第四讲免疫血清学技术

参与凝集试验的抗体主要为IgG、IgM。 凝集试验可用于检测抗原或抗体。 凝集试验可根据抗原的性质、反应的方式
分为直接凝集试验（简称凝集试验）和间 接凝集试验。
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直接凝集试验
颗粒性抗原与凝集素直接结合并出现凝集 现象的试验称作直接凝集试验(direct agglutination test)
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高敏感性的标记分子
荧光素 酶分子 放射性同位素
荧光抗体技术 酶标抗体技术 同位素标记技术
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（一）荧光抗体标记技术
fluorescent-labelled antibody technique
是指用荧光素对抗体或抗原进行标记，然 后用荧光显微镜观察所标记的荧光以分析 示踪相应的抗原或抗体的方法。
根据参与反应的抗原性质不同，分为由颗粒性 抗原参与的凝集试验和由可溶性抗原参与的沉 淀试验二大类
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（一）凝集试验
细菌、红细胞等颗粒性抗原，与相应抗体 结合，在有适当电解质存在下，经过一定 时间，形成肉眼可见的凝集团块，称为凝 集试验(agglutination test)。
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参加沉淀试验的抗原称沉淀原，抗体称为沉 淀素。
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环状沉淀试验
在小口径试管内先加入已知抗血清，然后小心沿管壁 加入待检抗原于血清表面，使之成为分界清晰的两层
数分钟后，两层液面交界处出现白色环状沉淀，即为 阳性反应。
本法主要用于抗原的定性试验，如炭疽病的诊断 (Ascoli试验)。试验时出现白色沉淀带的最高抗原稀释 倍数，即为血清的沉淀价。
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二、标记抗体技术
抗体、抗原分子小，在含量低时形成的抗原 抗体复合物是不可见的。
将特殊物质标记在抗体分子上，通过检测标 记分子来显示抗原抗体复合物的存在，即根 据抗原抗体结合的特异性和标记分子的敏感 性建立的技术，称为标记抗体技术(labelled antibody technique)。
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（二）沉淀试验
可溶性抗原(如细菌的外毒素、内毒素、菌 体裂解液，病毒的可溶性抗原、血清、组 织浸出液等)与相应抗体结合，在适量电解 质存在下，形成肉眼可见的白色沉淀，称 为沉淀试验(precipitation test)。
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Hale Waihona Puke Baidu
抗原可以是多糖、蛋白质、类脂等，抗原分 子较小，单位体积内所含的量多，与抗体结 合的总面积大，故在作定量试验时，为了不 使过剩，通常稀释抗原，并以抗原稀释度作 为沉淀试验效价。
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协同凝集试验
葡萄球菌A蛋白(staphylococal protein A，简称SPA)是 大多数金黄色葡萄球菌的特异性表面抗原，能与多种 哺乳动物IgG分子的Fc片结合。
SPA与IgG结合后，其Fab片暴露于外，并保持其抗体 活性。
当此被覆着特异性抗体的葡萄球菌与相应的抗原结合 时，就可互相连结引起协同凝集反应，简称COAG。
敏感性高，但特异性较差
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可溶性抗原
细菌、立克次氏体及病毒的可溶性抗原 原虫、吸虫、丝虫的浸出液 动物的可溶性物质 激素及各种组织器官浸出液 植物性蛋白质如花粉浸出液等 某些细菌的可溶性多糖
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常用的载体颗粒
有红细胞(“O”型人红细胞，羊红 细胞)、聚苯乙烯胶乳颗粒，
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荧光色素
是能够产生明显荧光，并能作为染料使用 的有机化学物称为荧光色素或荧光染料。
可用于标记的荧光素有异硫氰酸荧光素 (FITC)、四乙基罗丹明(RB 200)和四甲基 异硫氰酸罗丹明(TRITC)
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染色原理及方法
FITC含有异硫氰基，能与IgG分子自由基 结合，形成FITC-IgG复合物，且不影响结 合抗原的能力和特异性，因此，当荧光抗 体与抗原结合后形成有荧光性的抗原抗体 复合物
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乳胶凝集试验
聚苯乙烯乳胶是利用化工原料聚苯乙稀经过乳液聚合 得到的高分子乳胶液，乳胶微球直径约0.8m。
对蛋白质、核酸等高分子物质具有良好的吸附性能。 利用聚苯乙烯乳胶的微球作载体，以吸附某些抗原(或
抗体)，即能用以检测相应的抗体(或抗原)，称为乳胶 凝集反应。(latex agglutination test)
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琼脂免疫扩散试验
琼脂的作用 抗原抗体在琼脂凝胶中扩散，当二者在比例
适当处相遇，即发生沉淀反应，形成肉眼可 见的沉淀带，此种反应称为琼脂免疫扩散， 又简称琼脂扩散和免疫扩散。 ➢ 单向单扩散 单向双扩散 ➢ 双向单扩散 双向双扩散
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免疫电泳技术
免疫电泳 对流免疫电泳 火箭免疫电泳
玻片法：定性试验，适用于新分离细菌的 鉴定或分型
试管法：定量试验，检测待测血清中是否 存在相应抗体和测定抗体含量
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间接凝集试验
将可溶性抗原(或抗体)先吸附于一种与免疫 无关的，一定大小的不溶性颗粒(统称为载 体颗粒)的表面，然后与相应抗体(或抗原)作 用，在有电解质存在的适宜条件下，所出现 的特异性凝集反应称为间接凝集反应。
第
免疫血清学技术
用于检测抗原或抗体的体外
四
免疫反应技术或称免疫检测 技术，这一类技术因一般都
需用血清进行试验，通常称
讲
为免疫血清学反应或免疫血
清学技术
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一、凝聚性试验
抗原与相应抗体结合形成复合物，在有电解质 存在下，相互凝聚形成肉眼可见的凝聚小块或 沉淀物，根据是否产生凝聚现象来判定相应抗 体或抗原，称为凝聚性试验
白陶土、离子交换树脂、火棉胶 致敏颗粒：载体吸附了可溶性抗原
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间接血凝试验
将抗原致敏于红细胞表面，用以检测相应抗体， 在与相应抗体反应时出现肉眼可见凝集，称为间 接血凝试验(passive heamagglutination assay, PHA)
将抗体致敏于红细胞表面，用以检测检样本中相 应抗原，致敏红细胞在与相应抗原反应时发生凝 集，称为反向间接血凝试验(reverse passive heamagglutination assay, RPHA)。