MS固体培养基的配制

MS固体培养基的配制

一、实验目的

通过实验实训，掌握MS固体培养基的配制技术及操作技能。

二、材料与用具

配制MS培养基的各种母液、生长调节物质母液、琼脂、蔗糖、蒸馏水、移液管、量筒、电饭煲、全自动高压灭菌器、pH试纸、0.1mol/L 的NaOH、0.1mol/L的HCl、培养瓶、标签、铅笔等。

三、方法与步骤

（一）按母液顺序和规定量，用吸管提取母液，放入盛有一定量（150-200ml）纯净水的量筒中。

母液一 30ml/L

母液二 15ml/L

母液三15ml/L

母液四 15ml/L

母液五30ml/L

母液六7.5ml/L

1-8组4人配1L，9-10组3人配1L。

（二）加入植物生长调节物质加入的具体调节物质与量视培养物不同而异（本次实验不加生长调节剂）。

（三）定容加纯净水定容至1000ml。

（四）倒入预先用铅笔标好刻度的电饭煲中。

（五）加糖、加热：加入蔗糖20g/L并开始加热。

（六）加琼脂粉12g/L：在电饭煲中给培养基加温至冒热气时均匀缓慢地加入琼脂粉，用玻璃棒不断搅拌至全部熔解并煮沸。

（七）调节pH值：煮沸后，用试纸测试pH值，用0.1mol/L的NaOH或0.1mol/L的HCl把培养基的pH调整到5.6—5.8；加水至预先标注的刻度处，煮沸1-2分钟。

（八）培养基分注把配置好的培养基用烧杯分注到培养瓶中，分注前用量筒量取30ml水倒入培养瓶测试，每瓶装30ml（3瓶/100 ml）左右。分注后立即加盖，贴上标签，注明培养基的名称、配制时间、配制人姓名。

（九）培养基灭菌，无菌水、无菌瓶、无菌纸片制作。

1.将蒸馏水注入灭菌腔，直至水流进入水位板中间的水位指示器。

2.将待灭菌的物品放入提篮中，将提篮放入灭菌腔中。

3.插上电源，打开开关。

4.旋紧“排汽旋钮”，关闭灭菌腔盖，直至指示灯“LOCKED”亮起。

5.选择灭菌程序，按“SET/ENT”键设置温度为121℃，保温时间20min。

6.长按“START”键开始灭菌。

7.灭菌结束时，所有程序执行完毕且温度低于80℃时，指示灯“COMP”闪烁，系统发出5声长声。

8.先旋松“排汽旋钮”，打开灭菌腔盖，待蒸汽散开戴上隔热手

套，取出灭菌物品。

9.关闭电源，放出腔体内的水，擦干腔体。