南医大药物分析第02章-药物的鉴别实验
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（二）提高灵敏度的方法 1.加入与水不相溶的有机溶剂 2.改进观测方法
四、鉴别方法
（一）物理鉴别法 物理常数如沸点、熔点、相对密度、比旋度等均可 作为鉴别药物的依据，常用于纯度较高的原料药的 鉴别。如可可碱、氨茶碱、磷酸可待因等，测定熔 点是一种简便、专属的鉴别方法。对于某些熔点过 高、对热不稳定、熔点不敏锐的药物，可通过加入 试剂，使药物与试剂反应生成衍生物再测定熔点的 方法易于测定—制备衍生物测定熔点法。
（四）色谱鉴别法
1.薄层色谱鉴别法 采用对照品（或标准品）比较 法，要求二者的Rf值一致 ； 2.高效液相色谱鉴别法 要求供试品和对照品色谱 峰的保留时间比值一致；含量测定方法为内标法 ； 3.气相色谱鉴别法 4.纸色谱鉴别法 逐渐被薄层色谱法所取代 5.高效毛细管电泳
（1）溶解度
反映药品的纯度、晶型或粒度，通过溶解 度试验判断溶解度
ChP 2010: 尼莫地平的溶解度：在丙酮、三氯 甲烷或乙酸乙酯中易溶，在乙醇中溶解， 在乙醚中微溶，在水中几乎不溶。
（2）熔点
指一种物质按规定方法测定，由固体熔化 成液体的温度、熔融同时分解的温度或在 熔化时自初熔至全熔的一段温度。
常见的呈色反应有：
➢与重金属离子的沉淀反应---如巴比妥类药物与 铜盐、钴盐、银盐生成沉淀的反应； ➢与硫氰化铬铵（雷氏盐）的沉淀反应-多为生物 碱及其盐，具有芳香环的有机碱及其盐； ➢其它沉淀反应。
常有气体生成的药物
➢大多数的胺（铵）类药物、酰脲类药物以及某些酰胺类 药物，可经强碱处理后，加热，产生氨（胺）气 ➢化学结构中含硫的药物，可经强酸处理后，加热，发生 硫化氢气体 ➢含碘有机药物经直火加热，可生成紫色碘蒸气 ➢含醋酸酯和乙酰胺类药物，经硫酸水解后，加乙醇可产 生乙酸乙酯的香味。
*最低检出浓度（Minimum detectable concentration）：以1:G或1:V表示，是应用 于某一反应，在一定条件下，能够观测出供试 品的最低浓度。
2. 空白试验（Blank test）:就是在与供试 品鉴别试验完全相同的条件下，除不加供 试品外，其它试剂同样加入进行的试验。
第二章 药物的鉴别试验 (Identification test）
（一）性状：反映了药物特有的物理性质，一般包括 外观、嗅、味、溶解度以及物理常数(mp. bp. 等)。
（二）一般鉴别试验（General identification test）： 证实其是某一类药物，而不能证实是哪一种药物。仅 供确认单一的化学药物，如为数种化学药物的混合物 或有干扰物质存在时，除另有规定外，应不适用。 无机药物 阴离子和阳离子的特殊反应 有机药物 典型的官能团反应
（5）辅料无干扰，待测组分的晶型变化，可用对照 品经同法处理后的光谱对比。
（6）待测成分的晶型不变化，辅料存在干扰，可参 照原料药的表征光谱，在指纹区选择数个不受辅料干 扰的待测成分作为特征的鉴别谱带。
3. 近红外光谱法 4. 原子吸收法（AAS） 5. 核磁共振法（NMR） 6. 质谱法（MS） 7. X射线粉末衍射法（XRD）
（三）光谱鉴别法
1．紫外光谱鉴别法 (p76)
➢同时测定、核对λmax和λmin； ➢规定一定浓度的供试液在λmax处的吸收度； ➢规定吸收波长和吸收系数法； ➢规定吸收波长和吸收度比值法； ➢经化学处理后，测定其反应产物的吸收光谱特性。
2.红外光谱 鉴别法
标准图谱对照法： 中国药典（2010年版) 对照品法：USP (32)。 JP(15)采用对照品鉴别法、对 照光谱鉴别和吸收波数鉴别法。 BP(2009)采用对照品法和对照 光谱法
二、鉴别反应的条件
（一）溶液的浓度 （二）溶液的酸碱度 （三）溶液的温度 （四）共存物质干扰 （五）反应介质 （六）试验时间
三、鉴别试验的灵敏度
（一）反应灵敏度和空白试验 1.反应灵敏度（Sensitivity） *最低检出量（Minimum detectable quantity） （又称检出限量）：以m表示，就是应用某一反 应，在一定的条件下，能够观测出的供试品的最 小量，其单位通常用微克（μg）表示。
例如，经一般鉴别反应的钠盐试验，证实某一药物 为钠盐，但不能辨认是氯化钠、苯甲酸钠或者是其 它某一种钠盐药物。要想最后证实被鉴别的物质到 底是哪一种药物，必须在一般鉴别试验的基础上， 再进行专属鉴别试验，方可确认。
（三）专属鉴别试验（Specific identification test）： 根据每一种药物化学结构的差异及其所引起的物理化 学特性的不同,选用某些特有的灵敏定性反应，来鉴别 药物的真伪。
ChP 2010: 雌二醇的熔点：本品的熔点为175180℃.
（3）比旋度
在一定波长与温度下，偏振光透过长1 dm 且每1 ml中含有旋光性物质1 g的溶液时， 测得的旋光度称为比旋度。反映手性药物 特性及其纯度的主要指标。
ChP 2010： 维生素C的比旋度测定：取本品， 精密称定，加水溶解并定量稀释使成每1 ml 中含约0.10 g的溶液，测定，比旋度为 +20.5~+21.5.
（二）化学鉴别法
1.干法 焰色试验 加热分解
➢取铂丝，用盐酸湿润后，蘸取供试品，在 无色火焰中燃烧，使火焰显出特殊的颜色。 ➢在适当的温度条件下，加热使供试品分解， 生成有特殊气味的气体。
2.湿法
呈色或褪色反应 沉淀生成反应 荧光反应 气体生成反应
常见的呈色反应
➢三氯化铁呈色反应---酚羟基或水解后产生酚羟基 ➢异羟肟酸铁反应---多为芳酸及其酯类、酰胺类 ➢茚三酮呈色反应---脂肪氨基 ➢重氮化-偶合显色反应---芳伯氨基或能产生芳伯氨 基 ➢氧化还原显色反应及其它颜色反应
（专属性很强、 应用较广）
适用范围：组分单一、结构明确的原料药；特别是
其他方法不易区分的同类药物。
2.1.试样制备方法：压片法、糊法、膜法和溶液法； 2.2.原料药鉴别 注意多晶现象； 2.3.制剂的鉴别 采取提取分离、适当干燥、压片绘制 图谱。 （1）有机溶剂直接提取，去除辅Leabharlann Baidu干扰测定IR （2）有机酸，有机碱的对应盐，加入酸或碱沉淀， 分离干燥测定IR （3）主成分有机酸，加碱溶解，过滤，加酸沉淀分 离干燥测定IR （4）无辅料或辅料干扰少，可直接测定。
四、鉴别方法
（一）物理鉴别法 物理常数如沸点、熔点、相对密度、比旋度等均可 作为鉴别药物的依据，常用于纯度较高的原料药的 鉴别。如可可碱、氨茶碱、磷酸可待因等，测定熔 点是一种简便、专属的鉴别方法。对于某些熔点过 高、对热不稳定、熔点不敏锐的药物，可通过加入 试剂，使药物与试剂反应生成衍生物再测定熔点的 方法易于测定—制备衍生物测定熔点法。
（四）色谱鉴别法
1.薄层色谱鉴别法 采用对照品（或标准品）比较 法，要求二者的Rf值一致 ； 2.高效液相色谱鉴别法 要求供试品和对照品色谱 峰的保留时间比值一致；含量测定方法为内标法 ； 3.气相色谱鉴别法 4.纸色谱鉴别法 逐渐被薄层色谱法所取代 5.高效毛细管电泳
（1）溶解度
反映药品的纯度、晶型或粒度，通过溶解 度试验判断溶解度
ChP 2010: 尼莫地平的溶解度：在丙酮、三氯 甲烷或乙酸乙酯中易溶，在乙醇中溶解， 在乙醚中微溶，在水中几乎不溶。
（2）熔点
指一种物质按规定方法测定，由固体熔化 成液体的温度、熔融同时分解的温度或在 熔化时自初熔至全熔的一段温度。
常见的呈色反应有：
➢与重金属离子的沉淀反应---如巴比妥类药物与 铜盐、钴盐、银盐生成沉淀的反应； ➢与硫氰化铬铵（雷氏盐）的沉淀反应-多为生物 碱及其盐，具有芳香环的有机碱及其盐； ➢其它沉淀反应。
常有气体生成的药物
➢大多数的胺（铵）类药物、酰脲类药物以及某些酰胺类 药物，可经强碱处理后，加热，产生氨（胺）气 ➢化学结构中含硫的药物，可经强酸处理后，加热，发生 硫化氢气体 ➢含碘有机药物经直火加热，可生成紫色碘蒸气 ➢含醋酸酯和乙酰胺类药物，经硫酸水解后，加乙醇可产 生乙酸乙酯的香味。
*最低检出浓度（Minimum detectable concentration）：以1:G或1:V表示，是应用 于某一反应，在一定条件下，能够观测出供试 品的最低浓度。
2. 空白试验（Blank test）:就是在与供试 品鉴别试验完全相同的条件下，除不加供 试品外，其它试剂同样加入进行的试验。
第二章 药物的鉴别试验 (Identification test）
（一）性状：反映了药物特有的物理性质，一般包括 外观、嗅、味、溶解度以及物理常数(mp. bp. 等)。
（二）一般鉴别试验（General identification test）： 证实其是某一类药物，而不能证实是哪一种药物。仅 供确认单一的化学药物，如为数种化学药物的混合物 或有干扰物质存在时，除另有规定外，应不适用。 无机药物 阴离子和阳离子的特殊反应 有机药物 典型的官能团反应
（5）辅料无干扰，待测组分的晶型变化，可用对照 品经同法处理后的光谱对比。
（6）待测成分的晶型不变化，辅料存在干扰，可参 照原料药的表征光谱，在指纹区选择数个不受辅料干 扰的待测成分作为特征的鉴别谱带。
3. 近红外光谱法 4. 原子吸收法（AAS） 5. 核磁共振法（NMR） 6. 质谱法（MS） 7. X射线粉末衍射法（XRD）
（三）光谱鉴别法
1．紫外光谱鉴别法 (p76)
➢同时测定、核对λmax和λmin； ➢规定一定浓度的供试液在λmax处的吸收度； ➢规定吸收波长和吸收系数法； ➢规定吸收波长和吸收度比值法； ➢经化学处理后，测定其反应产物的吸收光谱特性。
2.红外光谱 鉴别法
标准图谱对照法： 中国药典（2010年版) 对照品法：USP (32)。 JP(15)采用对照品鉴别法、对 照光谱鉴别和吸收波数鉴别法。 BP(2009)采用对照品法和对照 光谱法
二、鉴别反应的条件
（一）溶液的浓度 （二）溶液的酸碱度 （三）溶液的温度 （四）共存物质干扰 （五）反应介质 （六）试验时间
三、鉴别试验的灵敏度
（一）反应灵敏度和空白试验 1.反应灵敏度（Sensitivity） *最低检出量（Minimum detectable quantity） （又称检出限量）：以m表示，就是应用某一反 应，在一定的条件下，能够观测出的供试品的最 小量，其单位通常用微克（μg）表示。
例如，经一般鉴别反应的钠盐试验，证实某一药物 为钠盐，但不能辨认是氯化钠、苯甲酸钠或者是其 它某一种钠盐药物。要想最后证实被鉴别的物质到 底是哪一种药物，必须在一般鉴别试验的基础上， 再进行专属鉴别试验，方可确认。
（三）专属鉴别试验（Specific identification test）： 根据每一种药物化学结构的差异及其所引起的物理化 学特性的不同,选用某些特有的灵敏定性反应，来鉴别 药物的真伪。
ChP 2010: 雌二醇的熔点：本品的熔点为175180℃.
（3）比旋度
在一定波长与温度下，偏振光透过长1 dm 且每1 ml中含有旋光性物质1 g的溶液时， 测得的旋光度称为比旋度。反映手性药物 特性及其纯度的主要指标。
ChP 2010： 维生素C的比旋度测定：取本品， 精密称定，加水溶解并定量稀释使成每1 ml 中含约0.10 g的溶液，测定，比旋度为 +20.5~+21.5.
（二）化学鉴别法
1.干法 焰色试验 加热分解
➢取铂丝，用盐酸湿润后，蘸取供试品，在 无色火焰中燃烧，使火焰显出特殊的颜色。 ➢在适当的温度条件下，加热使供试品分解， 生成有特殊气味的气体。
2.湿法
呈色或褪色反应 沉淀生成反应 荧光反应 气体生成反应
常见的呈色反应
➢三氯化铁呈色反应---酚羟基或水解后产生酚羟基 ➢异羟肟酸铁反应---多为芳酸及其酯类、酰胺类 ➢茚三酮呈色反应---脂肪氨基 ➢重氮化-偶合显色反应---芳伯氨基或能产生芳伯氨 基 ➢氧化还原显色反应及其它颜色反应
（专属性很强、 应用较广）
适用范围：组分单一、结构明确的原料药；特别是
其他方法不易区分的同类药物。
2.1.试样制备方法：压片法、糊法、膜法和溶液法； 2.2.原料药鉴别 注意多晶现象； 2.3.制剂的鉴别 采取提取分离、适当干燥、压片绘制 图谱。 （1）有机溶剂直接提取，去除辅Leabharlann Baidu干扰测定IR （2）有机酸，有机碱的对应盐，加入酸或碱沉淀， 分离干燥测定IR （3）主成分有机酸，加碱溶解，过滤，加酸沉淀分 离干燥测定IR （4）无辅料或辅料干扰少，可直接测定。