实验一 小鼠骨髓 染色体的制备

三、仪器、材料与试剂
1、器材：光学显微镜，恒温水浴锅， 冰箱，低速离心机，解剖器械 （搪瓷解剖盘，探针，剪刀，镊 子），脱脂棉，酒精灯，试管， 试管架，磨口试剂瓶，滴管，注 射器（1ml），染色缸，清洁载玻 片（实验前将载玻片浸入50％酒 精溶液中，置4℃冰箱中至少1h）。
2、材料：小鼠（体重20g左右） 3、试剂：0.85％生理盐水，固定 液(甲醇：冰醋酸以3：1（体积分 数）配制)， Giemsa染液，75％酒 精，蒸馏水， 0.04％秋水仙素， 0.075mol/L KCl。
四、实验步骤
1、取材：小鼠脱颈处死。剪开腹腔，剥离 后肢，由股骨关节处剪断，取下后肢。 剪去骨骼外的肌肉，用棉花蘸75%的酒精 来回搓，直至骨骼外再没有任何肌肉。 剥离股骨，将股骨头的两段剪去少许， 然后用4号针头插入骨髓腔，将股骨穿通。 将带6号针头的注射器插入骨髓1／2处， 然后将股骨浸入到含0.85％生理盐水的 离心管中，操纵注射器将骨髓细胞全部 冲洗到离心管中，直至骨髓腔呈白色为 止。然后轻轻抽打离心管中的细胞，尽 可能使其分散。
实验一 小鼠骨髓细胞染色体 的制备和观察
河北大学 基础医学实验教学中心
医学遗传学实验
小鼠骨髓染色体的制备和观察
• 实验目的 • 实验原理 • 仪器、材料与试剂 • 实验步骤 • 实验报告及思考题
一、 实 验 目 的
1、学会小鼠骨髓染色体的制 备方法 2百度文库小鼠骨髓染色体的基本形态 特征和数目
二、实验原理
2、秋水仙素处理：将细胞悬液加入1ml 秋 水仙素混匀，1000rpm，离心8－10 min， 弃上清。 3、低渗处理：加入5ml在37 OC预热的 0.075mol/L KCl溶液，用吸管轻轻抽打均 匀。置37 OC水浴低渗处理15 min。 4、固定：低渗处理后，立即加入5ml新配 制且预冷的固定液，抽打均匀，然后1000 rpm离心8 min，弃上清。
五、实 验 报 告 及 思 考 题
实验报告 1．找出你制备最好的几个分裂 相视野，数出染色体条数。 2．画出你所看到的一个中期分 裂相的图像。 3．总结制备成功或失败的经验
思考题 1.小鼠染色体形态上有什么特 点？共多少条？ 2.微管特异性药物秋水仙素或 秋水仙胺在本实验中的作用是 什么？ 3.简述有丝分裂4个时期的主 要特点？
染色体是细胞分裂时期(体细胞的 有丝分裂和生殖细胞的减数分裂) 遗传物质存在的特定形式，是染色 体紧密包装的结果。染色体是有机 体遗传信息的载体，对染色体的研 究在生物进化、发育、遗传和变异 中有十分重要的作用。
处于分裂期的细胞经秋水仙素或秋水仙 胺处理，由于阻断了纺锤丝微管的组装， 使细胞分裂停止于中期，此时染色体达 到最大收缩，具有典型的形态。 本实验所用的小鼠骨髓细胞有高度的分 裂活性并且数量非常多，经秋水仙素处 理后，可使分裂的细胞阻断在有丝分裂 中期，再经低渗、固定、滴片染色等处 理，便可制作较好的小鼠骨髓细胞染色 体标本。
5、制备悬液：根据管底细胞的多少，加 入0.3-0.5ml新配制的固定液，用吸管 抽打均匀，形成细胞悬液。 6、制片：将预冷的载玻片倾斜45OC，将 细胞悬液从约30-50cm高处向每个载玻 片上滴1－2滴。吹散，在酒精灯火焰 上过几遍。
7、染色：将载玻片自然风干，用Giemsa 染色，根据染色效果，染色6－10min后， 用蒸馏水轻轻冲洗，晾干。 8、镜检：先用低背倍镜找出分散好的分 裂相视野，再换高倍物镜观察，应该看到 很多中期分裂相细胞，细胞被染成蓝色， 细胞核及染色体被染成淡紫色。