酸性α—醋酸萘酯酶

实验五：酸性α—醋酸萘酯酶

一、实验目的和要求：

1、掌握酸性α—醋酸萘酯酶实验的原理及在免疫学方面的应用；

2、学会应用该实验方法鉴别不同免疫细胞在不同疾病中的作用。

二、实验内容：

鉴别人和鼠中T、B淋巴细胞。

三、实验步骤：

1、配制试剂。

A液：PH7.6的磷酸盐缓冲液：

甲液：将9.08克的磷酸二氢钾溶于1L蒸馏水中；

乙液：将23.88克十二水合磷酸氢二钾溶于1L蒸馏水中；

取甲液12mL加乙液88mL即成磷酸盐缓冲液。

B液：4%副品红溶液：

将4克副品红溶于100mL2M盐酸内，溶解过滤，4℃保存。

C液：4%亚硝酸钠溶液：

取0.4克亚硝酸钠溶于10mL蒸馏水中，现用现配。

D液：2%醋酸ɑ萘酯液：

取2克醋酸ɑ萘酯，溶于100mL无水丙酮中，溶解后装棕色瓶，4℃保存。

孵育液：将2.4mLC缓慢滴入到2.4mLB中，震荡混匀，静置5min，之后将此溶液加进80mLA液中，混匀，滴入2mLD，调PH5.8-6.0。

1%孔雀石绿染液：

将1克孔雀石绿溶于100mL蒸馏水中，用氯仿处理后4℃保存。

2、血液涂片

取一只小鼠，断尾采血，涂抹于洁净玻片，编号为D，血液层越薄越好，另外手指尖取血涂片，编号D1。

3、孵育和染色

待血液自然干燥后置于孵育液内，37℃孵育90min，水冲洗5min，孔雀

石绿复染1min，流水冲洗，干燥后，制片显微镜观察（用油镜）。4、结果判定

淋巴细胞胞浆内出现大小不等、数量不一的深红色颗粒者为ANAE阳性细胞（T细胞），胞浆内无颗粒者为ANAE阴性细胞（B细胞）。

四、实验结果

2、分析和讨论

人的TB淋巴细胞相对于小鼠的都比较大，但是形态相似，胞浆内呈现大小不一的红色颗粒为T细胞，B细胞，胞核比较搭，几乎占据整个细胞。

五、作业

酸性α—醋酸萘酯酶在兽医临床上有何应用？

在免疫学方面的应用，检测TB淋巴细胞的活性，鉴别不同免疫细胞在不同疾病中的作用，ANAE测定可作为评价肝细胞损伤、肝纤维化以及肝脏合成功能异常的一项新的血清学指标。