芦丁和槲皮素的化学检识 (2)
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
340-390 或340-390(Ia)
300-320(Ib)
370-430(3-4 个小峰)
类型 黄酮类
黄酮醇类 (3-OR)
黄酮醇类 (3-OH) 异黄酮类 二氢黄酮 （醇） 查耳酮类
橙酮类
说明
-OH越多，带 I带II越红移
B环3’,4’有OH基，带II 为双峰（主 峰伴肩峰）
B环上有-OH, OCH3对带I
影响不大
查耳酮2’-OH 使带I红移的
影响最大
加入诊断试剂后引起的位移及结构测定
加入试剂
带II
带I
说明
样品+甲醇 （黄酮类及 黄酮醇类）
+NaOMe
+NaOAc (未熔融)
250-285 304-385
A环有OH ， 红 移小， 无意义
40-60nm （不变或 增强） 50-60nm （下降）
带 I ， II 随 加 NaOMe 时
百度文库
（4） 根据只加AlCl3和加入AlCl3及盐酸的紫外 光谱吸收峰位相减的结果，可以判断邻二酚羟
基的取代情况。
带II(240285nm)（苯 甲酰系统）
250-285
245-270 270-295
220-270
带I(300400nm) 桂皮酰系统 304-350
328-357
352-385
300-400
（3）
HO
O
OH O
OH HO
OH
AlCl3
O
OO Al3+
O Al3+
O HO
O
HCl/H2O
OO Al3+
OH OH
形成络合物的能力： 黄酮醇3-OH >黄酮5-OH（二氢黄酮5-OH）> 邻二酚羟基 > 二氢黄酮醇5-OH 邻二酚羟基和二氢黄酮醇5-OH在酸性条件下不与AlCl3络合 ； 但不在酸性条件下，五者皆与Al3+络合； 形成络合物越稳定，红移越多。
30-40 50-65 0
B环有邻二酚羟基 A,B环皆有邻二酚羟基 A,B环皆无邻二酚羟基
实验原理
• 芦丁提取物含量的测定：
• 在黄酮类化合物的紫外光谱图上主要有两个吸收带: 环肉桂酰系统引起的吸收带1 ( 300 ) 550nm)和环苯 酰系统引起的吸收带2 ( 240 ) 280nm) 。若加入铝 盐, 则铝离子与黄酮化合物形成稳定的配合物,带2 会明显向长波方向移动( 红移) ; 在NaNO2 的强碱 性溶液中, 其在500nm左右吸光度值最大, 从而为分 光光度法测定提供了可靠的依据
实验原理
• 浓硫酸和浓盐酸反应：
γ-吡喃环上的1-氧原子，因有未共用的电子对，故 表现微弱的碱性，可与强无机酸，如浓硫酸、盐酸 等生成盐，但生成的盐极不稳定，加水后即可分 解。 另外，黄酮类化合物溶于浓硫酸中常常表现出特殊 的颜色，可用于鉴别。
实验原理
• Molish反应：
糖在浓硫酸或浓盐酸的作用下脱水形成糠醛及其衍 生物与α-萘酚作用形成紫红色复合物，在糖液和浓 硫酸的液面间形成紫环，因此又称紫环反应。 Molish反应可以鉴定单糖的存在。
A、甲醇光谱：取样品溶液置石英杯中，200~400 nm内进行扫描，重复一次，观察紫外光谱。
B、甲醇钠光谱：取样品液置石英杯中，加入甲醇 钠溶液3滴后，立即测定。放5分钟后再测一次。
C、AlCl3光谱：在置有样品液的石英杯中加入 AlCl3 溶液6滴，停1分钟后进行测定。然后加入3滴 盐酸(HCl:水=1:1 )再进行测定。
• 仪器：试管若干支、滴管若干个、移液管若干支 （公用）、药匙、100ml、50ml、10ml容量瓶各一 个、紫外分光光度计等
实验步骤
• 芦丁和槲皮素的化学检识
(1)对不同强度碱液的溶解度试验：
芦丁
槲皮素
实验步骤
(2)浓硫酸和浓盐酸反应： (3)Molish反应：
实验步骤
(4)盐酸–镁粉试验:
• 注意：用NaNO2 - Al(NO3 ) 3 - NaOH 体系分光光 度法测定总黄酮含量时, 必须严格保证稀释定容用乙
醇的浓度、试剂加入时间、显色时间等测试环节前 后完全一致, 否则会出现很大误差。
吸光度Abs
0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1
0
0
标准曲线
y = 10.46x + 0.0147 R²= 0.9923
间延长，逐渐衰减
5-20
320-330nm 有吸收，成 苷后消失
在长波一侧 有明显的肩 峰
两峰强度基本相同，具体位置 与母核上电负性取代基(-OH, O多C，H越3)长有移关 ， -OH, -OCH3 越
有4’-OH，无3-OH 有3-OH，无4’- OH 有3,4’-OH或3,3’,4’-OH（衰减 更快） 7-OH
(5)FeCl3反应
实验步骤
实验步骤
(6)AlCl3反应 • 芦丁的紫外吸收光谱测定 • 芦丁提取物含量的测定
实验步骤
• 芦丁的紫外吸收光谱测定：
测定方法：精密称取芦丁l0mg于l00mL量瓶中，加 甲醇溶解并稀释到刻度，摇匀。从中吸取5mL于 50mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度；摇匀备用（ 10μg/mL)
O
A
O
O
A
O
实验原理
芦丁的紫外吸收光谱的测定：
7
O
R O
苯甲酰基
4'
7
O
R O
4'
O
O
桂皮酰基
黄酮类化合物结构中的交叉共轭
实验原理
芦丁的紫外吸收光谱测定
说明： （1）+NaOMe或NaOAc, OHONa，变为离子化合物，
共轭系统中的电子云密度增加，红移 另 有 3,4’-OH 或 3,3’,4’-OH 时 ， 在 NaOMe 作 用 下 易氧化破坏，故峰有衰减。 （2）NaOAc为弱碱，仅使酸性较强者，如7,4’-OH解 离。
芦丁的鉴别及含量测定
小组成员：陈丽、陈惠渝、 黄雄、李钰川
实验目的
• 熟悉黄酮类化合物的化学检识的常用方法 • 掌握芦丁紫外吸收光谱测定的方法与原理 • 学习用紫外分光光度法测定芦丁提取物的含量
实验原理
芦丁和槲皮素的化学检识
1.对不同强度碱液的溶解度试验 2.浓硫酸和浓盐酸反应
3.Molish反应 4.盐酸-镁粉试验 5.FeCl3反应
实验原理
• 盐酸-镁粉试验：
盐酸-镁粉反应的机制过去解释为由于生 成了花色苷元所致，现在认为是因为生成 了阳碳离子的缘故。
• FeCl3及AlCl3反应：
黄酮类化合物分子中常含有下列结构单 元，故常可与铝盐、铅盐、锆盐、镁盐等
试剂反应，生成有色络合物。
OH
O
O
OH
OH
OH
O
实验原理
芦丁的紫外吸收光谱的测定：
7
O
R O
苯甲酰基
4'
7
O
R O
4'
O
O
桂皮酰基
黄酮类化合物结构中的交叉共轭
实验原理
芦丁的紫外吸收光谱的测定
多数黄酮类化合物由两个主要吸收带组成：
带I在300-400nm区间，由B环桂皮酰系统的电子跃 迁引起。
O B
O B
O
O
实验原理
• 带II在240-285nm区间，由A环苯甲酰系统的电子跃 迁所引起。
7-OH
+NaOAc (熔融)
40~65 有4’-OH
+NaOAc/ 5- 12-30 有6,7-OH或7,8-OH (5,6-OH无)
H3BO3
10
B环有邻二酚羟基
AlCl3/ HCl
AlCl3 光 谱 AlCl3/ HCl光谱
60 50-60 35-55 17-20 0
有3-OH 有3,5-二OH 有5-OH，无3-OH 有6-OR 无3-OH, 5-OH
THANKS FOR YOUR ATTENTION! !
实验步骤
• D、醋酸钠光谱；取样品溶液3mL，加入过量的无 水醋酸钠固体，摇匀(杯底剩有少量的醋酸钠，2分 钟内测定，5～10分钟后再测一次。
• E、醋酸钠硼酸光谱： 方法2
实验步骤
• 芦丁提取物的含量测定：
• (1)标准曲线的绘制：
• (2)测定：精密称取精制芦丁20mg，置l00mL量瓶中 ，加60％乙醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷， 60%乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取25mL，置 50mL量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即得 0.1mg/mL的样品液。精密吸取样品液3.0mL置 10mL量瓶中，加30％乙醇使成5mL。精密加亚硝酸 钠溶液(1：20) 0.3mL，摇匀。放置6分钟，再加硝 酸铝溶液(1：10) 0.3mL，摇匀，放置6分钟。加4％ NaOH溶液4mL，用水稀释至刻度，振摇，放置l5分 钟置比色皿中，在500nm波长测定吸收度。从标准 曲线中读出芦丁含量。
6.AlCl3反应
实验原理
• 对不同强度碱液的溶解度试验：
黄酮类化合物因分子中多具有酚羟基，故显酸性， 可溶于碱性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺 中。由于酚羟基的数目及位置不同，酸性强弱也不 同。以黄酮为例，其酚羟基酸性强弱顺序依次为： 7,4‘-二OH>7-或4’-OH>一般酚OH>5-OH>3-OH 因此，酚羟基的数目及位置不同的黄酮类化合物酸 性不同，在不同强度碱液中的溶解度也不同。
系列1 线性 (系列1)
0.01
0.02 0.03 0.04
芦丁标准品浓度mg/ml
0.05
0.06
实验试剂及仪器
• 试剂：芦丁及槲皮素样品、稀氨水、5%NaHCO3水 溶液、5%Na2CO3水溶液、1%NaOH水溶液、浓 酸、浓硫酸、乙醇、α-萘酚、镁粉、1%FeCl3醇溶 液、1%AlCl3醇溶液、无水甲醇、甲醇钠溶液、 AlCl3无水甲醇溶液、（1：1）盐酸、无水醋酸钠、 硼酸、60%乙醇、30%乙醇、亚硝酸钠溶液（1： 20）、硝酸铝溶液（1：10）、 4%NaOH水溶液、 蒸馏水等
300-320(Ib)
370-430(3-4 个小峰)
类型 黄酮类
黄酮醇类 (3-OR)
黄酮醇类 (3-OH) 异黄酮类 二氢黄酮 （醇） 查耳酮类
橙酮类
说明
-OH越多，带 I带II越红移
B环3’,4’有OH基，带II 为双峰（主 峰伴肩峰）
B环上有-OH, OCH3对带I
影响不大
查耳酮2’-OH 使带I红移的
影响最大
加入诊断试剂后引起的位移及结构测定
加入试剂
带II
带I
说明
样品+甲醇 （黄酮类及 黄酮醇类）
+NaOMe
+NaOAc (未熔融)
250-285 304-385
A环有OH ， 红 移小， 无意义
40-60nm （不变或 增强） 50-60nm （下降）
带 I ， II 随 加 NaOMe 时
百度文库
（4） 根据只加AlCl3和加入AlCl3及盐酸的紫外 光谱吸收峰位相减的结果，可以判断邻二酚羟
基的取代情况。
带II(240285nm)（苯 甲酰系统）
250-285
245-270 270-295
220-270
带I(300400nm) 桂皮酰系统 304-350
328-357
352-385
300-400
（3）
HO
O
OH O
OH HO
OH
AlCl3
O
OO Al3+
O Al3+
O HO
O
HCl/H2O
OO Al3+
OH OH
形成络合物的能力： 黄酮醇3-OH >黄酮5-OH（二氢黄酮5-OH）> 邻二酚羟基 > 二氢黄酮醇5-OH 邻二酚羟基和二氢黄酮醇5-OH在酸性条件下不与AlCl3络合 ； 但不在酸性条件下，五者皆与Al3+络合； 形成络合物越稳定，红移越多。
30-40 50-65 0
B环有邻二酚羟基 A,B环皆有邻二酚羟基 A,B环皆无邻二酚羟基
实验原理
• 芦丁提取物含量的测定：
• 在黄酮类化合物的紫外光谱图上主要有两个吸收带: 环肉桂酰系统引起的吸收带1 ( 300 ) 550nm)和环苯 酰系统引起的吸收带2 ( 240 ) 280nm) 。若加入铝 盐, 则铝离子与黄酮化合物形成稳定的配合物,带2 会明显向长波方向移动( 红移) ; 在NaNO2 的强碱 性溶液中, 其在500nm左右吸光度值最大, 从而为分 光光度法测定提供了可靠的依据
实验原理
• 浓硫酸和浓盐酸反应：
γ-吡喃环上的1-氧原子，因有未共用的电子对，故 表现微弱的碱性，可与强无机酸，如浓硫酸、盐酸 等生成盐，但生成的盐极不稳定，加水后即可分 解。 另外，黄酮类化合物溶于浓硫酸中常常表现出特殊 的颜色，可用于鉴别。
实验原理
• Molish反应：
糖在浓硫酸或浓盐酸的作用下脱水形成糠醛及其衍 生物与α-萘酚作用形成紫红色复合物，在糖液和浓 硫酸的液面间形成紫环，因此又称紫环反应。 Molish反应可以鉴定单糖的存在。
A、甲醇光谱：取样品溶液置石英杯中，200~400 nm内进行扫描，重复一次，观察紫外光谱。
B、甲醇钠光谱：取样品液置石英杯中，加入甲醇 钠溶液3滴后，立即测定。放5分钟后再测一次。
C、AlCl3光谱：在置有样品液的石英杯中加入 AlCl3 溶液6滴，停1分钟后进行测定。然后加入3滴 盐酸(HCl:水=1:1 )再进行测定。
• 仪器：试管若干支、滴管若干个、移液管若干支 （公用）、药匙、100ml、50ml、10ml容量瓶各一 个、紫外分光光度计等
实验步骤
• 芦丁和槲皮素的化学检识
(1)对不同强度碱液的溶解度试验：
芦丁
槲皮素
实验步骤
(2)浓硫酸和浓盐酸反应： (3)Molish反应：
实验步骤
(4)盐酸–镁粉试验:
• 注意：用NaNO2 - Al(NO3 ) 3 - NaOH 体系分光光 度法测定总黄酮含量时, 必须严格保证稀释定容用乙
醇的浓度、试剂加入时间、显色时间等测试环节前 后完全一致, 否则会出现很大误差。
吸光度Abs
0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1
0
0
标准曲线
y = 10.46x + 0.0147 R²= 0.9923
间延长，逐渐衰减
5-20
320-330nm 有吸收，成 苷后消失
在长波一侧 有明显的肩 峰
两峰强度基本相同，具体位置 与母核上电负性取代基(-OH, O多C，H越3)长有移关 ， -OH, -OCH3 越
有4’-OH，无3-OH 有3-OH，无4’- OH 有3,4’-OH或3,3’,4’-OH（衰减 更快） 7-OH
(5)FeCl3反应
实验步骤
实验步骤
(6)AlCl3反应 • 芦丁的紫外吸收光谱测定 • 芦丁提取物含量的测定
实验步骤
• 芦丁的紫外吸收光谱测定：
测定方法：精密称取芦丁l0mg于l00mL量瓶中，加 甲醇溶解并稀释到刻度，摇匀。从中吸取5mL于 50mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度；摇匀备用（ 10μg/mL)
O
A
O
O
A
O
实验原理
芦丁的紫外吸收光谱的测定：
7
O
R O
苯甲酰基
4'
7
O
R O
4'
O
O
桂皮酰基
黄酮类化合物结构中的交叉共轭
实验原理
芦丁的紫外吸收光谱测定
说明： （1）+NaOMe或NaOAc, OHONa，变为离子化合物，
共轭系统中的电子云密度增加，红移 另 有 3,4’-OH 或 3,3’,4’-OH 时 ， 在 NaOMe 作 用 下 易氧化破坏，故峰有衰减。 （2）NaOAc为弱碱，仅使酸性较强者，如7,4’-OH解 离。
芦丁的鉴别及含量测定
小组成员：陈丽、陈惠渝、 黄雄、李钰川
实验目的
• 熟悉黄酮类化合物的化学检识的常用方法 • 掌握芦丁紫外吸收光谱测定的方法与原理 • 学习用紫外分光光度法测定芦丁提取物的含量
实验原理
芦丁和槲皮素的化学检识
1.对不同强度碱液的溶解度试验 2.浓硫酸和浓盐酸反应
3.Molish反应 4.盐酸-镁粉试验 5.FeCl3反应
实验原理
• 盐酸-镁粉试验：
盐酸-镁粉反应的机制过去解释为由于生 成了花色苷元所致，现在认为是因为生成 了阳碳离子的缘故。
• FeCl3及AlCl3反应：
黄酮类化合物分子中常含有下列结构单 元，故常可与铝盐、铅盐、锆盐、镁盐等
试剂反应，生成有色络合物。
OH
O
O
OH
OH
OH
O
实验原理
芦丁的紫外吸收光谱的测定：
7
O
R O
苯甲酰基
4'
7
O
R O
4'
O
O
桂皮酰基
黄酮类化合物结构中的交叉共轭
实验原理
芦丁的紫外吸收光谱的测定
多数黄酮类化合物由两个主要吸收带组成：
带I在300-400nm区间，由B环桂皮酰系统的电子跃 迁引起。
O B
O B
O
O
实验原理
• 带II在240-285nm区间，由A环苯甲酰系统的电子跃 迁所引起。
7-OH
+NaOAc (熔融)
40~65 有4’-OH
+NaOAc/ 5- 12-30 有6,7-OH或7,8-OH (5,6-OH无)
H3BO3
10
B环有邻二酚羟基
AlCl3/ HCl
AlCl3 光 谱 AlCl3/ HCl光谱
60 50-60 35-55 17-20 0
有3-OH 有3,5-二OH 有5-OH，无3-OH 有6-OR 无3-OH, 5-OH
THANKS FOR YOUR ATTENTION! !
实验步骤
• D、醋酸钠光谱；取样品溶液3mL，加入过量的无 水醋酸钠固体，摇匀(杯底剩有少量的醋酸钠，2分 钟内测定，5～10分钟后再测一次。
• E、醋酸钠硼酸光谱： 方法2
实验步骤
• 芦丁提取物的含量测定：
• (1)标准曲线的绘制：
• (2)测定：精密称取精制芦丁20mg，置l00mL量瓶中 ，加60％乙醇适量，置水浴上微热使溶解，放冷， 60%乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取25mL，置 50mL量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即得 0.1mg/mL的样品液。精密吸取样品液3.0mL置 10mL量瓶中，加30％乙醇使成5mL。精密加亚硝酸 钠溶液(1：20) 0.3mL，摇匀。放置6分钟，再加硝 酸铝溶液(1：10) 0.3mL，摇匀，放置6分钟。加4％ NaOH溶液4mL，用水稀释至刻度，振摇，放置l5分 钟置比色皿中，在500nm波长测定吸收度。从标准 曲线中读出芦丁含量。
6.AlCl3反应
实验原理
• 对不同强度碱液的溶解度试验：
黄酮类化合物因分子中多具有酚羟基，故显酸性， 可溶于碱性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺 中。由于酚羟基的数目及位置不同，酸性强弱也不 同。以黄酮为例，其酚羟基酸性强弱顺序依次为： 7,4‘-二OH>7-或4’-OH>一般酚OH>5-OH>3-OH 因此，酚羟基的数目及位置不同的黄酮类化合物酸 性不同，在不同强度碱液中的溶解度也不同。
系列1 线性 (系列1)
0.01
0.02 0.03 0.04
芦丁标准品浓度mg/ml
0.05
0.06
实验试剂及仪器
• 试剂：芦丁及槲皮素样品、稀氨水、5%NaHCO3水 溶液、5%Na2CO3水溶液、1%NaOH水溶液、浓 酸、浓硫酸、乙醇、α-萘酚、镁粉、1%FeCl3醇溶 液、1%AlCl3醇溶液、无水甲醇、甲醇钠溶液、 AlCl3无水甲醇溶液、（1：1）盐酸、无水醋酸钠、 硼酸、60%乙醇、30%乙醇、亚硝酸钠溶液（1： 20）、硝酸铝溶液（1：10）、 4%NaOH水溶液、 蒸馏水等