免疫学实验指导书

免疫学实验指导

刘佳斌编

生命科学学院

生物技术系

2005.3

实验1

动物的注射采血及血清制备

家兔采血有耳静脉采血，耳动脉放血，心脏采血和劲动脉放血法，耳缘静脉采血一般适用于只需少量血液，常用于免疫注射采少量血，测其效价，心脏采血和耳动脉采血法，耳缘静脉采血一般只适用少量采血。常用于免疫注射采少量血，测其效价。心脏采血和耳缘动脉采血可采大量血有能保存动物，从动脉可采大量，动物死去。兔一般采血20ML不影响其存活。

鸡一般用心脏采血法，每只鸡一次取血20ML，不影响其存活，经3—6个月后，可再次采血。注射途径一般有皮下、静脉、皮内和腹腔。

一、目的与内容：

(一)目的

1.学习动物不同部位的采血方法

2.练习对家兔耳静脉的注射方法

3.用离心法制备血清

(二)内容

1、鸡心脏采血

2、家兔采血

3、制备血清

二、材料与用品

(一)材料

兔、鸡

(二)用品

生理盐水、注射器、剪刀、镊子、试管、离心管、离心机

三、操作与观察

(一)鸡心脏采血

1、固定鸡腿、翅膀，拔取心脏部位羽毛，用手将鸡按定。

2、寻找内肋骨到肩胛部皮下静脉，心脏在此静脉分支下面，以食指触摸心跳，消毒，垂直刺入针头，如触及肋骨则稍后退，将针头稍后偏于胸骨，切不可硬往里插，针头向里刺入后，可感到心脏跳动。此时，针头刺入心脏，徐徐抽取血液。采血20ML取下针头，将血液放入离心管。

(二)家兔采血

1、家兔心脏采血

（1）固定兔，剪取左前胸心脏部位的毛，酒精棉球消毒皮肤。

（2）用左手食指、中指、无名指防在右胸处，轻轻向左推，将心脏推至左恻固定，拇指在胸左恻由下向上数至第三至四肋骨探测心脏搏动最剧烈处

（3）将针头从搏动处刺入心脏，若准确徐徐抽取血液，足量后拔除，再改变方向成径直刺入心脏，取血液20ML，放入离心管。

（4）家兔静脉注射，在耳缘静脉注入1ML生理盐水。

2、家兔耳缘静脉采血。

(三)制备血清

四、作业与思考

1、心脏采血关键什么？需要注意哪些问题？

2、抓兔子时为什么不能抓它的双耳？正确的抓取方法是什么？

实验2

抗原与免疫血清的制备

将抗原注射入动物体内，刺激动物的B淋巴细胞转化为浆细胞，产生特异性抗体。待其血清中累积大量抗体时，采其血液分离血清，即抗体的免疫血清。抗原量低到一定程度时，抗体不能产生或用现有方法不能测出，但超过最高限度，又对抗体产生抑制作用。本实验抗原为细菌细胞，采用每毫升含9亿个细菌比较恰当。

一、目的与内容

(一)目的

1、抗原与抗体的制备方法

2、为凝集实验制备材料

(二)内容

1、抗原的制备

2、免疫血清的制备

二、材料与用品

(一)材料

大肠杆菌，家兔

(二)用品

麦氏比浊管，试管，注射器，9号、7号针头，离心机等

0.5%的石炭酸生理盐水

三、操作与观察

（一）抗原的制备

（1）取5ML0.5%的石炭酸生理盐水，注射大肠杆菌斜面，洗下菌台

（2）用无菌毛细菌滴管吸取洗下的菌液，注入无菌小试管

（3）将此含有菌液的小试管放60度水浴箱中1小时，并不时摇动。

（4）取一与比浊管同质量的小试管，加菌液1ml，再加石炭酸生理盐水４ml（或更多，是原菌液浓度而定），混匀后各比浊管比浊。

麦氏比浊法原理：某一未知菌浓度，菌液在投射光作用下用肉眼与某一比浊管比较，如果二者透光度相同，即可目测该菌大致浓度。

（5）稀释：用0.5％的生理盐水，待菌液稀释9亿／ｍｌ，即等浊于第3支。

（二）免疫血清的制备

（1）注射动物：耳缘静脉注射抗原。

（2）14日采血1ｍｌ，分离血清，测其效价，合格即大量采血。

（3）心脏采血

（4）分离免疫血清。

四、作业与思考

１．在动物体内制备免疫血清为何要多次注射？

２．制备大肠杆菌抗原时，使用石炭酸生理盐水和加热６０℃1ｈ的目的是什么？

实验3

环状沉淀反应

可溶性抗原与相应抗体反应，在有电解质的情况下，会产生细微的沉淀，称为沉淀反应。环状沉淀反应是使抗原抗体在沉淀管内形成交界面，然后在此交界面处出现—环状乳白色沉淀物，出现此环状反应的抗原最高峰，稀释度为沉淀素效价。

一、目的与内容

(一)目的

通过沉淀素的效价测定，学习环状沉淀反应的操作方法及结果观察。

(二)内容

鸡血清与免抗鸡免疫血清发生沉淀反应。

二、材料与用品

(一)材料

鸡血清、兔血清、免抗鸡免疫血清

(二)用品

小试管、1ml吸管量筒、生理盐水

三、操作与观察

1.将鸡血清以1：25稀释，去该液1ml，用倍比稀释法稀释为各种浓度（1#1*、2#2*……）分别表示自第1管、第2管中吸取1ml以此类推。）

2.将9个干洁小试管插在试管架上，使直立。

3.用吸管吸取1：2的免抗鸡免疫血清，加入小试管底部，每管约两滴。

从最高峰稀释度加起，加入时沿壁徐徐加入，使与下层免抗鸡免疫血清之间形成界面，切勿摇动。

5.室温静置15—30分钟，观察试管中的两液面交界处，有无白色沉淀出现。

6.结果记录：由白色沉淀“+”，无沉淀“—”，出现沉淀最大稀释度的试管其稀释度倒数为沉淀素效价。

四、作业与思考

1.结果：

该沉淀素效价为

2.试验时为何稀释抗原，而不稀释抗体？