哮喘滴丸不同制备工艺路线药效学筛选-韩宇嘉
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关键词：哮喘滴丸；支气管哮喘；正交试验；提取工艺 中图分类号：R284.2 文献标志码：A 文章编号：1673-842X ( 2015) 12- 0051- 0 3
Xiaochuan Dropping Pill of Different Preparation Processes of Pharmacodynamics Screening
本处方中麻黄、木香、浙贝母有效成分明确，为 了便于比较不同工艺有效成分的转移率，首先对各 药味的相关成分进行了测定。测定成分为麻黄中 的盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱、木香中的木香烃内 酯和去氢木香内酯、浙贝母中的贝母素甲和贝母素 乙。 2.1 盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱含量测定
由于实验室中不具备《中华人民共和国药典》 中麻黄药材项下的含量测定条件，根据文献以及试 验结果，采用以下测定方法。
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷 键合硅胶为填充剂；以乙腈 -0.2% 磷酸水溶液（4∶ 96）为流动相，检测波长 210 nm，流速 1.0 mL/min。
对照品溶液的制备：精密称取盐酸麻黄碱对 照品、盐酸伪麻黄碱对照品适量，加甲醇分别制成 每 1 mL 各含 40 μg 的混合溶液，即得。
HAN Yujia1，ZHANG Peng2，DAI Long1 （1.Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，Shandong，China；2.Marine
Biomedical Research Instiute of Qingdao Co.，Ltd.，Qingdao 266100，Shandong，China）
[ J ] . 海峡药学，2004，16 ( 4 ) ：66-67. [ 3 ] 石茹 . 高效液相色谱衍生化法测定脑脉康中冰片含量 [ J ] . 第
四军医大学学报，2003，24 ( 5 ) ：449-451. [ 4 ] 干国平，昝俊峰，丁伟杰，等 .GC 测定冰玉栓中冰片的含量 [ J ] .
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷 键合硅胶为填充剂；以甲醇 - 水（65∶35）为流动相； 检测波长为 225 nm，流速 1.0 mL/min。
对照品溶液的制备：精密称取木香烃内酯对照 品、去氢木香内酯对照品适量，加甲醇制成每 1 mL 各含 0.1 mg 的混合溶液，即得。 2.2.1 供试品溶液的制备
51
辽宁中医药大学学报
17 卷
wenku.baidu.com
使用乙醇回流方式提取，也可以使用酸性溶剂提取 （转 化 为 离 子 态）。 木 香 中 主 要 有 效 成 分 为 萜 类 物
质 [5]，多采用乙醇回流的方式进行提取。本方所用 艾叶为陈艾叶，主要有效成分为高沸点挥发油 ， [6-7] 可使用高浓度乙醇温浸提取。根据以上各药味中有 效成分的理化特性，以有效成分提取率为指标，结合 实际大生产的设备，除艾叶外的其余药味乙醇回流 提取进行比较。 1 仪器、材料与试剂 1.1 仪器
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10 μL，注入液相色谱仪，测定，即得。 2.3 贝母素甲与贝母素乙含量测定
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅 烷键合硅胶为填充剂；以乙腈 - 水 - 三乙胺（70∶ 30∶0.03）为流动相；蒸发光散射检测器检测，流速 1.0 mL/min。
对照品溶液的制备：取贝母素甲对照品、贝母 素乙对照品适量，精密称定，加甲醇制成每 1 mL 含 贝母素甲 0.2 mg、贝母素乙 0.15 mg 的混合溶液，即 得。
Key words：Xiaochuan dorpping pill；bronchial asthma；orthogonal test；extraction process
支气管哮喘（bronchial asthma，BA）是一种表 现反复发作性咳嗽、喘鸣和呼吸困难，并伴有气 道高反应性的可逆性、梗阻性呼吸性疾病，是儿 童期最常见的慢性疾病之一，近 20 年来，支气管 哮喘等变态反应性疾病的发病率呈明显的持续 上升趋势 [1]。
哮喘方是由山东省中医院临床常用方，表现 出良好的临床疗效。本处方由麻黄、艾叶、木香、
浙贝母等五味中药组成，药味较少，各药味治疗 哮喘的活性成分基本明确，且各药味治疗哮喘的 药理作用研究较多，所以拟研究开发哮喘滴丸， 为临床提供疗效可靠、毒副作用少、易吸收、服用 方便、易为小儿接受的治疗小儿哮喘的纯中药制 剂。
供试品溶液的制备：取本品，研细，取约 1 g， 精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 1.44％磷酸 溶液 50 mL，称定重量，超声处理（功率 250 W，频率 50 kHz）20 min，放冷，再称定重量，用 1.44％磷酸溶 液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶 液各 10 μL，注入液相色谱仪，测定，即得。 2.2 木香烃内酯与去氢木香内酯含量测定
中成药，2004，26 ( 7 ) ：9-10. [ 5 ] 国家药典委员会 . 中华人民共和国药典 [ M ] . 北京：中国医药
科技出版社，2010.
收稿日期：2015-04-14 基金项目：山东省科技厅课题（2014GSF119006） 作者简介：韩宇嘉（1991-），女，山东青岛人，硕士研究生，研究方向：中药新药开发及新剂型研究。 通讯作者：代龙（1964-），男，山东德州人，教授，研究方向：中药新药开发及新剂型研究。
麻黄、浙贝母中主要有效成分为生物碱类 ， [2-4] 生物碱类有分子态与离子态两种存在形式，既可以
应为 40~60 mg。 3 结论与讨论
（1）冰 片 是 冠 心 苏 合 胶 囊 的 重 要 有 效 成 分 之 一，先采用 HPLC 测定时干扰较大，又因冰片具有挥 发性，因此选用气相色谱法测定冰片含量，在本实验 拟定色谱条件下异龙脑与龙脑可达到完全分离。本 法简便、灵敏、快速、准确，可作为冠心苏合胶囊中冰 片的质量控制方法。
第 1 7 卷 第 1 2 期 2015 年 12 月
辽宁中医药大学学报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 17 No. 12 Dec .，2015
DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2015.12.016
哮喘滴丸不同制备工艺路线药效学筛选
R1002 型旋转蒸发器（上海申顺生物科技有 限公司）；DZF-6051 型真空干燥箱（上海精宏试验 设备有限公司）；LC-2010A 型高效液相色谱仪（日 本岛津）；UV1100 型紫外分光光度计（上海天美科 学技术有限公司）；KQ-500E 型超声波提取器（昆 山 市 超 声 仪 器 有 限 公 司） ；PHS-3C 型 pH 计（上 海雷磁仪器厂）；PK-S24 型电热恒温水浴锅（上海 精宏实验设备有限公司）。MY-520 型超声波雾 化器（深圳市普康美科技有限公司）；半封闭式玻 璃缸。 1.2 材料与试剂
Abstract：Objective ：Optimization of extraction of the effective components of Xiaochuan dropping pill. Method：Pharmacodynamics experiment resuLts is an important indexe for the choice of the preparation process. Determine the detail technological parameter by single factor experiment. Comparison of the extraction rate of effective components of possible factors influence asthma decoction. Result：Ultimately determine the Xiaochuan dropping pill extraction technology：Artemisia was extracted by 90% ethanol，2 times，each time 8 times amount，2 hours each time；the others with 70% ethanol reflux extraction 2 times，each time 8 times amount，2 hours each time. Conclusion：This experiment screened the Xiaochuan dropping pill extraction process is simple，easy to realize industrial production.
（2）中成药成分复杂，组分比较多，在测定过程 中易污染色谱柱，影响仪器的稳定性和灵敏度，实验 发现在每次测定完后将柱温适当升高，避免由于杂
质峰污染柱子所带来的干扰，且样品测定数据稳定，
重现性好。◆
参考文献 [ 1 ] 苗明三 . 现代实用中药质量控制技术 [ M ] . 北京：人民卫生出
版社，2000，12 ( 1 ) ：454-460. [ 2 ] 郑剑红 . 气相色谱法测定复方蛇脂软膏中龙脑（冰片）的含量
韩宇嘉 1，张鹏 2，代龙 1
（1. 山东中医药大学药学院，山东 济南 250355；2. 青岛海洋生物医药研究院股份有限公司，山东 青岛 266100）
摘 要：目的：优化哮喘方各有效成分的提取条件。方法：以药效学试验筛选大工艺制备路线；采用单因素 试验，多指标优选各药味制备工艺路线参数；比较可能影响哮喘方中有效成分提取率的因素。结果：最终确定哮 喘方提取工艺为：艾叶 90% 乙醇 40 ℃温浸 2 次，每次 8 倍量，每次 2 h；其余以 70% 乙醇回流提取 2 次，每次 8 倍量， 每次 2 h。结论：本实验筛选出的哮喘方提取工艺方法简便，工业生产便于实现。
麻黄、艾叶、木香、浙贝母均购自安徽亳州药 材市场。盐酸麻黄碱对照品：购自中国药品生物 制品检定所（批号：1242-200102，供含量测定用）； 盐酸伪麻黄碱对照品：购自中国药品生物制品检 定 所（批 号：171237-201208，供 含 量 测 定 用）；木 香 烃 内 酯：购 自 上 海 源 叶 生 物 科 技 有 限 公 司（批 号：20120809，供含量测定用）；去氢木香内酯：购 自上海源叶生物科技有限公司（批号：20120804， 供含量测定用）；贝母素甲对照品：购自中国药品 生 物 制 品 检 定 所（批 号：110750-200305，供 含 量 测 定 用）；贝 母 素 乙 对 照 品：购 自 中 国 药 品 生 物 制 品 检 定 所（批 号：110751-200303，供 含 量 测 定 用）。 乙 醇 为 分 析 纯。 甲 醇、乙 腈（德 国 MERCK 公司）、磷酸（美国 TEDIA 公司）等为色谱纯。干 膏 A 每 克 干 膏 折 合 生 药 2.60 g，干 膏 B 每 克 干 膏 折合生药 6.06 g，干膏 C 每克干膏折合生药 6.15 g， 三种干膏分别加纯净水配制成 1 g 生药 /mL 的溶 液。卵清白蛋白（OVA）25 g/ 瓶，Sigma 公司产品 （批号：A-5253）。醋酸地塞米松片，山东辰欣药业 股份有限公司，批号：130607201。豚鼠 30 只，体重 180~200 g，购于山东大学动物房。 2 色谱条件
取本品约 1.5 g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶 中，精 密 加 入 甲 醇 50 mL，密 塞，称 定 重 量，放 置 过 夜，超声处理（功率 250 W，频率 50 kHz）30 min，放 冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，以微 孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得。 2.2.2 测定法
Xiaochuan Dropping Pill of Different Preparation Processes of Pharmacodynamics Screening
本处方中麻黄、木香、浙贝母有效成分明确，为 了便于比较不同工艺有效成分的转移率，首先对各 药味的相关成分进行了测定。测定成分为麻黄中 的盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱、木香中的木香烃内 酯和去氢木香内酯、浙贝母中的贝母素甲和贝母素 乙。 2.1 盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱含量测定
由于实验室中不具备《中华人民共和国药典》 中麻黄药材项下的含量测定条件，根据文献以及试 验结果，采用以下测定方法。
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷 键合硅胶为填充剂；以乙腈 -0.2% 磷酸水溶液（4∶ 96）为流动相，检测波长 210 nm，流速 1.0 mL/min。
对照品溶液的制备：精密称取盐酸麻黄碱对 照品、盐酸伪麻黄碱对照品适量，加甲醇分别制成 每 1 mL 各含 40 μg 的混合溶液，即得。
HAN Yujia1，ZHANG Peng2，DAI Long1 （1.Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，Shandong，China；2.Marine
Biomedical Research Instiute of Qingdao Co.，Ltd.，Qingdao 266100，Shandong，China）
[ J ] . 海峡药学，2004，16 ( 4 ) ：66-67. [ 3 ] 石茹 . 高效液相色谱衍生化法测定脑脉康中冰片含量 [ J ] . 第
四军医大学学报，2003，24 ( 5 ) ：449-451. [ 4 ] 干国平，昝俊峰，丁伟杰，等 .GC 测定冰玉栓中冰片的含量 [ J ] .
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷 键合硅胶为填充剂；以甲醇 - 水（65∶35）为流动相； 检测波长为 225 nm，流速 1.0 mL/min。
对照品溶液的制备：精密称取木香烃内酯对照 品、去氢木香内酯对照品适量，加甲醇制成每 1 mL 各含 0.1 mg 的混合溶液，即得。 2.2.1 供试品溶液的制备
51
辽宁中医药大学学报
17 卷
wenku.baidu.com
使用乙醇回流方式提取，也可以使用酸性溶剂提取 （转 化 为 离 子 态）。 木 香 中 主 要 有 效 成 分 为 萜 类 物
质 [5]，多采用乙醇回流的方式进行提取。本方所用 艾叶为陈艾叶，主要有效成分为高沸点挥发油 ， [6-7] 可使用高浓度乙醇温浸提取。根据以上各药味中有 效成分的理化特性，以有效成分提取率为指标，结合 实际大生产的设备，除艾叶外的其余药味乙醇回流 提取进行比较。 1 仪器、材料与试剂 1.1 仪器
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10 μL，注入液相色谱仪，测定，即得。 2.3 贝母素甲与贝母素乙含量测定
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅 烷键合硅胶为填充剂；以乙腈 - 水 - 三乙胺（70∶ 30∶0.03）为流动相；蒸发光散射检测器检测，流速 1.0 mL/min。
对照品溶液的制备：取贝母素甲对照品、贝母 素乙对照品适量，精密称定，加甲醇制成每 1 mL 含 贝母素甲 0.2 mg、贝母素乙 0.15 mg 的混合溶液，即 得。
Key words：Xiaochuan dorpping pill；bronchial asthma；orthogonal test；extraction process
支气管哮喘（bronchial asthma，BA）是一种表 现反复发作性咳嗽、喘鸣和呼吸困难，并伴有气 道高反应性的可逆性、梗阻性呼吸性疾病，是儿 童期最常见的慢性疾病之一，近 20 年来，支气管 哮喘等变态反应性疾病的发病率呈明显的持续 上升趋势 [1]。
哮喘方是由山东省中医院临床常用方，表现 出良好的临床疗效。本处方由麻黄、艾叶、木香、
浙贝母等五味中药组成，药味较少，各药味治疗 哮喘的活性成分基本明确，且各药味治疗哮喘的 药理作用研究较多，所以拟研究开发哮喘滴丸， 为临床提供疗效可靠、毒副作用少、易吸收、服用 方便、易为小儿接受的治疗小儿哮喘的纯中药制 剂。
供试品溶液的制备：取本品，研细，取约 1 g， 精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 1.44％磷酸 溶液 50 mL，称定重量，超声处理（功率 250 W，频率 50 kHz）20 min，放冷，再称定重量，用 1.44％磷酸溶 液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶 液各 10 μL，注入液相色谱仪，测定，即得。 2.2 木香烃内酯与去氢木香内酯含量测定
中成药，2004，26 ( 7 ) ：9-10. [ 5 ] 国家药典委员会 . 中华人民共和国药典 [ M ] . 北京：中国医药
科技出版社，2010.
收稿日期：2015-04-14 基金项目：山东省科技厅课题（2014GSF119006） 作者简介：韩宇嘉（1991-），女，山东青岛人，硕士研究生，研究方向：中药新药开发及新剂型研究。 通讯作者：代龙（1964-），男，山东德州人，教授，研究方向：中药新药开发及新剂型研究。
麻黄、浙贝母中主要有效成分为生物碱类 ， [2-4] 生物碱类有分子态与离子态两种存在形式，既可以
应为 40~60 mg。 3 结论与讨论
（1）冰 片 是 冠 心 苏 合 胶 囊 的 重 要 有 效 成 分 之 一，先采用 HPLC 测定时干扰较大，又因冰片具有挥 发性，因此选用气相色谱法测定冰片含量，在本实验 拟定色谱条件下异龙脑与龙脑可达到完全分离。本 法简便、灵敏、快速、准确，可作为冠心苏合胶囊中冰 片的质量控制方法。
第 1 7 卷 第 1 2 期 2015 年 12 月
辽宁中医药大学学报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 17 No. 12 Dec .，2015
DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2015.12.016
哮喘滴丸不同制备工艺路线药效学筛选
R1002 型旋转蒸发器（上海申顺生物科技有 限公司）；DZF-6051 型真空干燥箱（上海精宏试验 设备有限公司）；LC-2010A 型高效液相色谱仪（日 本岛津）；UV1100 型紫外分光光度计（上海天美科 学技术有限公司）；KQ-500E 型超声波提取器（昆 山 市 超 声 仪 器 有 限 公 司） ；PHS-3C 型 pH 计（上 海雷磁仪器厂）；PK-S24 型电热恒温水浴锅（上海 精宏实验设备有限公司）。MY-520 型超声波雾 化器（深圳市普康美科技有限公司）；半封闭式玻 璃缸。 1.2 材料与试剂
Abstract：Objective ：Optimization of extraction of the effective components of Xiaochuan dropping pill. Method：Pharmacodynamics experiment resuLts is an important indexe for the choice of the preparation process. Determine the detail technological parameter by single factor experiment. Comparison of the extraction rate of effective components of possible factors influence asthma decoction. Result：Ultimately determine the Xiaochuan dropping pill extraction technology：Artemisia was extracted by 90% ethanol，2 times，each time 8 times amount，2 hours each time；the others with 70% ethanol reflux extraction 2 times，each time 8 times amount，2 hours each time. Conclusion：This experiment screened the Xiaochuan dropping pill extraction process is simple，easy to realize industrial production.
（2）中成药成分复杂，组分比较多，在测定过程 中易污染色谱柱，影响仪器的稳定性和灵敏度，实验 发现在每次测定完后将柱温适当升高，避免由于杂
质峰污染柱子所带来的干扰，且样品测定数据稳定，
重现性好。◆
参考文献 [ 1 ] 苗明三 . 现代实用中药质量控制技术 [ M ] . 北京：人民卫生出
版社，2000，12 ( 1 ) ：454-460. [ 2 ] 郑剑红 . 气相色谱法测定复方蛇脂软膏中龙脑（冰片）的含量
韩宇嘉 1，张鹏 2，代龙 1
（1. 山东中医药大学药学院，山东 济南 250355；2. 青岛海洋生物医药研究院股份有限公司，山东 青岛 266100）
摘 要：目的：优化哮喘方各有效成分的提取条件。方法：以药效学试验筛选大工艺制备路线；采用单因素 试验，多指标优选各药味制备工艺路线参数；比较可能影响哮喘方中有效成分提取率的因素。结果：最终确定哮 喘方提取工艺为：艾叶 90% 乙醇 40 ℃温浸 2 次，每次 8 倍量，每次 2 h；其余以 70% 乙醇回流提取 2 次，每次 8 倍量， 每次 2 h。结论：本实验筛选出的哮喘方提取工艺方法简便，工业生产便于实现。
麻黄、艾叶、木香、浙贝母均购自安徽亳州药 材市场。盐酸麻黄碱对照品：购自中国药品生物 制品检定所（批号：1242-200102，供含量测定用）； 盐酸伪麻黄碱对照品：购自中国药品生物制品检 定 所（批 号：171237-201208，供 含 量 测 定 用）；木 香 烃 内 酯：购 自 上 海 源 叶 生 物 科 技 有 限 公 司（批 号：20120809，供含量测定用）；去氢木香内酯：购 自上海源叶生物科技有限公司（批号：20120804， 供含量测定用）；贝母素甲对照品：购自中国药品 生 物 制 品 检 定 所（批 号：110750-200305，供 含 量 测 定 用）；贝 母 素 乙 对 照 品：购 自 中 国 药 品 生 物 制 品 检 定 所（批 号：110751-200303，供 含 量 测 定 用）。 乙 醇 为 分 析 纯。 甲 醇、乙 腈（德 国 MERCK 公司）、磷酸（美国 TEDIA 公司）等为色谱纯。干 膏 A 每 克 干 膏 折 合 生 药 2.60 g，干 膏 B 每 克 干 膏 折合生药 6.06 g，干膏 C 每克干膏折合生药 6.15 g， 三种干膏分别加纯净水配制成 1 g 生药 /mL 的溶 液。卵清白蛋白（OVA）25 g/ 瓶，Sigma 公司产品 （批号：A-5253）。醋酸地塞米松片，山东辰欣药业 股份有限公司，批号：130607201。豚鼠 30 只，体重 180~200 g，购于山东大学动物房。 2 色谱条件
取本品约 1.5 g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶 中，精 密 加 入 甲 醇 50 mL，密 塞，称 定 重 量，放 置 过 夜，超声处理（功率 250 W，频率 50 kHz）30 min，放 冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，以微 孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得。 2.2.2 测定法