钼锑抗比色法测定可溶性磷含量

钼锑抗比色法测定可溶性磷含量

试剂准备：

钼锑贮存溶液：量取153ml浓硫酸(分析纯，密度1.84g/ml)，缓缓加入到400ml 蒸馏水中，不断搅拌，冷却。另称取经磨细的钼酸铵[(NH4)6Mo7O24·H2O，分析纯]10g溶于温度约60℃300ml水中，冷却。然后将硫酸溶液缓缓倒入钼酸铵溶液中。再加入0.5％酒石酸锑钾[KSbOC4H4O6·1/2H2O，分析纯]溶液100ml，冷却后，加水稀释至1000ml，摇匀，贮于棕色试剂瓶中，此贮备液含钼酸铵1％，硫酸2.75mol/L。

钼锑抗显色剂：称取1.50g抗坏血酸溶于100ml钼锑贮存溶液中，此溶液有效期不长，宜随配随用。

5mg/L磷标准溶液：0.4394g在50℃烘干的磷酸二氢钾(KH2PO4。分析纯)，100ml水，加5ml浓硫酸(防腐)，用水定容到1L，浓度为100mg/L磷(P)，此溶液可以长期保存。吸取上述溶液10ml于200ml容量瓶中，加水至标度，浓度为5mg/L 磷(P)标准溶液，此溶液不宜久存。

标准曲线的绘制：

分别准确吸取5mg/L磷（K2HPO4）标准溶液（也可用摩尔浓度）0、2、4、6、8、10ml于50ml容量瓶中，同时加入与显色测定所用的样品溶液等体积的空白溶液，加入二硝基酚指示剂2~3滴，并用100g/L碳酸钠溶液或50ml/L硫酸溶液调节至溶液刚呈微黄色，准确加入5ml钼锑抗显色剂，摇匀，加水定容，即得含磷(P)量分别为0.0、0.2、0.4、0.8、1.0mg/L的标准溶液系列。摇匀，于室温15℃以上，放置30min。在波长700nm处，测定其吸光度，以吸光度为纵坐标，磷浓度(mg/L)为横坐标，绘制标准曲线。

可溶性磷测定（显色与比色）：

将待测液体（细菌真菌培养液离心后取上清）适量(第一次做需摸索加入量)移至50ml容量瓶中，用水稀释至总体积约3/5处，加入二硝基酚指示剂1~2滴，并用100g/L碳酸钠（或氢氧化钠）溶液或50ml/L硫酸（或盐酸）溶液调节至溶液刚呈微黄色，准确加入5ml钼锑抗显色剂，摇匀，加水定容，室温15℃以上，

放置30min（8h内）。显色的样品溶液在722分光光度计上，以空白(溶剂，细菌真菌实验为不接菌体的空白培养基)为参比液调节仪器零点，进行比色测定，读取吸光度OD700nm，再从标准曲线上查得相应的含磷量[14]。