人血涂片的制作

使用玻片时只能手持玻片边缘,切勿触及玻片表面,以 保持玻片清洁,Fra Baidu bibliotek燥,中性、无油腻。
一张良好的血片,要求厚薄适宜,头体尾分明,分布均 匀,边缘整齐, 两侧留有空隙。血片制好后最好立即 固定染色,以免细胞溶解和发生退行性变。
血膜未干透,细胞尚未牢固附在玻片上,在染色过程中 容易脱落, 因此血膜必需充分干燥。
人血涂片的制作
河北大学细胞生物学实验室
血涂片的显微检查是血液细胞学检查的基本方 法，临床上应用极为广泛，制备厚薄适宜，分布均 匀，染色良好的血涂片是血液学检查的重要基本技 术之一。
涂片法制片是生物显微制片的基本方法之一。
步骤
可分5个步骤进行 消毒 取血 推片 染色 观察
消毒与取血
染色
用特种玻璃铅笔在血膜两侧画两条线， 防止染液外溢。再将瑞氏染液(伊红-亚甲基 蓝)滴在血膜上，至染液淹没全部血膜，染 半分钟。加等量蒸馏水(或缓冲液)与染液混 合再染5分钟。最后用蒸馏水把染液冲掉， 用吸水纸吸干，自然干燥后，即可观察。
观察
红细胞
淡红色，无核的圆形细胞，因红细胞为双凹形，故边 缘部分染色较深，中心较浅，直径7-8微米。
染液不可过少,以防蒸发干燥染料沉着于血片上难冲 洗干净。冲洗时应用流水将染液冲去,不能先倒掉染 液,以免染料沉着于血片上。
注意事项
细胞染色对氢离子浓度十分敏感,在染色过程中玻片 必须化学清洁,配制瑞氏染液必须用优质甲醇,稀释染 液必须用缓冲液,冲洗用水应近中性, 否则各种细胞 染色反应异常,致使细胞的识别困难,甚至造成错误。
染色时间与染液浓度,室温高低,细胞多少有关。染液 越淡,室温越低, 细胞越多,所需染色时间越长或应适 当增加染液量,因此染色时间应视具体情况而定。特 别是更换新染料时必须经试染,摸索最佳染色条件。
消毒 先按摩取血部位，使血流通畅；再用酒精
消毒采血针和取血部位（如指尖）。 取血
待酒精干后，刺破皮肤，使血自然流出， 勿挤。取干净载片，让血滴在离载片一端中 4～5毫米处，注意手指持握载片的边缘，勿触 及其表面。不能使载片接触取血部位的皮肤。
推片
取一块边缘光 滑的载片做推片。 将其一端置于血滴 前方，向后移动到 接触血滴，使血液 均匀分散在推片与 载片的接触处。然 后使推片与载片呈 30°～40°角，向 另一端平稳地推出， 如右图所示。涂片 推好后，迅速在空 气中摇，使之自然 干燥。
血小板为不规则小体，直径2 - 3微米。其周围部分浅 蓝色，中央有细小的紫红色颗粒，聚集成群。
注意事项
玻片的清洗：新玻片常有游离碱质,因此应用清洗液 或10%盐酸浸泡24h,然后再彻底清洗。用过的玻片可 放入适量肥皂水或合成洗涤剂的清水中煮沸20min,再 用热水将肥皂和血膜洗去,用自来水反复冲洗,必要时 再置95%乙醇中浸泡1h,然后擦干或烤干备用。
颗粒白细胞
嗜中性颗粒白细胞：体积略大于红细胞，细胞核被染成 紫色分叶状，可分1-5叶。直径10-12微米。
嗜酸性颗粒白细胞：略大于嗜中性白细胞，细胞核染成 紫色，通常为2叶，胞质充满嗜酸性大圆颗粒，被染 成鲜红色。直径10-15微米。
嗜碱性颗粒白细胞：体积略小于嗜酸性白细胞，细胞质 中有大小不等被染成紫色的颗粒，颗粒数目较嗜酸性 白细胞的颗粒少，核1-2叶，染成淡蓝色。直径10-11 微米。
无颗粒白细胞
淋巴细胞：可观察到中、小型两种。小淋巴细胞与红 细胞大小相似，圆形，核致密，染成深紫色。周围 仅一薄层嗜碱性染成淡蓝的细胞质。中淋巴细胞较 大，核圆形。直径6-8微米。
单核细胞：体积最大，细胞圆形。胞质染成灰蓝色。 核呈肾形或马蹄形，染色略浅于淋巴细胞的核。直 径14-20微米。
血小板