流式细胞的原理及临床应用

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通过流式细胞仪我们可以得到以下信息
- 相对细胞颗粒密度和内部复杂度(SSC) - 相对细胞大小(FSC) - 染色过细胞的相对荧光强度
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流式细胞仪标本准备 染色的一般原则及方法
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标本来源：
外周血、骨髓、组织块、培养细胞、脱落 细胞及其他。 以及血清或各类体液样本。
• NK细胞表面标志物：CD3-/CD16+CD56+
流式的原理及临床应用
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什么是流式细胞仪？
▪ 检测流动中细胞（颗粒）的仪器
▪ 目标物可以是细胞、细菌或各种微粒 0.5um~50um范围内
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流式细胞仪原理介绍
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流式细胞仪基本原理示意图
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流式细胞仪检测什么信号？
抗原
激光束
细胞
抗体
荧光
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抗体染色一般方法
目标细胞数量及检测终浓度：1×106/ml
▪ 外周血白细胞分析：100ul全血 ▪ 血小板分析：1~5ul全血（根据样本血小板数量） ▪ 红细胞分析：1ul全血（根据样本中红细胞数稀释后使用） ▪ 骨髓：100ul ▪ 其他样本，计数后决定使用体积
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孵育、溶血、固定
▪ Anti-HLA-B27 Kit(美国BD Biosciences公司；CAT:340183)，
▪ 其中包括：1、Anti-HLA-B27-FITC/CD3-PE
▪
2、HLA-B27 Calibration beads
▪
3、FACS Lysing Solution
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HLA-B27流式细胞仪检测
孩，与慢性虹膜睫状体炎(30%)，阳性的ANA (80%)和HLA DR5关联，
却不是B27。
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HLA-B27的临床检测
▪ HLA-B27属于1型MHC基因。基本上表达在机体所有有核细 胞上，特别是淋巴细胞表面有丰富的含量。使用荧光定量标 准微球，校正HLA-B27实验条件后，测定样本中T淋巴细胞 HLA-B27表达水平。若HLA-B27表达水平大于标准微球设定 MARK，则为阳性结果；若HLA-B27表达水平低于标准微球 设定MARK，则为阴性结果。
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1、 HLA-B27的检测
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B27与强直性脊柱炎
强直性脊柱炎（ankylosing spondylistis）意为弯曲的脊柱。它是 和种慢性、进行性和炎性疾病，主要 累及骶骼关节、脊柱、脊柱骨软组织 及四肢关节，表现为椎间盘维环和纤 维环附近结缔组织的骨化，椎间动关 节和四肢关节滑膜的炎症和增生，严 重者可失去劳动能力。强直性脊柱炎 是血清阴性脊柱关节病中具有代表性 的疾病，临床上曾长期把AS 误认为是 类风湿性关节炎的一个亚型，60 年代 以来人们才认识到期无论从病因学、 遗传学、流行病学和临床表现特点等 诸多方面来看，AS 都是一种不同于类 风湿性关节炎的独立疾病。
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2、淋巴细胞亚群分析
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淋巴细胞亚群基础知识
▪ T淋巴细胞：主要杀伤病原体感染细胞及肿瘤细胞。 ▪ 表面标志物：CD3，与TCR形成复合体，是T细胞识
别抗原和转导信号的主要单位。 ▪ CD3+/CD4+：辅助性T细胞 ▪ CD3+/CD8+：杀伤性T细胞
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▪ 抗体孵育：室温下避光15分钟（某些情况下如：细胞 内因子检测需冰育）
▪ 溶血：如样本含中有红细胞需溶血 ▪ 样本溶血后离心上机检测（固定后可放置较长时间）
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流式细胞仪分析报告及图谱
▪ SS（侧向散射光）--反应细胞内物 质的多少
FS（前向散射光）--反应细胞大小
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• CD8+T细胞又称细胞毒性T细胞，Tc或CTL，它在T细胞免 疫应答中发挥重要功能。
• Tc细胞识别抗原活化后释放胞浆内颗粒毒素：穿孔素 perforin和颗粒酶granzyme，杀伤靶细胞。
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B淋巴细胞
▪ B淋巴细胞是免疫系统中的抗体产生细胞。 ▪ 1，产生的抗体可与抗原起特异性的结合，如中
就目前的研究文献而言，HLA-B27 与
AS 并非绝对相关，有些AS 患者表现
为HLA-B27阴性，而且并非所有HLA-
精选ppt课件B27 阳性者均出现AS 症状。
Baidu Nhomakorabea
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HLA-B27诊断的临床意义
▪ 强直性脊柱炎－90-100% 的强直性脊柱炎患者HLA－B27为阳性。但 是HLA-B27阳性的人群中只有8－20％是强直性脊柱炎。
和细菌的外毒素使其失去毒性作用； ▪ 2，抗体与抗原结合后形成的复合物易被吞噬细
胞清除； ▪ 3，抗体与抗原结合后再结合补体清除病原体。 ▪ B细胞特异性标志物：CD19
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NK细胞
• NK自然杀伤细胞：识别病毒感染细胞表面表 达的相应配体，NK细胞一经识别病毒感染细 胞后即对之施加杀伤作用。
▪ 瑞特综合征－65－90％瑞特综合症患者HLA-B27为阳性。如果 HLAB27+个体是非淋菌性尿道炎，那么有20-25%的可能性发展为瑞 特综合症，只有1％的可能性正常。HLA－B27不是该疾病发生的必要 条件，但是却与病程发展有紧密联系。
▪ “反应性关节炎”－是一种自身限制的少关节型关节炎伴随着革兰氏 阴性细菌如杆菌性痢疾，沙门氏菌，弧形杆菌，耶尔森氏菌和至贺氏 菌引起的胃肠感染。
▪ 银屑病关节炎 - 90%的银屑病关节炎联合荐肠关节炎和脊椎炎患者 HLA B27阳性。
▪ 急性前葡萄膜炎－通常表现为疼痛，畏光和流泪。可能是虹膜感染或 结合了睫状体或视网膜萎缩。
▪ 青少年风湿症/慢性关节炎II－ 这些儿童中75％为HLA B27+。相反，
青少年风湿症/慢性关节炎I，同样也是少关节性的，但是更常见于女
设门：选择要分析的细胞群体
设定阴性、阳性范围
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目前流式细胞仪临床检测项目
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流式细胞仪的临床应用
HIV免疫分型，CD4绝对计数 白血病和淋巴瘤的免疫分型 肿瘤的细胞周期和倍体分析 网织红细胞计数 细胞移植的交叉配型和免疫状态监测 干细胞计数 残量白血病细胞检查 HLA-B27检查 血小板功能及相关疾病