生化实验技术答案

水解液中葡萄糖含量＝0.1%×（21.00－11.10）/10.00=0.099%（3分）
木薯样品中葡萄糖总量＝0.099％×1000＝0.99g（1分）
样品中淀粉含量＝(0.99×0.9/1.0)×100％＝89.1％（2分）
班姓名座号
…………………密……………封……………线……………密……………封……………线…………………
班姓名座号
…………………密……………封……………线……………密……………封……………线…………………
四判断题（10分）
1大蒜细胞提取分离SOD实验中，最终分离得到的沉淀物越多说明实验越成功。（×）
2测定生长促进剂效价时应采用全合成培养基（√）
3苯酚水溶液提取核酸可以使DNA和RNA分布在不同层中而分离。（√）
区带2只有一条带，证明纯化得到了纯物质（2分），分子量在3.5～14.4KD之间（2分）。
第页
3说明纸层析和离子交换层析分离氨基酸混合物的方法是根据氨基酸的什么性质?列出纸层析和柱层析的一般操作步骤。（7分）
纸层析是分配层析，利用分配系数不同，即氨基酸在两相中的溶解能力不同（1分）。离子交换层析利用氨基酸是两性物质，在一定pH下不同氨基酸带电性质和带电量不同，因此交换能力不同（1分）。
应用：不同分子量蛋白质分离、蛋白质分子量测定、蛋白质脱盐等（2分）
常用凝胶：葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶。（2分）
5木薯淀粉样品1.000克，用α－淀粉酶和糖化酶法完全水解后，定容至1000mL，用斐林试剂法测定还原糖含量。实验中，取斐林试剂甲乙液各5.00 mL，空白试验耗0.1%（w/v）标准葡萄糖21.00mL；取斐林试剂甲乙液各5.00 mL，加入上述水解液10.00mL，定糖试验耗0.1%（w/v）标准葡萄糖11.10 mL。试计算样品中淀粉含量。（6分）
9蛋白质分离纯化的基பைடு நூலகம்方法不包括：（A）
A．蒸馏B．盐析C．离子交换层析D．凝胶过滤
10等密度梯度离心的梯度介质为（C）
A．蔗糖B．甘油C．氯化铯D．多乙烯多胺和丙烯酸加成制备
三名词解释（15分）
1盐析和盐溶（3分）
在较低盐浓度下，随着盐浓度的升高，蛋白质溶解度增大的现象称为盐溶。（1.5分）
盐浓度较高时，随着盐浓度升高，蛋白质溶解度降低，从而有沉淀析出的现象，称为盐析。（1.5分）
班姓名座号
…………………密……………封……………线……………密……………封……………线…………………
嘉应学院生物系生化技术课程考试题(B卷)
（2006年7月日）
题号
一
二
三
四
五
六
七
总分
评卷人
一填空题（20分，每空1分）
1蛋白质含量测定最经典的方法是凯氏定氮法。
2两种RNA沉降系数分别为35S和70S，则相对分子量较大的是70S。
3细胞破碎的目的是更好获得胞内物质。
4蛋白质分离纯化中技术中与蛋白质分子量有关的有超速离心、超滤、SDS凝胶电泳、凝胶层析等方法。
5生化研究中放射性同位素的掺入方法有化学法、生物法、酶法等。
6华勃氏微量检压法检测物质含量时，如果同时有O2吸收和CO2放出，可在反应瓶中加入KOH
消除CO2的影响，测得实际耗O2量。测定酵母呼吸强度实验中，每隔一定时间测定体系压力变化时，都必须调到相同的参比点再读数，其原因是保持体积恒定。
9离子交换层析法提取谷氨酸只能用阳离子交换树脂。（×）
10氨基酸可以直接用标准氢氧化钠溶液滴定来测定含量。（×）
五分析解答题（40分）
1试述不连续凝胶电泳样品压缩成层原理。（5分）
样品压缩成层原理：
电极缓冲液：pH8.3Tris-甘氨酸
HCl→(解离)→Cl－，Cl－泳动速度最快（快离子）（1分）
CH2(NH2)COOH→(样品胶、浓缩胶pH6.7~6.8)→CH2(NH2)COO－（0.1％～1.0％）泳动速度最慢（慢离子）（1分）
蛋白质（P）泳动速度介于快慢离子之间（1分）
电泳时，Cl－超过P走在最前面，其后形成一个离子浓度较低的低电导区→较高电位梯度→P和慢离子加速移动→P压缩成层（2分）
2下图是垂直板式SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱，区带1是低分子量标准蛋白，其中含有分子量分别为97.4 KD、66.2 KD、43.0 KD、31.0 KD、20.1 KD、14.4 KD六种蛋白，区带2为经过分离纯化的人参多肽，3为牛胰岛素Ｂ链(3.5KD)，根据电泳图谱可得出何种结论？（4分）
4层析技术可以对物质分离纯化，也可以对物质进行定性定量分析。（√）
5分光光度法必须通过显色试剂与待测物反应后才能对物质进行测定。（×）
6在一定条件下，可用加热、改变pH等使杂蛋白变性沉淀而除去。（√）
7蛋白质电泳分离后可用考马斯亮蓝或氨基黑10B等进行染色。（√）
8氨基酸可以由酶催化脱羧放出CO2，因此可用气体检测法测定氨基酸的量。（√）
（2分）
5膜分离技术
膜分离技术是借助一定孔径的高分子薄膜，将不同大小、不同性状和不同特性的物质颗粒或分子分离的技术（2分）
6电渗
电场中，液体对于固体支持物的相对移动称为电渗。（2分）
7电泳分离技术
由于不同物质所带电荷性质、颗粒形状、大小不同，其在一定电场中的移动方向和移动速度不同，使物质得到分离的技术。（2分）
7测定氨基酸常用的荧光试剂是OPT等。
8聚丙烯酰胺凝胶制备用的单体是丙稀酰胺，交联剂为N，N－甲叉二丙烯酰胺，催化剂是
过硫酸铵＋TEMED或核黄素＋光。
9 HPLC是指高压液相色谱。
10斐林试剂快速法测定还原糖时，为了使终点更为明显，加入黄血盐（试剂名），此时终点颜色变化为出现浅黄色。滴定过程不能摇动锥形瓶的原因是防止空气氧化。
纸层析步骤：滤纸准备、样品处理、点样、平衡、展开、显色和定性定量分析。（3分）
柱层析步骤：固定相准备、装柱、上柱、洗脱和收集、定性定量分析。（2分）
4试述凝胶层析原理，说明凝胶层析的应用并列出常用凝胶名称（6分）。
凝胶层析柱装有多孔凝胶，当含有各组分的混合液流经凝胶层析柱时，各组分在层析柱内同时进行两种不同的运动。一种是随着溶液流动而进行的垂直向下的移动，另一种是无定向的分子扩散运动。大分子物质由于分子直径大，不能进入凝胶微孔，只能分布于凝胶颗粒的间歇中以较快速度流过凝胶柱。较小的分子能进入凝胶微孔，不断进出一个个颗粒的微孔内外，因此流动速度较慢，从而使混合溶液中各组分按照相对分子量由大到小顺序先后流出层析柱得到分离。（2分）
11生物物质超临界萃取常用的超临界流体是CO2。
二单项选择题（15分，每题1.5分）
1、生物法测定抗生素效价时最广泛应用的方法是（B）。
A稀释法B管碟法C滴定法D生长图谱法
2、商品sephadex使用前要先（C）
A再生B转型C溶涨C活化
3、只能测定醛糖的方法是（B）
A兰—爱农法B次碘酸钠法C铜试剂法D蒽酮试剂法。
2 LD50
半致死量（1分），指被试验动物中死亡率达到50％时的药物剂量，用来衡量药物毒性大小（1分）。
3双水相萃取
利用组分在互不相溶的水相中的溶解度不同而达到分离的萃取技术。
4亲和层析
利用混合液中各组分的物理化学性质的不同，使组分以不同比例分布在两相中。其中一个相是固定相，另一相是流动相，当流动相流经固定相时，各组分以不同的速度移动，从而得到分离。
4层析洗脱峰越窄，峰的斜率越大，分辨率（A）
A越大B越小C不变D无法确定
5、下列不属于还原糖的是（C）
A葡萄糖B麦芽糖C蔗糖D果糖
6、目前纯生啤酒生产中采用的是（A）技术。
A超滤B微滤C透析D反渗透。
7、蛋白质的含氮量约为（A）:
A.16% B.6.25% C.18% D.20%E.30%
8、离子交换层析装柱时，树脂在柱内有明显的分界线这是因为（D）原因造成的。A气泡上浮B树脂颗粒不均匀C干法装柱D装柱不均匀，树脂在柱内排列松紧不一
6三瓶未知液分别为蛋白质、糖和RNA，如何鉴别它们？（4分）
用双缩脲实际（或其他）鉴别蛋白，再用定磷法用定磷试剂鉴别RNA（每步2分）
7影响物质提取的主要因素有哪些？蛋白质和酶主要有哪些提取方法？提取中应注意哪些问题？（8分）
溶解度、扩散难易程度（2分）
水溶液、有机溶液、混合提取（3分）
注意尽可能使目的物溶解并保持目的物活性，注意选择合适的溶液、控制温度、pH，做好破碎等前处理。（3分）