一般毒性实验
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20格 20格 20格 8单位
100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0
死亡率（%）
64单位
单位/20格决定了
敏感性
8单位 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 剂量（mg）
(二) 一般毒性试验
100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0
8单位
死亡率（%）
64单位
LD50
百度文库8单位 0
10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 剂量
(二) 一般毒性试验
经典急性毒性试验
LD50 or LC50
曲线拟合法
插值法 累积法、改良寇氏 法、霍恩法
Bliss 法
(二) 一般毒性试验
LD50的测定
方法 霍恩法 改良寇氏法 序贯法 Bliss法 优点 使用动物数少； 计算简便 计算简便， 准确率高 节省动物 设计要求不太严格 最精确 缺点 95% 可 信 限 范 围 大 ， 精确度不够 确定最低和最高 剂量组 化学物引起动物 快速死亡 计算复杂
经呼吸道：持续4h。 注射染毒：腹腔注射。
(二) 一般毒性试验
（四）剂量选择和分组
亚慢性毒性的剂量选择 阴性对照组 低剂量组 中剂量组 高剂量组
急性毒性的阈剂量 1/20~1/5 LD50
慢性毒性的剂量选择
阴性对照组 低剂量组 中剂量组 高剂量组
亚慢性阈剂量或其 1/5~1/2 1/10 LD50
性别差异 效应的时间变化趋势 效应差异的大小 历史对照的作用：差异是否由受试物引起
参考资源
种属和品系： 啮齿类常用小鼠或大鼠。非啮齿类常
用狗或猴。 变异不应超过该批平均体重的 20％。 年龄和体重： 小鼠： 18 ～ 22 克。大鼠： 180-220 克 。 小动物每组10只。雌雄各半。 数量和性别：
(二) 一般毒性试验
剂量与分组
有相关资料
了解结构和性质相似化学物的毒 性资料，确定预期毒性中值。 以此与其毒性中值作为待测化学 物的中间剂量组，并在该剂量的 上下各设2个剂量组为预试验剂量 。
中毒后常见的表现
皮肤充血 紫绀 被毛蓬松 污秽 眼球突出，充血，角膜混浊，血性分泌物 散大或缩小 流涎 流泪 鼻孔溢液 鼻翼扇动 徐缓 过速 困难 衰竭 肿胀 分泌物增多 会阴部污秽 脱出 体位异常 叫声异常 活动异常 呆卧少动 痉挛 抽搐 震颤 强直 麻痹 运动失调 易兴奋 感觉迟钝或过敏 反应低下或过高 减弱或消失 松驰或紧张
对人可能致死的估计量
g/kg体重 g/60kg体重
<1 1
50 500 5000
<10 10
100 1000 10000
<5 5
44 350 2180
<0.05 0.05
0.5 5 >15
0.1 3
30 250 >1000
(二) 一般毒性试验
第二节：局部毒性试验
急性眼刺激试验
(二) 一般毒性试验
改良寇氏法适用条件
剂量按等比级数分组； 各组动物数应相等；
死亡率呈正态分布。最小剂量组的死亡率 <20% ，
最大剂量组的死亡率>80%。
(二) 一般毒性试验
某化学物LD50的测定
选择实验动物 剂量与分组 染毒途径与方式 毒性反应观察 观察时间
(二) 一般毒性试验
选择试验动物
组距：2~4倍
组距：2~10倍
(二) 一般毒性试验
（五）观察指标
一般观察：外观体征、行为活动、体重、摄食 眼部检查 血生化指标 尿常规检查 体温、心电图检查 病理检查：大体解剖、组织病理学 特异性指标
(二) 一般毒性试验
结果评价
剂量依赖性趋势 反应重现性 相关指标变化
慢性毒性试验
年龄：大鼠 50~70g 狗 <4月 小鼠 初断乳 数量：小动物≥40 大动物≥8 性别：雌雄各半
(二) 一般毒性试验
（二）染毒期限
6个月－1年 3－6个月
食品毒理学
工业毒理学
染毒期限
预期寿命 6个月－1年
致癌试验
环境毒理学
(二) 一般毒性试验
（三）实验动物染毒方式 经口: 鼠常用灌胃、喂饲法。犬用胶囊法。
经注射染毒
(二) 一般毒性试验
毒性作用观察
中毒症状 死亡情况
病理变化
(二) 一般毒性试验
器官或系统
皮肤和被毛 眼睛 植物神经系统 呼吸系统 泌尿生殖系统 CNS和 神经肌肉系统
观察项目
颜色张力 眼睑 眼球 角膜 瞳孔大小 腺体分泌 鼻 呼吸表现 阴户 乳腺 阴茎 行为 运动状态 对刺激反应性 脑脊髓反射 肌肉张力
无相关资料
最大耐受量试验。最大耐受剂 量， WHO 规定经口 5g/kg 。不死 亡，不做。死亡，继续做。 设定1mg/kg为最低剂量组，4、 16、64、128mg/kg预实验。
(二) 一般毒性试验
染毒方式
经口染毒 呼吸道染毒 经皮肤染毒
灌胃、喂食、吞咽胶囊 静式吸入、动式吸入 定性试验、定量试验 注射量的规定
(二) 一般毒性试验
亚慢性和慢性毒性试验主要目的
A
毒性效应谱、毒作用特点、靶器官
毒作用机制、毒作用可逆性
剂量-反应关系 毒效应差异，确定安全系数，结果外推至人
B C D
(二) 一般毒性试验
研究方法
（一）实验动物选择
亚慢性毒性试验
年龄：大鼠50~100g 狗 4~6月 数量：小动物≥20 大动物≤8 性别：雌雄各半
1
(二) 一般毒性试验
1 2
急性毒性试验 局部毒性试验 亚慢性和慢性毒性试验
3
(二) 一般毒性试验
第一节：急性毒性试验
试验目的
急性毒性参数
危险性评估
慢性毒性试验
毒作用机制
(二) 一般毒性试验
第一节：急性毒性试验
经口急性毒性试验：LD50 经呼吸道静式吸入式急性毒性试验：LC50
经皮肤急性毒性试验：LD50
(二) 一般毒性试验
乙醇 氯化钠 硫酸亚铁 硫酸吗啡 苯巴比妥钠 印防己毒素（苦味素） 硫酸士的宁（番木鳖碱） 尼古丁 筒箭毒碱 密胆碱 河豚毒素 二噁英 肉毒杆菌毒素
10000 4000 1500 900 150 5 2 1 0.5 0.2 0.1 0.001 0.00001
(二) 一般毒性试验
(二) 一般毒性试验
(二) 一般毒性试验
第三节：亚慢性和慢性毒性试验
概念
亚慢性毒性： 实验动物或
人连续较长期（约相当于生 命周期的 1/10 ）接触外源化 学物所产生的中毒效应。
(二) 一般毒性试验
第三节：亚慢性和慢性毒性试验
概念
慢性毒性： 实 验动物或人
长期接触外源化学物所引起 的中毒效应。长期对啮齿类 动物至少 12 个月，也可终身 染毒。
皮肤刺激试验
(二) 一般毒性试验
实验动物：家兔 剂量：一次剂量 染毒方式：一侧眼结膜囊内 观察指标：结膜、角膜、虹膜 观察时间：7天，可延长至21天
(二) 一般毒性试验
(二) 一般毒性试验
实验动物：家兔、豚鼠
剂量：一次或多次剂量 染毒方式：涂抹于动物皮肤上
观察指标：红斑、水肿
观察时间：不超过14天
(二) 一般毒性试验
观察时间
一般为14天
C57
Kunming
(二) 一般毒性试验
急性毒性分级
外源化合物的急性毒性分级(WHO，2003)
急性分级 剧 毒 高 毒
中等毒 低 微 毒 毒 大鼠经口 LD50(mg/kg) 6只大鼠吸入4h， 死亡2-4只浓度 (ppm) 兔经皮LD50 (mg/kg体重)
100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0
死亡率（%）
64单位
单位/20格决定了
敏感性
8单位 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 剂量（mg）
(二) 一般毒性试验
100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0
8单位
死亡率（%）
64单位
LD50
百度文库8单位 0
10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 剂量
(二) 一般毒性试验
经典急性毒性试验
LD50 or LC50
曲线拟合法
插值法 累积法、改良寇氏 法、霍恩法
Bliss 法
(二) 一般毒性试验
LD50的测定
方法 霍恩法 改良寇氏法 序贯法 Bliss法 优点 使用动物数少； 计算简便 计算简便， 准确率高 节省动物 设计要求不太严格 最精确 缺点 95% 可 信 限 范 围 大 ， 精确度不够 确定最低和最高 剂量组 化学物引起动物 快速死亡 计算复杂
经呼吸道：持续4h。 注射染毒：腹腔注射。
(二) 一般毒性试验
（四）剂量选择和分组
亚慢性毒性的剂量选择 阴性对照组 低剂量组 中剂量组 高剂量组
急性毒性的阈剂量 1/20~1/5 LD50
慢性毒性的剂量选择
阴性对照组 低剂量组 中剂量组 高剂量组
亚慢性阈剂量或其 1/5~1/2 1/10 LD50
性别差异 效应的时间变化趋势 效应差异的大小 历史对照的作用：差异是否由受试物引起
参考资源
种属和品系： 啮齿类常用小鼠或大鼠。非啮齿类常
用狗或猴。 变异不应超过该批平均体重的 20％。 年龄和体重： 小鼠： 18 ～ 22 克。大鼠： 180-220 克 。 小动物每组10只。雌雄各半。 数量和性别：
(二) 一般毒性试验
剂量与分组
有相关资料
了解结构和性质相似化学物的毒 性资料，确定预期毒性中值。 以此与其毒性中值作为待测化学 物的中间剂量组，并在该剂量的 上下各设2个剂量组为预试验剂量 。
中毒后常见的表现
皮肤充血 紫绀 被毛蓬松 污秽 眼球突出，充血，角膜混浊，血性分泌物 散大或缩小 流涎 流泪 鼻孔溢液 鼻翼扇动 徐缓 过速 困难 衰竭 肿胀 分泌物增多 会阴部污秽 脱出 体位异常 叫声异常 活动异常 呆卧少动 痉挛 抽搐 震颤 强直 麻痹 运动失调 易兴奋 感觉迟钝或过敏 反应低下或过高 减弱或消失 松驰或紧张
对人可能致死的估计量
g/kg体重 g/60kg体重
<1 1
50 500 5000
<10 10
100 1000 10000
<5 5
44 350 2180
<0.05 0.05
0.5 5 >15
0.1 3
30 250 >1000
(二) 一般毒性试验
第二节：局部毒性试验
急性眼刺激试验
(二) 一般毒性试验
改良寇氏法适用条件
剂量按等比级数分组； 各组动物数应相等；
死亡率呈正态分布。最小剂量组的死亡率 <20% ，
最大剂量组的死亡率>80%。
(二) 一般毒性试验
某化学物LD50的测定
选择实验动物 剂量与分组 染毒途径与方式 毒性反应观察 观察时间
(二) 一般毒性试验
选择试验动物
组距：2~4倍
组距：2~10倍
(二) 一般毒性试验
（五）观察指标
一般观察：外观体征、行为活动、体重、摄食 眼部检查 血生化指标 尿常规检查 体温、心电图检查 病理检查：大体解剖、组织病理学 特异性指标
(二) 一般毒性试验
结果评价
剂量依赖性趋势 反应重现性 相关指标变化
慢性毒性试验
年龄：大鼠 50~70g 狗 <4月 小鼠 初断乳 数量：小动物≥40 大动物≥8 性别：雌雄各半
(二) 一般毒性试验
（二）染毒期限
6个月－1年 3－6个月
食品毒理学
工业毒理学
染毒期限
预期寿命 6个月－1年
致癌试验
环境毒理学
(二) 一般毒性试验
（三）实验动物染毒方式 经口: 鼠常用灌胃、喂饲法。犬用胶囊法。
经注射染毒
(二) 一般毒性试验
毒性作用观察
中毒症状 死亡情况
病理变化
(二) 一般毒性试验
器官或系统
皮肤和被毛 眼睛 植物神经系统 呼吸系统 泌尿生殖系统 CNS和 神经肌肉系统
观察项目
颜色张力 眼睑 眼球 角膜 瞳孔大小 腺体分泌 鼻 呼吸表现 阴户 乳腺 阴茎 行为 运动状态 对刺激反应性 脑脊髓反射 肌肉张力
无相关资料
最大耐受量试验。最大耐受剂 量， WHO 规定经口 5g/kg 。不死 亡，不做。死亡，继续做。 设定1mg/kg为最低剂量组，4、 16、64、128mg/kg预实验。
(二) 一般毒性试验
染毒方式
经口染毒 呼吸道染毒 经皮肤染毒
灌胃、喂食、吞咽胶囊 静式吸入、动式吸入 定性试验、定量试验 注射量的规定
(二) 一般毒性试验
亚慢性和慢性毒性试验主要目的
A
毒性效应谱、毒作用特点、靶器官
毒作用机制、毒作用可逆性
剂量-反应关系 毒效应差异，确定安全系数，结果外推至人
B C D
(二) 一般毒性试验
研究方法
（一）实验动物选择
亚慢性毒性试验
年龄：大鼠50~100g 狗 4~6月 数量：小动物≥20 大动物≤8 性别：雌雄各半
1
(二) 一般毒性试验
1 2
急性毒性试验 局部毒性试验 亚慢性和慢性毒性试验
3
(二) 一般毒性试验
第一节：急性毒性试验
试验目的
急性毒性参数
危险性评估
慢性毒性试验
毒作用机制
(二) 一般毒性试验
第一节：急性毒性试验
经口急性毒性试验：LD50 经呼吸道静式吸入式急性毒性试验：LC50
经皮肤急性毒性试验：LD50
(二) 一般毒性试验
乙醇 氯化钠 硫酸亚铁 硫酸吗啡 苯巴比妥钠 印防己毒素（苦味素） 硫酸士的宁（番木鳖碱） 尼古丁 筒箭毒碱 密胆碱 河豚毒素 二噁英 肉毒杆菌毒素
10000 4000 1500 900 150 5 2 1 0.5 0.2 0.1 0.001 0.00001
(二) 一般毒性试验
(二) 一般毒性试验
(二) 一般毒性试验
第三节：亚慢性和慢性毒性试验
概念
亚慢性毒性： 实验动物或
人连续较长期（约相当于生 命周期的 1/10 ）接触外源化 学物所产生的中毒效应。
(二) 一般毒性试验
第三节：亚慢性和慢性毒性试验
概念
慢性毒性： 实 验动物或人
长期接触外源化学物所引起 的中毒效应。长期对啮齿类 动物至少 12 个月，也可终身 染毒。
皮肤刺激试验
(二) 一般毒性试验
实验动物：家兔 剂量：一次剂量 染毒方式：一侧眼结膜囊内 观察指标：结膜、角膜、虹膜 观察时间：7天，可延长至21天
(二) 一般毒性试验
(二) 一般毒性试验
实验动物：家兔、豚鼠
剂量：一次或多次剂量 染毒方式：涂抹于动物皮肤上
观察指标：红斑、水肿
观察时间：不超过14天
(二) 一般毒性试验
观察时间
一般为14天
C57
Kunming
(二) 一般毒性试验
急性毒性分级
外源化合物的急性毒性分级(WHO，2003)
急性分级 剧 毒 高 毒
中等毒 低 微 毒 毒 大鼠经口 LD50(mg/kg) 6只大鼠吸入4h， 死亡2-4只浓度 (ppm) 兔经皮LD50 (mg/kg体重)