大肠杆菌病的实验室诊断之细菌菌种的保存.ppt
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• 缺点：
– 保存时必须直立放置，所占位置较大，同时也不便携带。
– 从液体石蜡下面取培养物移种时，接种环在火焰上烧灼 时，培养物容易与残留的液体石蜡一起飞溅
液体石蜡覆盖保藏法
1 制备灭菌石蜡 2 菌种斜面培养 3 菌种覆盖石蜡 4 菌种保存方法
· 将液体石蜡分装于三 角烧瓶内，塞上棉塞， 并用牛皮纸包扎， 121℃灭菌30分钟， 然后放在40℃温箱内， 使水汽蒸发掉，备用。
2、液体石蜡覆盖保藏法
是传代培养的变相方法，能够适 当延长保藏时间，它是在斜面培 养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌 的液体石蜡，一方面可防止因培 养基水分蒸发而引起菌种死亡， 另一方面可阻止氧气进入，以减 弱代谢作用。
3、载体保藏法
是将微生物吸附在适当的载体， 而后进行干燥的保藏法，例如沙 土保藏法和滤纸保藏法
内容
液体石蜡覆盖保藏法
1 制备灭菌石蜡 2 菌种斜面培养 3 菌种覆盖石蜡 4 菌种保存方法
· 无菌操作打开平皿盖，接种环灼烧 灭菌，冷却后挑取少许纯培养的菌 落，将其立即伸入斜面培养基底部， 由下而上在斜面上弯曲划线，然后 管口和棉塞通过火焰灭菌后塞好， 接种环灼烧灭菌后放回原处。
· 在斜面管口，写明菌种名，日期， 置37℃温箱内，培养18～24h
液体石蜡覆盖保藏法
液体石蜡覆盖保藏法的优缺点
• 优点：
– 实用而效果好。 • 霉菌、放线菌、芽孢细菌可保藏2年以上不死，酵母 菌可保藏1~2年，一般无芽孢细菌也可保藏1年左右， 甚至用一般方法很难保藏的脑膜炎球菌，在37℃温箱 内，亦可保藏3个月之久。
– 制作简单，不需特殊设备，且不需经常移种。
· 将试管直立，置低温或 室温下保存（有的微生 物在室温下比冰箱中保 存的时间还要长）
内容
液体石蜡覆盖保藏法
1 制备灭菌石蜡 2 菌种斜面培养 3 菌种覆盖石蜡 4 菌种保存方法
· 用灭菌吸管吸取灭菌的 液体石蜡，注入已长好 菌的斜面上，其用量以 高 出斜 面顶端 1cm 为准， 使菌种与空气隔绝。
内容
液体石蜡覆盖保藏法
1 制备灭菌石蜡 2 菌种斜面培养 3 菌种覆盖石蜡 4 菌种保存方法
4、寄主保藏法
用于目前尚不能在人工培养基 上生长的微生物，如病毒、立克 次氏体等
5、冷ห้องสมุดไป่ตู้保藏法
可分低温冰箱（-20~-30℃，-50~80℃）、干冰酒精快速冻结（约 -70℃）和液氮（-196℃）等保藏 法。
6、冻干法
先使微生物在极低温度（-70℃左 右）下快速冷冻，然后在减压下 利用升华现象除去水分（真空干 燥）。
大肠杆菌病的实验室诊断
细菌的菌种保存 主讲教师 郭洪梅
实验目标
• 学会用液体石蜡覆盖保藏法保存菌种。 • 了解菌种的保存方法。
实验器材
• 恒温培养箱 • 大肠杆菌纯培养物 • 营养琼脂试管斜面 • 接种环 • 酒精灯等
菌种保存方法
1、传代培养保藏法
有斜面培养、穿刺培养等，培养 后于4~6℃冰箱内保存。
– 保存时必须直立放置，所占位置较大，同时也不便携带。
– 从液体石蜡下面取培养物移种时，接种环在火焰上烧灼 时，培养物容易与残留的液体石蜡一起飞溅
液体石蜡覆盖保藏法
1 制备灭菌石蜡 2 菌种斜面培养 3 菌种覆盖石蜡 4 菌种保存方法
· 将液体石蜡分装于三 角烧瓶内，塞上棉塞， 并用牛皮纸包扎， 121℃灭菌30分钟， 然后放在40℃温箱内， 使水汽蒸发掉，备用。
2、液体石蜡覆盖保藏法
是传代培养的变相方法，能够适 当延长保藏时间，它是在斜面培 养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌 的液体石蜡，一方面可防止因培 养基水分蒸发而引起菌种死亡， 另一方面可阻止氧气进入，以减 弱代谢作用。
3、载体保藏法
是将微生物吸附在适当的载体， 而后进行干燥的保藏法，例如沙 土保藏法和滤纸保藏法
内容
液体石蜡覆盖保藏法
1 制备灭菌石蜡 2 菌种斜面培养 3 菌种覆盖石蜡 4 菌种保存方法
· 无菌操作打开平皿盖，接种环灼烧 灭菌，冷却后挑取少许纯培养的菌 落，将其立即伸入斜面培养基底部， 由下而上在斜面上弯曲划线，然后 管口和棉塞通过火焰灭菌后塞好， 接种环灼烧灭菌后放回原处。
· 在斜面管口，写明菌种名，日期， 置37℃温箱内，培养18～24h
液体石蜡覆盖保藏法
液体石蜡覆盖保藏法的优缺点
• 优点：
– 实用而效果好。 • 霉菌、放线菌、芽孢细菌可保藏2年以上不死，酵母 菌可保藏1~2年，一般无芽孢细菌也可保藏1年左右， 甚至用一般方法很难保藏的脑膜炎球菌，在37℃温箱 内，亦可保藏3个月之久。
– 制作简单，不需特殊设备，且不需经常移种。
· 将试管直立，置低温或 室温下保存（有的微生 物在室温下比冰箱中保 存的时间还要长）
内容
液体石蜡覆盖保藏法
1 制备灭菌石蜡 2 菌种斜面培养 3 菌种覆盖石蜡 4 菌种保存方法
· 用灭菌吸管吸取灭菌的 液体石蜡，注入已长好 菌的斜面上，其用量以 高 出斜 面顶端 1cm 为准， 使菌种与空气隔绝。
内容
液体石蜡覆盖保藏法
1 制备灭菌石蜡 2 菌种斜面培养 3 菌种覆盖石蜡 4 菌种保存方法
4、寄主保藏法
用于目前尚不能在人工培养基 上生长的微生物，如病毒、立克 次氏体等
5、冷ห้องสมุดไป่ตู้保藏法
可分低温冰箱（-20~-30℃，-50~80℃）、干冰酒精快速冻结（约 -70℃）和液氮（-196℃）等保藏 法。
6、冻干法
先使微生物在极低温度（-70℃左 右）下快速冷冻，然后在减压下 利用升华现象除去水分（真空干 燥）。
大肠杆菌病的实验室诊断
细菌的菌种保存 主讲教师 郭洪梅
实验目标
• 学会用液体石蜡覆盖保藏法保存菌种。 • 了解菌种的保存方法。
实验器材
• 恒温培养箱 • 大肠杆菌纯培养物 • 营养琼脂试管斜面 • 接种环 • 酒精灯等
菌种保存方法
1、传代培养保藏法
有斜面培养、穿刺培养等，培养 后于4~6℃冰箱内保存。