western转膜条件资料

western转膜条件

蛋白来源：RAW264.7 总蛋白

蛋白名称（可保密）：一些转录因子

蛋白分子量：40~70 KD

WB用膜类型、孔径：0.45 NC

转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒流400 mA

转膜时间：60~90 min

PS.其实吧，以我的经验来看，除非目的蛋白特别小，或者特别大，不然转膜时间真的不是那么重要，曾经因为失误，转了15 min就拆下来了，但从丽春红染色来看，跟平常实验也没有太大的区别。

蛋白来源：内皮细胞总蛋白

蛋白名称（可保密）：occludin & AKT

蛋白分子量：65 KD & 56 KD

WB用膜类型、孔径：0.45 PVDF

转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压100 V

转膜时间：60~70 min

设备名字是“Bio-Rad mini”。

蛋白来源：乳鼠心肌细胞和成年鼠心肌组织总蛋白和核蛋白

蛋白名称（可保密）：保密

蛋白分子量：65 KD & 55 KD

WB用膜类型、孔径：PVDF（预先用甲醇处理）

转膜方式（恒压、恒流）：半干转恒压12 V

转膜时间：30-40 min

设备：“Bio-Rad mini”

建议：最开始做过湿转（过夜的那种），太费事费时，效果也不如半干转。

蛋白来源：293T细胞

蛋白名称（可保密）：

蛋白分子量：95 KD & 35 KD

WB用膜类型、孔径：PVDF

转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压90 V-110 V，控制电流不要超过300 mA。

转膜时间：70 min

蛋白来源：肿瘤手术标本

蛋白名称（可保密）：转录因子

蛋白分子量：33 KDa

WB用膜类型、孔径：PVDF膜

转膜方式（恒压、恒流）：350 mA 恒流

转膜时间：150 min

转膜设备：湿转Bio-Rad

说明：相同条件曾用于数个30-70 KDa的蛋白，都能成功转上，不过没有试缩短时间效果如何；实验时没为转膜条件苦恼，倒是电泳时胶的浓度及时间根据不同分子量而有区别。

蛋白来源：成纤维细胞

蛋白名称（可保密）：smad3

蛋白分子量：54 KDa

WB用膜类型、孔径：PVDF膜

转膜方式（恒压、恒流）：350 mA 恒流

转膜时间：150 min

转膜设备：湿转Bio-Rad

蛋白来源：胰腺癌细胞

蛋白名称（可保密）：

蛋白分子量：16 KDa and 42 KDa

WB用膜类型、孔径：PVDF膜

转膜方式（恒压、恒流）：120 V 恒压

转膜时间：90 min

转膜设备：湿转Bio-Rad

蛋白来源：大鼠血管平滑肌细胞

蛋白名称（可保密）：保密

蛋白分子量：72 KD，42 KD 和22 KD

WB用膜类型、孔径：一般的PVDF膜

转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒流一张膜0.26 A，两张膜0.3 A。

转膜时间：90 min

设备：“Bio-Rad mini”

建议：转膜缓冲液最多用3次，最好现用现配，我们用的没有加SDS，转的时候最好能用冰块一类的东西降一下温，这样转的效果要好一些，转的时候一定要把三明治每层之间的气泡除去，同时使滤纸大于膜，膜大于胶，以免烧坏电极。

蛋白来源：大鼠PBMC

蛋白名称（可保密）：保密

蛋白分子量：55 KD

WB用膜类型、孔径：0.22的PVDF膜

转膜方式（恒流）：湿转

转膜时间：60-90 min

设备：“Bio-Rad mini”

建议：转膜液用过两三次之后转膜效果就很差了其它按照常规就好了其实0.22的膜一般不怕转过头以我们的经验，转膜时间、电压其实也有很大范围的调整，并不是非要固定于哪一个最合适，曾经做过一张膜转，17 KD的和170 KD的，按照170 KD的条件，17 KD 的转膜也很好的。

蛋白来源：人非小细胞肺癌细胞系

蛋白名称（可保密）：保密

蛋白分子量：大于250 kD

WB用膜类型、孔径：millipore PVDF膜0.45 um

转膜方式（恒压、恒流）：湿转，恒流0.3A。

转膜时间：180min

设备：“Bio-Rad ”

建议：电转保持电压在70 V以上，保持低温，如果电压低过70就需要换缓冲液了。

蛋白来源：白血病细胞

蛋白名称（可保密）：保密

蛋白分子量：28 KD

WB用膜类型、孔径：0.45的NC膜

转膜方式（恒流）：湿转，90 min，0.25 A

设备：“Bio-Rad ”

建议：海绵厚度要合适，一次转磨用的海绵太薄，导致三明治没夹紧，转膜后拿出来一看，marker都变得七扭八歪。但是有前辈说垫的海绵太厚可能将胶压断，没经历过，不知道是不是会有这种情况。

蛋白来源：肿瘤细胞

蛋白名称（可保密）：磷酸化蛋白

蛋白分子量：10-200 KDa

WB用膜类型、孔径：millipore PVDF膜0.45 um

转膜方式（恒压、恒流）：120 v 恒压

转膜时间：120 min

转膜设备：湿转Bio-Rad

建议：转膜缓冲液只用2次，基本都转上，5%BSA封闭，减少背景。

蛋白来源：胰腺β细胞

蛋白名称（可保密）：******

蛋白分子量：90-130 KDa

WB用膜类型、孔径：PVDF膜

转膜方式（恒压、恒流）：250 mA 恒流

转膜时间：150 min

转膜设备：湿转

蛋白来源：原核表达

蛋白名称（可保密）：保密

蛋白分子量：38 KD

WB用膜类型、孔径：0.45 NC

转膜方式（恒压、恒流）：湿转恒压：100 V

转膜时间：120 min