一般毒性作用试验

注射途径。
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二、急性毒性试验 急 性 毒 性 作 用
经口(胃肠道)接触 :
灌胃:小鼠0.21.0ml/只或0.10.5ml/10g
大鼠一次灌胃体积不超过5ml/只 家兔不超过10ml/2kg 狗不超过50ml/10kg
吞咽胶囊: 经呼吸道接触 : 静式吸入
动式吸入
动物数
10 10 10 10 10
死亡数
0 2 5 7 9
2
3 4
5
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M=Xk-i(∑p-0.5)=1.4961-0.08（2.3-0.5）
Sm=i(∑pq/n)1/2
=0.08（0.16/10+0.25/10+0.21/10+0.09/10）1/2
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一般毒性作用试验
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填
R R e d u c t i o p l a c
R e m e f i n e m 3R原则： n t
词
游 戏
e
n
Replacement
Reduction
n
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t
Refinement
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一般毒性毒性
§1 急性毒性作用
§2 蓄积毒性 §3 亚慢性和慢性毒性作用
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二、急性毒性试验 急 性 毒 性 作 用
⒉试验动物的年龄和体重：
急性试验动物不宜过老或过幼，通常要求选择刚成年
动物进行试验，而且须是未曾交配和受孕的动物。例 如：大鼠180～240g、小鼠18～25g、家兔2～2.5kg、 豚鼠200～250g、狗10～15kg。同一批试验动物体重
染毒后继续禁食2~4h，但在禁食时要保障饮水。
6.实验动物的预检：
选择健康动物 1~2周的检疫期
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二、急性毒性试验 急 性 毒 性 作 用
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（二）试验动物的饲养环境
恒定的温度：22±3℃
湿度：30~70% 照度：昼夜各半
饲料合格、饮水合格、垫料合格
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二、急性毒性试验
我国食品毒理急性毒性分级法(1994)
急性毒性分级 大鼠经口LD50(mg/kg) 大致相当于70kg人的致死量
6级(极毒)
<1
稍尝,<7滴
5级(剧毒) 4级(中等毒) 3级(低毒) 2级(实际无毒)
1级(无毒)
1~50 51~500 501~5000 5001~15000
>15000
7滴~1茶匙 1茶匙~35克 35~350克 350~1050克
实际无毒
<1 1~ 50~ 500~ 5000~
<10 10~ 100~ 1000~ 10000~
<5 5~ 44~ 350~ 2180~
<0.05 0.05~ 0.5~ 5~ >15
0.1 3 30 250 >1000
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三、急性毒性评价 急 性 毒 性 作 用
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霍恩法
利用剂量对数与死亡率的转换数呈直线关系
而设计的方法，又称平均移动法或剂量递增 法。该法使用动物数少，可直接查表求出 LD50 。 该法推荐使用4个染毒剂量，要求每组动物数 相等，一般用4-5只动物，且剂量组按等比级 数排列。
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序贯法
又称平均数法、阶梯法或上-下法，先以一个
§4 局部毒性作用
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§1 急性毒性作用
一、急性毒性和急性毒性试验的目的
二、急性毒性试验 三、急性毒性分级
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一、急性毒性和急性毒性试验的目的
急 性 毒 性 作 用

急性毒性(acute toxicity)是指机体(人或试验
动物)一次接触或24小时内多次接触化学物后在
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半。如果在预试验时发现化学毒物(如农药)对雌、
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二、急性毒性试验 急 性 毒 性 作 用
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4.动物数量Fra Baidu bibliotek随机分组：
大、小鼠等小动物 每组10只 狗等大动物 每组6只 分组原则——随机化原则
5.禁食：
经消化道染毒时，要求试验前对动物禁食 大鼠、小鼠——隔夜进食；染毒后禁食4h 大动物——每日上午喂食前染毒
缺点？
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二、急性毒性试验 急 性 毒 性 作 用
(六)经典急性毒性试验的局限性 1.消耗的动物量大 2.获得的信息有限
3.测得的LD50仅仅是一个近似值
4.在安全性评价中仅评价动物死亡和简单的
症状观察是不够的，更需要的是生理学、血 液学及其它化验检查所提供的深入细致的毒 性信息。
②动物易于获得-可获得性原则 ③品系纯化-重复性和均一性原则 ④价格较低和易于饲养等条件。-相容或相匹配原则
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二、急性毒性试验 急 1．试验动物的种属和品系 性 最好用两种种属的动物 啮齿类:小鼠、大鼠、豚鼠或家兔 毒 非啮齿类：狗或猴。 性 急性皮肤毒性试验可选用成年大鼠、豚鼠或家兔， 优先考虑白色家兔。而急性吸入毒性试验和经口急 作 性毒性试验则优先考虑大鼠。 用
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二、急性毒性试验

（四）染毒剂量与分组:
2．预试验 ①设定以此预期值作为待测化学物的中间剂量组，并 在该剂量的上下各设计 l一2 个剂量组作为预试验剂量。 ②根据确定的剂量组进行染毒。 ③根据预试验的死亡资料确定组距。
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二、急性毒性试验 急 3．正式试验; 性 一般来说、根据试验设计所选用的LD 定组数。 毒 性 作 用
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一、急性毒性和急性毒性试验的目的
急 性 毒 性 作 用
急性毒性试验常用的毒性参数：
LD50/LC50 Zac （LD50/Limac）
Zac为半数致死剂量与急性阈剂量的比值
LD84/LD16(或LC84／LC16) 剂量—反应曲线斜率
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剂量
12.59 10.00 7.94 6.31
存活 死亡
0 2 2 1 2 3 2 0
化学物染毒，10mg/kg 剂量试探，预计使用4 个剂量组，剂量组距对 数值0.2，设计使用12 只动物，结果如下
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∑x f=12.59×2+10×5+7.94×4+6.31×1
该法优点是节省动物，一般12-14只左右动物 即可完成实验。
经皮肤接触 : 注射途径接触:
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二、急性毒性试验 急 性 毒 性 作 用

（四）染毒剂量与分组:
1．查阅文献
①了解化学毒物的结构式、分子量、常温常压下的状
态、熔点、沸点、密度、闪点、挥发度、蒸气压、水 溶性和脂溶性等理化特性，生产批号及纯度，杂质成 分与含量等。 ②确定使用哪一种计算方法求 LD50 ，然后再设计剂量 分组。 LD50 的计算方法常用寇氏法、概率单位法、霍 思法等。 ③找出与受试化学毒物结构与理化性质近似的化学物 的毒性资料，并以文献资料中相同的动物种系和相同 接触途径所测得的LD50(LC50)值作为受试化学物的预期 毒性中值。
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三、急性毒性评价 急 性 毒 性 作 用
外源化学物急性毒性分级（WHO）
毒性分级
大鼠一次经口LD50 (mg/kg) 6只大鼠吸入4小时，死 亡2~4只的浓度(ppm) 兔经皮 LD50(/mg/kg) 对人可能致死的估计量 g/kg 总量(g/60kg)
剧毒
高毒 中等毒 低毒
急 性 毒 性 作 用
（三）染毒途径的选择:
染毒途径（exposure routes）的选择需考虑： 1、模拟人在生活和生产环境中实际接触受试 物的途径和方式； 2、有利于不同化学物之间急性毒性大小的比 较； 3、受试物的性质和用途； 4、 各种受试物毒性评价程序的要求等。 最常用的染毒途径为经口、经呼吸道、经皮及
短期(最长到14天)内所发生的毒性效应，包括
一般行为、外观改变、大体形态变化以及死亡
效应。
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一、急性毒性和急性毒性试验的目的

目的
①测试和求出化学毒物对一种或几种试验动物的致死量
(以LD50表示)以及其它的急性毒性参数，了解急性毒作用 强度。 ②并通过观察动物中毒表现和死亡的情况，了解急性毒作 用性质、可能的靶器官和致死原因，提供化学毒物的急性 中毒资料、初步评价对人体产生损害的危险性。 ③探求化学毒物急性毒性的剂量—反应关系与中毒特征。 ④为亚慢性、慢性毒性作用试验的染毒剂量设计提供参考 依据。 ⑤研究化学毒物急性中毒的预防和急救治疗措施。 ⑥为毒理学机制研究提供线索 。
剂量进行实验，若动物死亡，则以下一个较 小剂量试探；若动物存活，则以较大剂量试 探，依次类推，最终求出LD50。
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LD50 = (∑x f)/n
n: 使用的动物总数；X：每个剂量组的剂量 f : 每个剂量组使用动物数
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举例：小鼠经口给与某
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二、急性毒性试验 急 3.病理检查及其他指标: 性 急性毒性试验中，对死亡的动物均应及时进行大体解 剖和病理组织学检查，肉眼观察主要脏器的大体病理 毒 变化，如脏器大小、外观、色泽的变化，有无充血、 出血、水肿或其它改变，对有改变的脏器进行取材做 性 组织病理学检查。对存活动物在观察期结束时进行大 体病理检查．必要时做组织病理学检查。根据试验需 要可进一步扩大观察项目．如体温、心电图、脑电图 作 或进行某些生化指标测定等。 用
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LD50的计算方法
改进寇氏法
霍恩法 序贯法
Bliss法
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改进寇氏法
是利用计量对数与死亡率呈S型曲线而设计的
方法，又称平均致死量法。本法要求每个染 毒剂量组动物数要相同，各剂量组组距呈等 比级数，死亡率呈正态分布，最低剂量组死 亡率<20%，最高剂量组>80%。
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（五）试验周期与毒效应观察:
二、急性毒性试验
（五）试验周期与毒效应观察 急 4.死亡和死亡时间 性 重点观察和记录每只动物死亡的时间，特别是最 毒 早出现死亡的时间以及各个剂量组动物的死亡数。 分析中毒死亡时间的规律具有一定意义，可为深 性 人研究化学物的毒作用机制提供参考。 作 用
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计算公式如下：
M=Xk-i(∑p-0.5) Sm=i(∑pq/n)1/2
i：相邻两剂量组之对数差值 Xk：最大剂量的对数值 ；q：存活率 ∑p：各组死亡率之和; n:每组动物数
M:lg LD50
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组别
1
剂量对数
1.1761 1.2561 1.3361 1.4161 1.4961
变异范围不应超过该批动物平均体重的20％。
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三、急性毒性试验 急 性 毒 性 作 用
3.试验动物的性别：
急性毒性试验的主要内容是求LD50，除特殊要求
外，一般急性毒性试验对动物性别要求为雌雄各 雄动物毒效应的敏感性有明显差异，则应单独分 别求出雌性与雄性动物各自的LD50。如果试验是 为致畸试验作准备，也可仅作雌性动物的LD50测 试。
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（四）染毒剂量与分组:
50计算方法来确
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二、急性毒性试验
（五）试验周期与毒效应观察
1.中毒症状
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二、急性毒性试验 急 性 毒 性 作 用

（五）试验周期与毒效应观察:
2.体重
在观察试验动物中毒症状的过程中，应同时观察体重
的变化。体重可以反映动物中毒后的整体变化。体重 改变的原因很多，若化学毒物刺激或损伤消化道可出 现试验动物饮食减少甚至拒食，表现为体重减轻。若 化学毒物引起腹泻，将影响食物吸收和利用，体重也 会减轻。如果化学毒物影响水的摄取或肾功能急性损 伤，也可能在体重上反映出来。所以，对存活动物尤 其是对低于LD50剂量组的存活动物．应在观察期14天 内称量其体重的变化．以便了解受试物引起毒效应的 持续时间。
二、急性毒性试验的主要步骤
健康动物的选择 性别辨认 动物称重、编号和分组
剂量设置
受试物的配制 灌胃
中毒体征和动物死亡情况观察
LD50的计算
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二、急性毒性试验

(一)试验动物
[原则]：
①急性毒性试验要求选择对化学毒物的代谢和毒效应表
现与人的反应尽可能一致的试验动物。-相似性原则