器：10ml, 50ml10、针式过滤器（水系）0.22um，Φ1311、乙腈(CH3CN)：色谱醇12、甲醇：分析醇13、三氯甲烷：分析醇14、石油醚：分析醇15、带刻度的磨口锥形玻璃试管：5 mL、10 mL、20 mL16、离心管：50ml四、操作方法依据GB 5413.37-2010第二法方案二、酶联免疫吸附法（可定性、定量检测牛乳及其他乳制品等样本中的黄曲霉毒素M1）一、原理标准溶液和样品试液加入各自板孔，游离的黄曲霉毒素M1与微孔中包被的黄曲霉毒素M1抗体结合，没有结合的物质在洗涤中被清除。
黄曲霉毒素 M1M1 免疫层析亲和柱产品说明书 M1M1 免疫层析亲和柱 产品说明书
PriboFast IAC 中文说明书产品产品用途用途用途：：免疫亲和层析柱可选择性吸附样品液中的黄曲霉毒素M1，从而对黄曲霉毒素M1样品起到非常针对性的纯化作用，过柱净化后的样品液可直接用于液相进行黄曲霉毒素M1含量的检测。
亲和层析柱与HPLC 配合使用可达到快速测定的目的，以改善信噪比，可提高检测方法的准确度。
产品产品概述概述概述：：黄曲霉毒素（AFT ）是一类真菌（如黄曲霉和寄生曲霉）的有毒的代谢产物，它们具有很强的致癌性，是一种毒性极强的剧毒物质.黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用,严重时,可导致肝癌甚至死亡, 黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的羟基化代谢产物，也是一种强致癌物质。
牛乳及其制品是易受到黄曲霉毒素M1污染的食品之一。
反应反应原理原理原理：：测定的基础是抗原抗体反应，抗体连接在柱体内，样品经过提取、过滤后，缓慢的通过黄曲霉毒素M1免疫亲和层析柱，在免疫亲和柱内毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。
用甲醇洗脱黄曲霉毒素M1，然后注入到分析仪器中用于检测。
适用范围及性能 适用于定性、定量检测牛奶，奶粉，发酵乳，干酪，奶油等样品中黄曲霉毒素M1的样品前处理。
柱容量柱容量≥≥200ng 200ng 回收率回收率≥≥90% 产品产品包装组成包装组成包装组成：：每一个盒中包括25支/50支黄曲霉毒素M1免疫亲和层析柱及1份说明书。
需要的材料但盒中不提供需要的材料但盒中不提供：： 设备 器皿耗材 试剂 HPLC 泵流操作架 空气泵 天平 匀质器 高速粉碎机 超声波发生器 100ml/10mL 量筒 50ml 漏斗 玻璃针筒 样品瓶 100ml/1L 容量瓶 移液器或移液管 50ml 离心管 定量滤纸 玻璃纤维滤纸 圆孔筛 氯化钠(分析纯) 氢氧化钠浓盐酸(分析纯)色谱甲醇色谱乙腈蒸馏水或去离子水 黄曲霉毒M1标准品 石油醚注意事项注意事项：： ----黄曲霉毒素对人体有害，应戴手套操作。
黄曲霉毒素总量免疫亲和柱说明书 (四合一)
苏微黄曲霉毒素总量（B1、B2、G1、G2）免疫亲和柱说明书1、用途：免疫亲和柱可选择性吸附样品液中的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2, 从而对黄曲霉毒素样品起到特异性的纯化作用, 过柱净化后的样品液可直接用于高效液相色谱进行黄曲霉毒素含量的检测。
亲和柱与HPLC配合使用可达到快速测定的目的, 以改善信噪比，可提高检测方法的准确度。
2、产品性能柱吸附能力：≥100ng/支；回收率：75%~90%。
3、测定原理：测定的基础是抗原抗体反应，抗体连接在柱体内，样品中的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2经过提取、过滤、稀释，然后缓慢的通过黄曲霉毒素总量免疫亲和柱，免疫亲和柱中抗体与毒素结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。
用乙腈洗脱黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2，然后注入到分析仪器中用于检测。
4、包装组成：标准品（选配）；20支/盒，3mL柱管/支说明书1份；5、需要的材料但盒中不提供：5.1设备----HPLC----气控操作架----空气泵----天平----组织匀浆机（或摇床）----粉碎机----分样筛----100mL/10mL量筒----50mL漏斗----针筒----快速定性滤纸----微纤维滤纸（Whatman 934-AH）----样品瓶----转接头（配3ml免疫亲和柱使用）5.2 试剂----甲醇，氯化钠，乙腈，蒸馏或去离子水。
6、注意事项：----黄曲霉毒素可致癌，应戴手套操作。
----使用过的容器及黄曲霉毒素溶液最好用次氯酸钠溶液（5%,V/V）浸泡过夜。
----不要使用过了有效日期的免疫亲和柱。
----2~8℃储存，不得冻存。
----使用前，免疫亲和柱需回至室温（22~25℃）7、样品处理：方法：适用于玉米、花生或中药等样品----玉米花生或中药等样品粉碎，过2mm分样筛；----25g过筛粉碎的样品加入5g 氯化钠与125mL 60%甲醇-水溶液混匀；----高速匀浆1min（或用摇床剧烈振荡20min），用快速定性滤纸过滤；----用20mL蒸馏水稀释10mL滤液，再用微纤维滤纸过滤；----取15mL上样检测。
1多功能净化柱和免疫亲和柱工作原理-黄曲霉毒素检测
多功能净化柱和免疫亲和柱工作原理
（黄曲霉毒素检测）
PriboFast 系列多功能净化柱分为柱压型（带玻璃试管）和推杆型（针筒式）两种，以极性、非极性及离子交换等基团组成填充剂，可选择性吸附样液中的脂类、蛋白质类等杂质，毒素不被吸附而直接通过，其操作更为简便，不需要进行活化、淋洗和洗脱操作，只需要直接上样，30秒钟即可完成整个净化过程，效果理想，可同时净化多种毒素，降低检测成本，有效提高检测效率，稳定性强，回收率高，适用于食品、粮食饲料、饮料、中药材等多种复杂样品。
同时我们还提供多毒素符合免疫亲和柱。
PriboFast?免疫亲和柱利用抗原抗体特异性可逆结合的原理, 将抗体与凝胶共价结合，然后填充柱子。
将样品提取溶液过免疫亲和柱,而非目标化合物则沿柱流下,最后用洗脱缓冲液洗脱抗原,从而得到纯化的抗原。
其提纯效率很高,适用于各类复杂样品包括食品、饲料等多种基质。
整个纯化过程30分钟左右。
免疫亲和柱技术及其在黄曲霉毒素等检测中的应用
➢操作步骤——
均质样品
• 盖上搅拌杯的盖 子，高速均质12 分钟
• 也可以置于锥形 瓶中，在摇床上 振动30分钟左右
粗滤与稀释
• 将均质液通过槽 纹滤纸过滤，准 确移取15毫升滤 液并加入30毫升 水稀释
• 将免疫亲和柱 连接于玻璃注 射器下，准确 移取15毫升样 品提取液注入 玻璃注射器中
免疫亲和柱技术及其在黄曲霉毒素检测中的应用
黄曲霉毒素
免疫亲和柱技术在黄曲霉毒素中的应用
•黄曲霉毒素
黄曲霉毒素(Aflatoxin，A)是黄曲霉和寄生曲霉所产生的一组结
构类似的有毒代谢产物，其基本结掏为二呋喃环和香豆素。现已
分离出 AFB 1 ，AFB 2 ， AFG 1 ， AFG 2 ， AFB 2a ， AFG 2a ， AFM 1， AFM 2，AFP 1 等 18 种之多，其中以 AFB 1 的毒性和致 检癌测性标准最：强我。国现对已食证品实中有的A1F7B种1衍的限生量物标．准 其（G中B最276重1-要20的05）包括是：B花1、生、B1、 玉G米1、、G花2生、油M及1等其5制种品，的 被AFWBH1O≤划20为μgⅠ/kgA；类大致米及癌其物他。食用黄油曲的霉AF污B 染1 ≤1范0μ围g/k：g；玉 粮米食、、豆谷类物、、发酵花食生品、的 粮AF食B 1饲≤5料μg、/kg植；物婴儿油代、乳辣品不椒得等检作出。物我。国也规定牛乳
2.3 抗体与基体偶联
基体在与抗体偶联之前，需要进行活化。一般是在基体骨架 上引入亲电基团，然后与间隔分子或抗体上的亲核基团共价结 合，需要说明的是在小配体的亲合色谱中，常在基体和配体之 间插入一个间隔臂，以减小空间位阻的影响。
常用的活化试剂包括溴化氰、环氧氯丙烷和维生素H酰肼等 抗体与活化基体的偶联方式有随机偶联与定向偶联两种。
免疫亲和柱净化-液相色谱串联质谱法检测乳及乳粉中的黄曲霉毒素M1
１ ． ３ ． ６ 质谱 条 件 表 ２ 离子 选 择 参 数 表
１ ． ２ ． ４乙酸 铵
１ ． ２． ５ Ｋ２ ＨＰ Ｏ４
１ ． ２． ６ ＫＨ２ Ｐ Ｏ４
１ ． ２ ． ７磷酸缓冲 溶液 ： 称取 ５ ２ ． ７ ｇ Ｋ ２ Ｈ Ｐ Ｏ ４ ， 备注：ａ 代表定量离子 ３ ０ ． ２ ｇＫ Ｈ２ Ｐ Ｏ４ ， 溶于 ５ ０ ０ｍＬ中，用 ｌ Ｍ 氢氧 １ ． ４ 检 测 方 法 化钠或盐酸溶液调节 Ｐ Ｈ＝ ７ ，水定 容至 １ Ｌ。 称取 ２ Ｏ ｇ（ 精确至 Ｏ ． ０ ｌ ｇ ）试 样 （ 或 ｌ ０ ｇ １ ． ２ ． ８黄 曲霉毒素 Ｍ－ 标准品：纯度＞ ９ ８ ％。 固体试样 ，加 １ ０ ｍＬ水 溶解 ）于 ５ ０ ｍＬ离心 图 １黄曲霉毒素 Ｍ ， 色谱峰 （ Ｍ Ｒ Ｍ模式 ） １ ． ２ ． ９免疫 亲 和 柱 ： Ｎｅ ｏ Ｃ ｏ ｌ ｕ ｍｎ 黄 曲霉 毒 管 中 ，加 入 ５ ｇ Ｎａ Ｃ １ ，２ ０ ｍＬ 乙腈 超 声 提 取 我 们 选 择 了 来 自不 同地 区 和 不 同批 号 的 素 （ ０ １ ／ ０ ８ ） 。 １ ０ ｍｉ ｎ ，４ ０ ０ ０ ｒ ｐ ｍ离心 ５ ｍｉ ｎ ，取 上 清 溶 液 ， １ ． ２ ． １ ０ １ Ｏ ％乙腈水溶液：在 ４ ５ ０ ｍＬ水 中 几 种 常 见 乳 制 品 的 阴性 样 品 进 行 添 加 测 定 。 称质量五等分 ，取一份加入 ４ ０ ｍＬ磷酸缓冲 加入 ５ ０ｍＬ乙腈 ，混匀 。 结果 如 表 ３所 示 。 溶液 ，混 匀 。４ ０ ０ ０ ｒ ｐ ｍ 离 心 ５ｍｉ ｎ ，取 上 清 待 １ ． ２ ． １ １ ５ ｍｍｏ ｌ ／ Ｌ乙酸铵 水溶液 （ 含０ ． １ ％ 净化 。 甲酸 ） ：称 取 Ｏ ． ３ ８ ５ ｇ乙 酸铵 ，溶 于 １ ０ ０ ０ ｍＬ 黄 曲霉毒素 免疫亲和柱 ，去掉柱子的顶 水中，加入 ｌ ｍＬ甲酸 ，混匀 ，超声 ３ ０ｍｉ ｎ 。 表 ｌ几种乳制 品黄 曲霉毒素 Ｍ 。 残留量测定结果 （ ｎ ＝ ３ ）
免疫亲和柱-高效液相荧光检测牛奶和奶粉中的黄曲霉毒素M1
该法快速 、 简便 、 准确 、ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ可靠 ， 简 化 了现 有 国标 法 中 的 操 作 步 骤 ， 适 合 于 牛 奶 和 奶 粉 中 ＡＦ Ｍ１的定 量 分 析 。
关键词 ： 免疫亲 和柱 ； 高效液相 ； 黄 曲霉 毒 素 Ｍ１ （ ＡＦ Ｍ１ ） ； 牛奶 ； 奶 粉
中图分类号 ： Ｒ１ ５ ５ ． ５ ７ 文献标识码 ： Ｂ 文章编号 ： １ ０ ０ ６ —９ ０ ７ ０ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ５ —０ ０ ６ １ —０ ２
１ ． ３ ． ３ 提取 与 纯化 ： 将 一 次性 ５ Ｏ ｍＬ注 射 器 与 亲 和 柱顶部连接， 再 与 固相 萃 取 真 空仪 连接 起 来 ， 用 移 液
管 移取 按 １ ． ３ ． １处理 的样 品 ５ ０ ｍＬ或 按 １ ． ３ ． ２处 理 的样品 ４ ０ ｍＩ 至注射器 中， 调节真空系统， 控 制 试 样 以２ ～３ ｍＬ ／ ｒ ｎ ｉ ｎ的稳定 流速 过柱 ， 待过 完后加 ２ ０ ｍＬ 水， 以稳定 流速洗 柱 ， 最 后 抽 干亲 和 柱 。取 下 亲 和 柱 ，
（ ｗ ＨＯ ／ Ｉ ＡＲ Ｃ ） 将 ＡＦ Ｍ１列 为 Ｉ 类致 癌化合物 ， 许 多
国家也 确定 了乳 和 乳 制 品 中 的 ＡＦ Ｍ１的 法 定 限 量 标 准 。 目前 ＡＦ Ｍ１的测定 方法 有 薄层 层 析法 、 液相 色谱
一
串联 质谱 法 、 高效 液 相 法 、 荧光分光度法、 双 流 向酶
１ ． １ 仪 器与试 剂 高效液相色谱仪 ： ＨＰ １ １ ０ ０型 ， 荧
光检 测 器 （ 美 国安 捷伦 公 司 ） ； ＡＦ Ｍ１免 疫 亲 和 柱 ： Ｌ ｏ ｔ Ｆ １ ２ ０ ６ Ｍ１ ， 北京 华 安麦 科 生 物 技 术 有 限 公 司 ； 固相
中检食安：黄曲霉毒素B1B2G1G2M1M2免疫亲和柱
黄曲霉毒素B1/B2/G1/G2/M1/M2免疫亲和柱【用途】免疫亲和柱可选择性吸附样品液中的黄曲霉毒素，从而对样品起到非常针对性的净化作用，过柱净化后的样品液可直接用于HPLC 分析。
亲和柱与HPLC 配合使用可达到快速测定的目的，以改善信噪比，可提高检测方法的准确度。
本亲和柱可用于样品中黄曲霉毒素(B1、B2、G1、G2、M1、M2)的样品提取、净化。
【原理】测定的基础是抗原、抗体反应，抗体连接在柱体内，样品中的黄曲霉毒素经过提取、过滤、稀释，然后缓慢的通过黄曲霉免疫亲和柱，在免疫亲和柱内毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。
用甲醇洗脱黄曲霉毒素，然后注入到分析仪器中用于检测。
【柱容量及规格】柱容量：AFB1------300ngAFB2------300ngAFG1------300ngAFG2------300ngAFM1------100ngAFM2------100ng规格：1ml------25/50支装3ml------25/50支装【包装组成】每一个盒中包括各种规格黄曲霉毒素免疫亲和柱及1 份说明书。
【设备及耗材】（需要的材料但包装中不提供）----HPLC----衍生装置：如光化学衍生器、电化学衍生器、碘衍生装置----气控操作架----空气泵----天平----高速均质器（最高转速≥10,000r/min）或摇床----粉碎机----高速冷冻离心机（乳品检测用，可设置10℃，7,500r/min）----恒温培养箱或水浴锅（乳品检测用，可设置35℃～37℃）----分样筛：1mm 孔径----量筒：100mL/10mL----漏斗：50mL----注射器：10 mL/20mL----移液器或移液管：1mL----均质杯（或250mL 具塞锥型瓶）----样品瓶----快速定性滤纸----离心管：50ml（乳品检测用）----微纤维滤纸（Whatman 934-AH【贮藏条件及有效期】贮藏条件：2～8℃。
黄曲霉毒素分析方法——
黄曲霉毒素分析方法——-免疫亲和净化柱/UVE法一、免疫亲和净化柱/UVE法简介：利用德国LCTech品牌AflaCLEAN 净化柱可以将黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2专一分离出来，然后用HPLC/FLD分别测定黄曲霉毒素 B1、B2、G1、G2。
二、免疫亲和净化柱/UVE法特点：专用AflaCLEAN 净化柱使得样品制备与提取简单快速，成本低灵敏—HPLC可至30ppt—200ppt(黄曲霉毒素B1)。
简便实用，衍生化没有衍生试剂消耗（通常柱后衍生均需要使用衍生试剂，分析成本高，操作麻烦，仪器故障率较高）回收率高三、免疫亲和净化柱/UVE法操作步骤简介：1、提取样品：研磨、称重50g样品；用甲醇/水（80/20 V/V）混合物将样品高速混匀 1 分钟。
2、过滤：将提取的样品滤膜过滤，然后再过0.4 μm滤膜。
3、吸附、淋洗：将滤液2 ml加到 8ml PBS 缓冲液（pH 7.2）后，通过AflaCLEAN 净化柱，流速不大于1 mL/min；用10ml水清洗亲合柱；用甲醇1ml 两次将黄曲霉毒素从亲合柱上淋洗下来，并收集于HPLC进样小瓶中。
4、测定：HPLC直接进样，在经过柱分离后，被UVE衍生化，被荧光检测器记录各种黄曲霉毒素的浓度。
四、UVE™和 HPLC参数UVE™波长：254 nmHPLC-柱： 150 x 4.6 mm; C-18洗提液: 水 / 乙腈 / 甲醇 (60 / 15 / 30 // v / v / v)流量：1.0 mL/min柱温： 30 °C进样体积： 20 – 100 μLλ-激发波长： 365 nmλ-发射波长： 440 nm五、主机配置德国LCTech公司 UVE™主机，配有1ml反应池，9v 紫外灯254nlUVE™主机黄曲霉素免疫亲和AflaCLEAN净化柱黄曲霉素 ELISA试剂盒以下为德国LCTech公司黄曲霉素相关产品订购信息：以下为德国LCTech公司黄曲霉素相关产品订购信息：。
免疫亲和柱操作流程
免疫亲和柱操作流程一、准备工作。
在开始操作免疫亲和柱之前呢，咱们得先把要用的东西都准备好哦。
就像做饭之前得把食材和厨具都备好是一个道理呀。
首先呢，得有免疫亲和柱，这可是主角呢。
然后就是咱们的样品啦，不管是液体样品还是经过处理的固体样品提取物之类的，都要准备好哦。
还有呀，像移液枪、洗耳球这些小工具可不能少，它们就像小助手一样，在操作过程中能帮大忙呢。
另外，收集管也得准备好，毕竟最后要把处理好的东西收集起来呀。
二、样品处理。
这一步也很重要哦。
如果是液体样品，那要看看有没有杂质呀。
要是有一些大颗粒或者其他不应该在里面的东西，可能得先过滤一下呢。
就像喝果汁，如果里面有果肉块太大，喝起来就不太舒服啦，所以要把它处理得更细腻一些。
要是固体样品的话，那可就复杂一点喽。
要把固体变成可以用的提取物，这可能就需要用到一些化学试剂或者特殊的处理方法啦。
比如说要把它溶解在合适的溶剂里，这个溶剂的选择也很有讲究呢，就像给衣服选合适的洗涤剂一样，得选能把样品“洗干净”的溶剂。
而且呀，处理完之后还要保证样品的浓度合适，不能太浓也不能太稀，太浓了免疫亲和柱可能会“吃不消”，太稀了又可能检测不到东西啦。
三、免疫亲和柱的平衡。
免疫亲和柱就像一个小房子，在住人之前得打扫一下，让它处于一个比较好的状态。
这时候呢，要用合适的缓冲液来平衡免疫亲和柱。
这个缓冲液就像清洁剂一样，能把免疫亲和柱里面的一些残留物质清理掉，同时也能让它适应接下来要处理的样品的环境。
把缓冲液慢慢地加到免疫亲和柱里，让它缓缓地流过柱子，就像给小房子慢慢浇水一样，要温柔一点哦。
一般来说呢，可能需要加个几毫升的缓冲液，具体的量可以根据免疫亲和柱的说明书来确定啦。
四、上样。
好啦，准备工作都做好了，就可以把咱们的样品加到免疫亲和柱里啦。
这个过程也要小心一点哦。
如果是用移液枪加样的话，要控制好速度和量。
就像给花浇水，不能一下子倒太多，也不能太慢。
慢慢地把样品加到免疫亲和柱里，让样品和免疫亲和柱里的物质充分接触。
免疫亲和柱-荧光分析法测定鲜乳和乳粉中的黄曲霉毒素M_1
免疫亲和柱-荧光分析法测定鲜乳和乳粉中的黄曲霉毒素M_1褚庆华;徐超一;刘岩;阎军;王雄【期刊名称】《检验检疫科学》【年(卷),期】2003(13)2【摘要】采用免疫亲和柱 -荧光光度法快速测定了鲜牛乳及乳粉中黄曲霉毒素M1。
试样经过离心、脱脂、过滤后 ,滤液经过键合有黄曲霉毒素M1特殊抗体的免疫亲和柱净化 ,此抗体对黄曲霉毒素M1具有专一的识别能力 ,黄曲霉毒素M1键合在分离柱中的抗体上。
用甲醇 /水 (10 :90 )将免疫亲和柱上杂质除去 ,以甲醇 /水(80 :2 0 )通过分离柱洗脱 ,加入溴溶液衍生 ,以提高测定灵敏度。
衍生化后的洗脱液于荧光光度计中测定黄曲霉毒素M1,检测低限为0 .0 1μg/kg ,在 0 .1- 1.0μg/kg范围内 ,回收率为 89.6 % - 96 .1% ,变异系数为 0 .5 2 % - 5 .8% ,分析一个样品的时间小于 30min .,分析过程中不使用黄曲霉毒素M1标准物质。
用FAPAS的参考标样证实了检测方法、分析仪器和操作人员得到的结果是准确可靠的。
本方法具有准确、简单、快速、安全等优点 ,可以满足少量和批量样品的检测需要。
【总页数】3页(P41-42)【关键词】鲜乳;乳粉;免疫亲和柱—荧光分析法;测定;黄曲霉毒素;食品检验【作者】褚庆华;徐超一;刘岩;阎军;王雄【作者单位】上海检验检疫局;北京检验检疫局;北京中检维康技术有限公司【正文语种】中文【中图分类】TS252.7【相关文献】1.免疫亲和柱净化-柱后衍生高效液相色谱荧光法测定食用油中黄曲霉毒素B1 [J], 张羽;吴小丽2.免疫亲和柱净化-光化学衍生高效液相色谱荧光法测定植物油中黄曲霉毒素B1的含量 [J], 周贻兵;刘利亚;李磊;林野;李雪春3.免疫亲和柱净化-液相色谱串联质谱法检测乳及乳粉中的黄曲霉毒素M1 [J], 李春梅4.免疫亲和柱-荧光分析法测定鲜乳和乳粉中的黄曲霉毒素M1 [J], 褚庆华;徐超一;刘岩;阎军;王雄5.免疫亲和柱净化-HPLC柱后光化学衍生荧光法测定花生饮料中的黄曲霉毒素B1 [J], 邹沫君;陈诚因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
黄曲霉毒素M1免疫亲和柱工作手册
一、溶剂的配置和准备：
1．蒸馏水/去离子水（配合液相使用）；
2．色谱级甲醇、乙腈；
3．磷酸盐缓冲液
1L配方pH7.4：磷酸二氢钾(KH2PO4)0.27g，磷酸氢二钠(Na2HPO4)1.42g，氯化钠(NaCl)8g，氯化钾(KCl)0.2g，加去离子水约800mL充分搅拌溶解，然后加入浓盐酸调pH至7.4，最后定容到1L。
4．黄曲霉毒素M1标准品（货号：TSL-143，浓度为0.5 μg/ml）
5．氢氧化钠、浓盐酸（用于调节pH）
二、其他耗材及设备的准备
1.滤纸；
2.免疫亲和柱架或固定支座；
3.注射器（建议玻璃材质，易于清洗，10 ml）或5 ml或10 ml枪头；
4.1升容积的搅拌器；
5.离心机；
6.量筒，漏斗，移液管，烧杯，带螺盖的瓶子等玻璃器具；
三、标准曲线的配制：
黄曲霉毒素M1总量液态标准品：500 ng/ml 100%乙腈溶液。
取100μl 500 ng / ml溶液加入甲醇：乙腈：水溶液20:30:50 v/v/v至500μl，得到100ng/ml 的溶液。
绘制一条3点的校准曲线：
取50 μl 100 ng / ml溶液加入甲醇：乙腈：水溶液20:30:50 v/v/v至2.5 ml（=2 ng / ml）。
取1 ml 2 ng / ml溶液加入甲醇：乙腈：水溶液20:30:50 v/v/v至2 ml（=1 ng / ml）。
取1 ml 1 ng / ml溶液加入甲醇：乙腈：水溶液20:30:50 v/v/v至2 ml（=0.5 ng / ml）。
每种取100 μl注射进HPLC系统。
四、样品回收率的测定
--针对奶粉添加浓度为0.5 ppb的样品：
取50 μl浓度为100 ng/ml的标准品溶液，加入到10 g阴性奶粉样品中，（此样品最后上HPLC 的浓度相当于1 ng/ml）
--针对奶添加浓度为0.1ppb的样品：
取50 μl浓度为100 ng/ml的标准品溶液，加入到50ml阴性奶样品中，（此样品最后上HPLC 的浓度相当于2 ng/ml）
五、样品处理
A）牛奶
-- 加热牛奶至35 - 37 ℃，用Waterman 4号滤纸或者Waterman 113号滤纸过滤
或者在4000 rpm下离心15分钟。
-- 收集至少50 ml牛奶（如果必要，使用多层滤纸）。
B）奶粉
-- 称取10 g奶粉至1个250 ml的烧杯中
-- 加热100 ml蒸馏水至30 - 40 ℃，移取80 ml预热的蒸馏水至奶粉中，不断地搅拌得到均匀的混合物。
将其转移到100 ml量筒中，并加入预热的蒸馏水至100 ml
-- 用Waterman 4号滤纸或者Waterman 113号滤纸过滤
或者在4000 rpm下离心15分钟。
以下步骤奶与奶粉一致
-- 取50ml过滤或离心后的样品，分5次加入到注射器中，其中注射器需与免疫亲和柱相连接，以2 ml/min的流速（或在以重力下的自然速度）缓慢，稳定的通过免疫亲和柱。
-- 用10 ml的PBS 缓冲液以5 ml/min的流速冲洗柱子，加压吹干柱子确保残余液体流出。
-- 用1.25 ml甲醇乙腈溶液（20:30 v/v）以1滴/秒的流速将毒素从柱子上缓慢洗脱，收集洗脱液在琥珀色玻璃瓶中，此洗脱过程推荐使用“反冲洗”操作。
-- 取1.25 ml的蒸馏水过柱，收集到相同的玻璃瓶中，总体积为2.5 ml。
-- 取100 μl进入HPLC系统进行分析。
六、推荐液相操作条件
保护柱Inertsil ODS-3
5 µm, 4 mm x 10 mm (Hichrom) 或者其他等效的分析柱Inertsil ODS-3V
5 µm, 4.
6 mm x 150 mm (Hichrom) 或者其他等效
的
流动相水：乙腈溶液：甲醇溶液(68 :24:8 v/v)
HPLC 泵用于传输流动相
流速 1.0 ml/min
荧光检测器激发光波长：360nm
发散光波长：430 nm
柱温保持保护柱和分析柱为25 °C
积分仪/数据控制系统供应商提供
进样器自动进样器/Reodyne 进样阀
进样体积100 µl。