基因工程实验思考题

基因工程实验课程思考题

1.如何正确使用微量移液器？

2.如何准备基因操作中的吸头、eppendorf管等器具，在使用使这些东西时应

注意什么？

3.提染色体DNA的基本原理是什么？在操作中应注意什么？

4.在使用苯酚进行DNA抽提时应注意什么？

5.进行DNA抽提，为什么用pH8.0的Tris水溶液饱和苯酚，显红色的苯酚可

否使用，如何保护苯酚不被空气氧化？

6.在基因工程操作中酚、氯仿的作用是什么？

7.如何检测和保证DNA的质量？

8.如果电泳中发现DNA几乎不移动，你认为可能是什么原因？

9.琼脂糖凝胶电泳中DNA分子迁移率受哪些因素的影响？

10.如何制备核酸琼脂糖凝胶，操作中应注意什么？

11.核酸电泳中上样缓冲液主要成分与作用是什么？

12.进行RNA凝胶电泳时应注意什么问题？

13.说明在RNA电泳中添加甲醛的目的。

14.如何判断RNA的完整性？

15.质粒的基本性质有哪些？质粒载体与天然质粒相比有哪些改进？

16.抽提质粒的基本原理是什么？

17.在碱法提取质粒DNA操作过程中应注意哪些问题？

18.质粒抽提实验中溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各有什么作用。

19.什么是质粒多克隆位点（MCS）？

20.从溶液中回收DNA时，可以用酒精或异丙醇进行DNA的沉淀，酒精或异丙

醇沉淀DNA各有什么不同。

21.用氯仿/异戊醇除去蛋白等作用时，其中异戊醇起什么作用？

22.克隆质粒与表达质粒有什么异同点。

23.你认为抽提质粒的关键步骤是哪几步？

24.在进行DNA重组实验中，有一同学试图利用提取染色体DNA的试剂和方法

从细菌细胞中提取质粒。利用你现有的知识，请你给他参谋一下，他的这种设想是否可行？如果采用提取染色体DNA的试剂和方法，最后得到的是什么样品？

25.有人利用转接后2小时的培养物进行质粒的提取，你认为会出现什么问

题？

26.什么是穿梭质粒，在遗传结构上有何特点？

27.使用溴化乙锭时应注意什么？

28.根据OD260/OD280值如何来判断DNA溶液的纯度？

29.琼脂糖凝胶电泳中DNA分子迁移率受哪些因素的影响？

30.细菌产生的限制性内切酶，为什么不对自己的DNA发生切割作用呢？

31.影响限制性内切酶酶切的因素有哪些？在使用工具酶使应注意些什么？

32.如果一个DNA酶解液在电泳后发现DNA未被切动，你认为可能是什么原

因？

33.简述II型限制性内切酶的命名与写法以及在基因工程中作用及特点。

34.如果在使用工具酶的反应过程中，不慎将某一物质添加过多了，应如何进

行处理。

35.酶切反应中添加酶的量应控制在什么范围内，为什么？

36.什么样的序列可能是酶切位点？

37.基因工程操作中，什么时候使用同尾酶？

38.如果一个DNA酶解液在电泳后发现DNA未被切动，你认为可能是什么原

因？

39.琼脂糖凝胶电泳中DNA分子迁移率受哪些因素的影响？

40.简述DNA凝胶回收试剂盒提纯的原理。

41.进行DNA连接的反应温度为什么采用16℃？

42.不同限制酶处理的DNA片段之间可以进行连接吗？为什么？

43.DNA连接酶有几种？常用的是哪一种？

44.如何防止线性质粒的自身环化？

45.TA克隆的基本原理是什么？

46.产生平末端的PCR产物可以进行TA克隆吗？什么聚合酶扩增的PCR产物

是平末端的？

47.如何培养宿主菌？

48.制备感受态细胞的原理是什么？

49.制备感受态细胞的关键是什么？

50.如果实验中对照组本不该长出菌落的平板上长出了一些菌落，你将如何解

释这种现象？

51.如何制备平板？

52.当质粒加入宿主细胞进行转化，再涂布在含有Amp的LB培养基平板前，

为什么要在LB培养基中培养一个小时？

53.如果DNA转化后，没有得到转化子或者转化子很少，分析原因。

54.DNA转化有哪些方法，各有什么特点？如何提高转化效率？

55.什么情况下转化平板上会出现卫星菌落？为什么会出现卫星菌落？

56.转化后，在含抗生素的平板上长出一片小菌落或菌苔，请分析其中的原因，

并设计实验进行排查。

57.在转化过程中，42℃热击后，如果缺少了LB培养基中培养一个小时这一

步，会出现什么结果？

58.在涂板时，不小心将放三角刮刀烧杯的酒精点燃了，应该如何处理？

59.如何进行转化子的接种操作？

60.在用质粒载体进行外源DNA片段克隆时主要应考虑哪些因素？

61.利用α-互补现象筛选带有插入片段的重组克隆的原理是什么？

62.质粒转化后，如何挑菌落接踵进行阳性克隆的筛选？

63.蓝白筛选中，兰色菌落最有可能含有重组子？还是白色菌落最可能含有重

组子？为什么？

64.要进行转化子的兰白筛选，对宿主、质粒各有什么要求？

65.双脱氧法测序的基本原理是什么？

66.简述全自动测序的机理。

67.在进行转膜时应注意什么问题？

68.在进行Southern杂交时，DNA酶切反应不彻底会有何结果？DNA发生降解

有何影响？

69.怎样防止毛细作用发生的短路现象？

70.如何将转移后的DNA固定在膜上？

71.如何选择基因表达的宿主菌？

72.利用pET转化BL21（DE3）菌株能否进行蓝白斑筛选？为什么？

73.在基因工程中克隆载体与表达载体各起什么作用，各需要具备哪些基本遗

传元件？

74.表达载体与克隆载体有什么不同？怎样选择表达载体？

75.简述利用T7噬菌体启动子的pET系列表达载体的工作原理。

76.诱导外源基因表达的基本原理是什么。

77.如何确保外源基因在宿主中正常表达？

78.SDS在SDS-PAGE中的作用？在质粒DNA提取中又起什么作用？